一种枸橼酸托法替布起始物料的液相色谱检测方法与流程

1.本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种枸橼酸托法替布起始物料的液相色谱检测方法，适用于分离目标物料与其对映异构体、非对映异构体，操作简单、分离度大、灵敏度高、准确性好。


背景技术：

2.枸橼酸托法替布片是一种口服蛋白酪氨酸激酶抑制剂，用于治疗类风湿关节炎患者。合成枸橼酸托法替布的起始物料1-苄基-4-甲基-3-甲氨基哌啶双盐酸盐有两个手性中心，具有rr、rs、sr、ss四种光学异构体，其中，rr构型与ss构型为一对对映异构体，rs构型和sr构型为非对映异构体，只有rr构型的1-苄基-4-甲基-3-甲氨基哌啶双盐酸盐才是有效合成枸橼酸托法替布的目标物料，而在现有技术下，商业购买的起始物料中除rr构型外，还包含有rs、sr、ss构型中至少一种光学异构体杂质，在常规液相色谱条件下难以同时实现目标物料与其对映异构体、非对映异构体的分离。


技术实现要素：

3.本发明的目的是克服现有技术存在的上述问题，提供一种能同时分离对映异构体、非对映异构体的枸橼酸托法替布起始物料的液相色谱检测方法。
4.为实现以上目的，本发明提供了以下技术方案：
5.一种枸橼酸托法替布起始物料的液相色谱检测方法，所述检测方法为：先将由枸橼酸托法替布起始物料制成的待检测溶液注入到高效液相色谱柱中，然后以流动相a进行等度洗脱，最后进入紫外检测器下进行检测；
6.其中，所述高效液相色谱柱为以维生素-三-(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂的正相手性色谱柱，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按65-90:2-9:8-26:0.02-0.07:0.02-0.07的体积比混合得到的混合溶液，所述枸橼酸托法替布起始物料包括目标物料以及目标物料的异构体，所述目标物料的结构式为：
[0007][0008]
所述异构体包括对映异构体和非对映异构体中的至少一种，所述对映异构体的结构式为：
[0009][0010]
所述非对映异构体包括化合物ⅰ和化合物ⅱ中的至少一种，所述化合物ⅰ的结构式为：
[0011][0012]
所述化合物ⅱ的结构式为：
[0013][0014]
所述待检测溶液中枸橼酸托法替布起始物料的浓度为200-2000μg/ml。
[0015]
所述紫外检测器中紫外光波长为210-220nm。
[0016]
所述流动相a的流速为0.7-0.9ml/min、高效液相色谱柱的柱温为15-25℃。
[0017]
所述待检测溶液中的溶剂为乙醇。
[0018]
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
[0019]
本发明一种枸橼酸托法替布起始物料的液相色谱检测方法中所采用的高效液相色谱柱为以维生素-三-(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂的正相手性色谱柱，所使用的流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按65-90:2-9:8-26:0.02-0.07:0.02-0.07的体积比混合得到的混合溶液，该方法能够实现目标物料与对映异构体、非对映异构体的完全分离，不仅具有较好的分离效果，而且操作简单、灵敏度高。因此，本发明能够实现目标物料与对映异构体、非对映异构体的完全分离，不仅分离效果好，而且操作简单、灵敏度高。
附图说明
[0020]
图1为实施例1的hplc图谱。
[0021]
图2为实施例2的hplc图谱。
[0022]
图3为实施例3的hplc图谱。
[0023]
图4为实施例4的hplc图谱。
[0024]
图5为实施例5的hplc图谱。
[0025]
图6为实施例6的hplc图谱。
[0026]
图7为实施例7的hplc图谱。
[0027]
图8为实施例8的hplc图谱。
[0028]
图9为实施例9的hplc图谱。
[0029]
图10为对比例1的hplc图谱。
[0030]
图11为对比例2的hplc图谱。
[0031]
图12为对比例3的hplc图谱。
[0032]
图13为检测例1的hplc图谱。
[0033]
图14为检测例2的hplc图谱。
[0034]
图15为检测例3的hplc图谱。
[0035]
图16为检测例4的hplc图谱。
[0036]
图17为检测例5的hplc图谱。
具体实施方式
[0037]
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。
[0038]
一种枸橼酸托法替布起始物料的液相色谱检测方法，所述检测方法为：先将由枸橼酸托法替布起始物料制成的待检测溶液注入到高效液相色谱柱中，然后以流动相a进行等度洗脱，最后进入紫外检测器下进行检测；
[0039]
其中，所述高效液相色谱柱为以维生素-三-(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂的正相手性色谱柱，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按65-90:2-9:8-26:0.02-0.07:0.02-0.07的体积比混合得到的混合溶液，所述枸橼酸托法替布起始物料包括目标物料以及目标物料的异构体，所述目标物料的结构式为：
[0040][0041]
所述异构体包括对映异构体和非对映异构体中的至少一种，所述对映异构体的结构式为：
[0042][0043]
所述非对映异构体包括化合物ⅰ和化合物ⅱ中的至少一种，所述化合物ⅰ的结构式为：
[0044][0045]
所述化合物ⅱ的结构式为：
[0046][0047]
所述待检测溶液中枸橼酸托法替布起始物料的浓度为200-2000μg/ml。
[0048]
所述紫外检测器中紫外光波长为210-220nm。
[0049]
所述流动相a的流速为0.7-0.9ml/min、高效液相色谱柱的柱温为15-25℃。
[0050]
所述待检测溶液中的溶剂为乙醇。
[0051]
实施例1：
[0052]
采用本发明一种枸橼酸托法替布起始物料的液相色谱检测方法对待检测溶液进行检测，该方法具体按照以下步骤进行：
[0053]
步骤一、制备各供试品溶液：
[0054]
1、精密量取10mg起始物料于容量瓶中，加入乙醇溶解并稀释至10ml，得到起始物料供试品溶液，其中，所述起始物料由申请人购于上海博氏医药科技有限公司，起始物料为目标物料、化合物ⅰ和化合物ⅱ的混合物，起始物料的cas number为1062580-52-2；
[0055]
2、先精密量取5mg对映异构体标准品于容量瓶中，加入乙醇溶解并稀释至50ml，得到对映异构体贮备液，然后精密量取对映异构体贮备液1ml于另一容量瓶中，加入乙醇稀释至10ml，得到对映异构体供试品溶液；
[0056]
3、先精密量取5mg化合物ⅰ标准品于容量瓶中，加入乙醇溶解并稀释至50ml，得到化合物ⅰ贮备液，然后精密量取化合物ⅰ贮备液1ml于另一容量瓶中，加入乙醇稀释至20ml，得到化合物ⅰ供试品溶液；
[0057]
4、先精密量取5mg化合物ⅱ标准品于容量瓶中，加入乙醇溶解并稀释至50ml，得到化合物ⅱ贮备液，然后精密量取化合物ⅱ贮备液1ml于另一容量瓶中，加入乙醇稀释至20ml，得到化合物ⅱ供试品溶液；
[0058]
5、先精密量取起始物料10mg于容量瓶中并加入乙醇使其溶解，然后依次加入对映异构体贮备液1ml、化合物ⅰ贮备液0.5ml、化合物ⅱ贮备液0.5ml，最后再次加入乙醇稀释至10ml，得到混合供试品溶液；
[0059]
所述目标物料、对映异构体、化合物ⅰ和化合物ⅱ的结构式见表1：
[0060]
表1目标物料、对映异构体、化合物ⅰ和化合物ⅱ的结构式
[0061][0062][0063]
步骤二、先将待检测溶液注入到高效液相色谱柱中，然后以流动相a进行等度洗脱，最后进入紫外检测器下进行检测，其中，所述待检测溶液为混合供试品溶液，所述高效液相色谱柱是以维生素-三-(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂的菲罗门chiral mx(2)柱，其规格为4.6
×
250mm、5μm，其柱温为20℃，其进样量为10μl，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按90:2:8:0.02:0.02的体积比混合得到的混合溶液，流动相a的流速为0.8ml/min，所述紫外检测器的紫外光波长为210nm，检测到的hplc图谱如图1所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0064]
实施例2：
[0065]
与实施例1的不同之处在于：
[0066]
步骤二中，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按70:8:22:0.06:0.06的体积比混合得到的混合溶液，检测到的hplc图谱如图2所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0067]
实施例3：
[0068]
与实施例1的不同之处在于：
[0069]
步骤二中，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按65:9:26:0.07:0.07的体积比混合得到的混合溶液，检测到的hplc图谱如图3所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0070]
实施例4：
[0071]
与实施例1的不同之处在于：
[0072]
步骤二中，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按80:5:15:
0.04:0.04的体积比混合得到的混合溶液，所述高效液相色谱柱的柱温为15℃，检测到的hplc图谱如图4所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0073]
实施例5：
[0074]
与实施例4的不同之处在于：
[0075]
步骤二中，所述高效液相色谱柱的柱温为25℃，检测到的hplc图谱如图5所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0076]
实施例6：
[0077]
与实施例1的不同之处在于：
[0078]
步骤二中，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按80:5:15:0.04:0.04的体积比混合得到的混合溶液，所述流动相a的流速为0.76ml/min，检测到的hplc图谱如图6所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0079]
实施例7：
[0080]
与实施例6的不同之处在于：
[0081]
步骤二中，所述流动相a的流速为0.84ml/min，检测到的hplc图谱如图7所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0082]
实施例8：
[0083]
与实施例1的不同之处在于：
[0084]
步骤二中，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按80:5:15:0.04:0.04的体积比混合得到的混合溶液，所述紫外检测器的紫外光波长为215nm，检测到的hplc图谱如图8所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0085]
实施例9：
[0086]
与实施例8的不同之处在于：
[0087]
步骤二中，所述紫外检测器的紫外光波长为220nm，检测到的hplc图谱如图9所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0088]
对比例1：
[0089]
与实施例1的不同之处在于：
[0090]
步骤二中，所述高效液相色谱柱是以直链淀粉-三-(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂的大赛路ad-h柱，其规格为4.6
×
250mm、5μm，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按80:5:15:0.04:0.04的体积比混合得到的混合溶液，检测到的hplc图谱如图10所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0091]
对比例2：
[0092]
与对比例1的不同之处在于：
[0093]
步骤二中，所述高效液相色谱柱是以维生素-三-(3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂的大赛路oz-h柱，检测到的hplc图谱如图11所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0094]
对比例3：
[0095]
与对比例1的不同之处在于：
[0096]
步骤二中，所述高效液相色谱柱是以维生素-三-(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)为填充剂的菲罗门chiral mx(2)柱，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按95:1:4:0.01:0.01的体积比混合得到的混合溶液，检测到的hplc图谱如图12所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2。
[0097]
检测例1：
[0098]
与实施例1的不同之处在于：
[0099]
步骤二中，所述待检测溶液为起始物料供试品溶液，所述流动相a为由正己烷、乙醇、甲醇、二乙胺、三氟乙酸按80:5:15:0.04:0.04的体积比混合得到的混合溶液，检测到的hplc图谱如图13所示，所述1401asim2的保留时间、理论板数、拖尾因子、分离度最小值见表2，1401asim2的相对保留时间见表3。
[0100]
检测例2：
[0101]
与检测例1的不同之处在于：
[0102]
步骤二中，所述待检测溶液为对映异构体供试品溶液，检测到的hplc图谱如图14所示，所述1401asim21的保留时间和相对保留时间见表3。
[0103]
检测例3：
[0104]
与检测例1的不同之处在于：
[0105]
步骤二中，所述待检测溶液为化合物ⅰ供试品溶液，检测到的hplc图谱如图15所示，所述1401asim22的保留时间和相对保留时间见表3。
[0106]
检测例4：
[0107]
与检测例1的不同之处在于：
[0108]
步骤二中，所述待检测溶液为化合物ⅱ供试品溶液，检测到的hplc图谱如图16所示，所述1401asim23的保留时间和相对保留时间见表3。
[0109]
检测例5：
[0110]
与检测例1的不同之处在于：
[0111]
步骤二中，所述待检测溶液为混合供试品溶液，检测到的hplc图谱如图17所示。
[0112]
数据分析：
[0113]
表2各实验中1401asim2的保留时间
[0114] 保留时间(min)理论板数拖尾因子分离度最小值实施例116.10197361.131.67实施例211.355101791.091.78实施例39.43599631.001.53实施例413.56295951.111.80实施例512.873103721.121.76实施例613.895100961.131.91实施例712.73196921.121.87实施例813.25297141.141.86实施例913.252100261.141.87对比例15.00822032.342.41
对比例29.59150682.71无对比例323.88089761.091.25检测例113.242101001.121.94
[0115]
表3各物质的保留时间和相对保留时间
[0116]
简称保留时间(min)相对保留时间1401asim213.2421.001401asim2114.2371.081401asim2212.2390.931401asim2312.3050.94
[0117]
参见图10-图12，所述对比例1的1401asim2主峰与溶剂峰未分开，所述对比例2只检出1401asim2主峰、不能检出其他峰，所述对比例3的分离度仅为1.25(参见表2)，表示1401asim2与1401asim21、1401asim22、1401asim23不能完全分离，三者均不满足分离需求，参见图1-图9，采用本发明一种枸橼酸托法替布起始物料的液相色谱检测方法的实施例1-9的分离度均大于1.5(参见表2)，表示本方法能够实现1401asim2与1401asim21、1401asim22、1401asim23的完全分离，不仅分离效果好，且操作简单、灵敏度高。