一种利于石蜡切片图像获取的脱蜡修复液的制作方法

专利检索2022-05-10  12



1.本发明涉及石蜡切片技术领域,特别是涉及一种利于石蜡切片图像获取的脱蜡修复液。


背景技术:

2.病理石蜡组织切片是免疫组化(ihc)最常用的也是最主要的检测样本;由于该样本为石蜡包埋的组织切片,非水溶性的,不能直接用于免疫组化检测,在免疫组化检测前需要对样本进行预处理,即需要脱蜡、水化、抗原修复的处理;经典的石蜡组织切片预处理基本步骤为:二甲苯(或环保脱蜡剂)脱蜡、乙醇梯度水化(如无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、蒸馏水)、抗原修复、漂洗;经过系列过程处理后,方可进行抗原抗体免疫反应染色;经典的石蜡组织切片脱蜡、水化、修复,不仅操作步骤复杂,而且脱蜡往往需要使用二甲苯,二甲苯具有一定的毒性,环境不友好,对操作也会带来一定的伤害。


技术实现要素:

3.本发明的目的在于提出一种利于石蜡切片图像获取的脱蜡修复液,解决上述问题。
4.本发明通过以下技术方案来实现上述目的:一种利于石蜡切片图像获取的脱蜡修复液,其特征在于,包括以下脱蜡步骤:组织石蜡切片置于60

65℃烤箱中烤30

60分钟,然后将切片放入预先加热到72

75℃脱蜡修复液中,恒温浸泡20分钟;取出切片后再次直接放入另一缸预先加热到72

75℃所述脱蜡修复液中,恒温浸泡20分钟,然后用水冲洗即完成脱蜡。
5.作为本发明的优选,包括以下脱蜡及抗原修复步骤:组织石蜡切片置于60

65℃烤箱中烤30

60分钟,然后将切片放入预先加热到72

75℃所述脱蜡修复液中,将所述脱蜡修复液继续加热到95

100℃,持续20分钟;取出切片后先用预先加热到72

75℃的所述脱蜡修复液中漂洗一次,然后用水冲洗即完成脱蜡修复。
6.作为本发明的优选,在72

75℃温育的条件下,即可完成脱蜡作用。
7.作为本发明的优选,在95

100℃加热的条件下,一次完成脱蜡与抗原修复作用。
8.作为本发明的优选,所述的脱蜡修复液中所含的脱蜡剂包括:水溶性脱蜡剂、渗透剂、分散剂、消泡剂、蒸馏水等,所述水溶性脱蜡剂为利用peg200、乙二醇、脂肪醇聚氧乙烯9醚组成的混合物,在水相中具有良好的溶解性,在加热的情况下可以溶解石蜡;所述渗透剂为triton x

100、丙三醇的两种或至少一种的化合物;所述分散剂,为表面活性剂,至少为tween

20、triton x

100的一种化合物;所述消泡剂为乙二醇叔丁醚和聚氧丙烯甘油醚中的二种或至少一种化合物。
9.作为本发明的优选,所述水溶性脱蜡剂的的最佳成分配比为:0.25%

2.5%的peg200,0.05%

0.75%的乙二醇,0.05%

0.75%的脂肪醇聚氧乙烯醚;所述渗透剂的的最
佳成分配比为:0.1%

0.75%的triton x

100, 0.01%

0.5%的丙三醇;所述分散剂的的最佳成分配比为 0.1%

0.75%的triton x

100,0.01%

0.05%的tween

20;所述消泡剂的的最佳成分配比为:0.01%

0.1%的乙二醇叔丁醚,0.03%

0.05%的聚氧丙烯甘油醚。
10.作为本发明的优选,所述的脱蜡修复液中所含的修复液包括:缓冲液、渗透剂、螯合剂,所述为修复液中的主要组分,由tris盐酸配制而成,其ph值为9.0;所述渗透剂可以选择triton x

100、丙三醇,可以两种或至少一种的化合物;所述螯合剂,为edta,可以减少金属的干扰。
11.作为本发明的优选,所述缓冲液的的最佳成分含量为:0.01

0.05mm的tris

hcl;所述金属螯合剂的最佳成分含量为:0.001

0.002mm的 edta;所述组织渗透剂的最佳成分含量为 0.01%

0.05%(v/v)的丙三醇。
12.作为本发明的优选,所述脱蜡修复液用于单纯脱蜡操作时,其加热脱蜡温育温度为72

75℃。
13.作为本发明的优选,所述脱蜡修复液用于单纯脱蜡操作时,其加热脱蜡温育时间为20分钟,并恒温浸泡两次。
14.作为本发明的优选,所述脱蜡修复液用于单纯脱蜡操作时,其加热脱蜡完成后漂洗用水为自来水。
15.作为本发明的优选,所述脱蜡修复液在脱蜡修复操作时,其脱蜡修复液需要预先加热到72

75℃,石蜡组织切片不能直接放入冷的脱蜡修复液中,以免影响切片上的石蜡粘附于玻片上,不利于溶蜡与蜡质的扩散。
16.作为本发明的优选,所述脱蜡修复液在脱蜡修复操作时,放入石蜡组织切片后需将脱蜡修复液继续加热到95

100℃,此温度条件下不仅可以促进脱蜡,同时还可以达到抗原修复的目的。
17.作为本发明的优选,所述脱蜡修复液在脱蜡修复操作时,放入石蜡组织切片后需将脱蜡修复液继续加热脱蜡修复,持续时间需要20分钟。
18.作为本发明的优选,所述脱蜡修复液在脱蜡修复操作时,完成脱蜡修复的石蜡组织切片,取出后应先用预热至72

75℃脱蜡修复液漂洗一次,然后才能用自来水冲洗。
19.与现有技术相比,本发明的有益效果如下:本发明的脱蜡修复液,将切片脱蜡、水化、抗原修复的操作步骤进行了整合,在脱蜡的同时进行抗原修复,脱蜡

水化

修复一次完成,缩短了操作步骤,节约了实验时间,其优点为脱蜡修复液无毒、不易挥发、操作过程中由于加入了消泡剂,在加热的状态下,可以有效地防止液体试剂的挥发而产生刺激性气体,同时防止在玻片表面形成气泡而影响脱蜡修复效果并且生物降解性好,脱蜡效果与二甲苯相同等,本发明的试剂处理的病理切片具有良好的脱蜡效果,且不会损坏病理组织细胞结构。
附图说明
20.图1是本发明实施例一的脱蜡修复液he染色结果示意图;图2是本发明实施例一的ihc染色结果示意图;图3是本发明实施例二的脱蜡修复液he染色结果示意图;图4是本发明实施例二的ihc染色结果示意图;图5是本发明实施例三的脱蜡修复液he染色结果示意图;
图6是本发明实施例三的ihc染色结果示意图。
具体实施方式
21.下面结合附图对本发明作进一步说明:一种利于石蜡切片图像获取的脱蜡修复液,如图1

6所示,包括以下脱蜡步骤:组织石蜡切片置于60

65℃烤箱中烤30

60分钟,然后将切片放入预先加热到72

75℃脱蜡修复液中,恒温浸泡20分钟;取出切片后再次直接放入另一缸预先加热到72

75℃所述脱蜡修复液中,恒温浸泡20分钟,然后用水冲洗即完成脱蜡。
22.进一步地,包括以下脱蜡及抗原修复步骤:组织石蜡切片置于60

65℃烤箱中烤30

60分钟,然后将切片放入预先加热到72

75℃所述脱蜡修复液中,将所述脱蜡修复液继续加热到95

100℃,持续20分钟;取出切片后先用预先加热到72

75℃的所述脱蜡修复液中漂洗一次,然后用水冲洗即完成脱蜡修复。
23.进一步地,在72

75℃温育的条件下,即可完成脱蜡作用。
24.进一步地,在95

100℃加热的条件下,一次完成脱蜡与抗原修复作用。
25.进一步地,所述的脱蜡修复液中所含的脱蜡剂包括:水溶性脱蜡剂、渗透剂、分散剂、消泡剂、蒸馏水等,所述水溶性脱蜡剂为利用peg200、乙二醇、脂肪醇聚氧乙烯9醚组成的混合物,在水相中具有良好的溶解性,在加热的情况下可以溶解石蜡;所述渗透剂为triton x

100、丙三醇的两种或至少一种的化合物;所述分散剂,为表面活性剂,至少为tween

20、triton x

100的一种化合物;所述消泡剂为乙二醇叔丁醚和聚氧丙烯甘油醚中的二种或至少一种化合物。
26.进一步地,所述水溶性脱蜡剂的的最佳成分配比为:0.25%

2.5%的peg200,0.05%

0.75%的乙二醇,0.05%

0.75%的脂肪醇聚氧乙烯醚;所述渗透剂的的最佳成分配比为:0.1%

0.75%的triton x

100, 0.01%

0.5%的丙三醇;所述分散剂的的最佳成分配比为 0.1%

0.75%的triton x

100,0.01%

0.05%的tween

20;所述消泡剂的的最佳成分配比为:0.01%

0.1%的乙二醇叔丁醚,0.03%

0.05%的聚氧丙烯甘油醚。
27.进一步地,所述的脱蜡修复液中所含的修复液包括:缓冲液、渗透剂、螯合剂,所述为修复液中的主要组分,由tris盐酸配制而成,其ph值为9.0;所述渗透剂可以选择triton x

100、丙三醇,可以两种或至少一种的化合物;所述螯合剂,为edta,可以减少金属的干扰。
28.进一步地,所述缓冲液的的最佳成分含量为:0.01

0.05mm的tris

hcl;所述金属螯合剂的最佳成分含量为:0.001

0.002mm的 edta;所述组织渗透剂的最佳成分含量为 0.01%

0.05%(v/v)的丙三醇。
29.进一步地,所述脱蜡修复液用于单纯脱蜡操作时,其加热脱蜡温育温度为72

75℃。
30.进一步地,所述脱蜡修复液用于单纯脱蜡操作时,其加热脱蜡温育时间为20分钟,并恒温浸泡两次。
31.进一步地,所述脱蜡修复液用于单纯脱蜡操作时,其加热脱蜡完成后漂洗用水为自来水。
32.进一步地,所述脱蜡修复液在脱蜡修复操作时,其脱蜡修复液需要预先加热到72

75℃,石蜡组织切片不能直接放入冷的脱蜡修复液中,以免影响切片上的石蜡粘附于玻片
上,不利于溶蜡与蜡质的扩散。
33.进一步地,所述脱蜡修复液在脱蜡修复操作时,放入石蜡组织切片后需将脱蜡修复液继续加热到95

100℃,此温度条件下不仅可以促进脱蜡,同时还可以达到抗原修复的目的。
34.进一步地,所述脱蜡修复液在脱蜡修复操作时,放入石蜡组织切片后需将脱蜡修复液继续加热脱蜡修复,持续时间需要20分钟。
35.进一步地,所述脱蜡修复液在脱蜡修复操作时,完成脱蜡修复的石蜡组织切片,取出后应先用预热至72

75℃脱蜡修复液漂洗一次,然后才能用自来水冲洗。
36.实施例一、一种石蜡组织切片的脱蜡修复液配制及其应用,其配制的原料组成如下表所示:配制操作步骤1:配制0.01mmtris

hcl(ph9.0)缓冲液,加入edta使其浓度达到0.001mm,即为抗原修复液。称取tris 1.21g与edta0.29g,溶解于1l蒸馏水中,充分溶解后,用盐酸调节ph值为9.0即可;配制操作步骤2:依据以上组成比例,依次量取水溶性脱蜡剂(peg200、乙二醇、脂肪醇聚氧乙烯醚)、渗透剂(triton x

100、丙三醇)、分散剂(tween

20)、消泡剂(乙二醇叔丁醚)加入到步骤1的抗原修复液中,充分搅拌溶解即可;本实施例一种石蜡组织切片的脱蜡修复液配制及其应用,其脱蜡修复液在免疫组化实验中充当脱蜡剂的作用(含水化作用):组织石蜡切片置于60

65℃烤箱中烤60分钟,然后将切片放入预先加热到75℃脱蜡修复液中,恒温浸泡20分钟;取出切片后再次直接放入另一缸预先加热到75℃脱蜡修复液中,恒温浸泡20分钟,然后用水冲洗即完成脱蜡并完成水化作用。脱蜡水化的病理切片、进行he染色、脱水、透明和封片;如图1为本实施例的脱蜡修复液he染色结果:结果显示切片表面没有留蜡、脱蜡干
净、组织细胞形态完整、染色清晰、明显、说明使用本试剂处理的病理切片具有良好的脱蜡效果,且不会损坏病理组织细胞结构;本实施例一种石蜡组织切片的脱蜡修复液配制及其应用,其脱蜡修复液在免疫组化实验中脱蜡、水化、抗原修复作用:组织石蜡切片置于60

65℃烤箱中烤60分钟,然后将切片放入预先加热到75℃脱蜡修复液中,将脱蜡修复液继续加热到100℃,持续20分钟;取出切片后先用预先加热到75℃脱蜡修复液中漂洗一次,然后用水冲洗即完成脱蜡修复;如图2为本实施例的脱蜡修复液ihc染色结果:ttf

1在肺癌组织上染色结果显示,切片表面的蜡没有明显的留存,脱蜡效果明显干净,经ttf

1染色可以看出抗原修复良好,组织细胞形态保留良好的原始状态及其完整性,ttf

1阴性表达的细胞细胞核苏木素染色清晰、明显,ttf

1阳性染色信号清晰、明确。该脱蜡修复液符合组织切片的免疫组化的脱蜡、水化、抗原修复的要求。
37.实施例二、一种石蜡组织切片的脱蜡修复液配制及其应用,其配制的原料组成如下表所示:配制操作步骤1:配制0.01mmtris

hcl(ph9.0)缓冲液,加入edta使其浓度达到0.001mm,即为抗原修复液。称取tris 1.21g与edta0.29g,溶解于1l蒸馏水中,充分溶解后,用盐酸调节ph值为9.0即可;配制操作步骤2:依据以上组成比例,依次量取水溶性脱蜡剂(peg200、乙二醇、脂肪醇聚氧乙烯醚)、渗透剂(triton x

100、丙三醇)、分散剂(tween

20)、消泡剂(聚氧丙烯甘油醚)加入到步骤1的抗原修复液中,充分搅拌溶解即可;本实施例的一种石蜡组织切片的脱蜡修复液配制及其应用,其脱蜡修复液在免疫组化实验中充当脱蜡剂的作用(含水化作用):组织石蜡切片置于60

65℃烤箱中烤60分钟,然后将切片放入预先加热到75℃脱蜡修复液中,恒温浸泡20分钟;取出切片后再次直接放
入另一缸预先加热到75℃脱蜡修复液中,恒温浸泡20分钟,然后用水冲洗即完成脱蜡并完成水化作用。脱蜡水化的病理切片、进行he染色、脱水、透明和封片;如图3为本实施例的脱蜡修复液he染色结果:结果显示切片表面没有留蜡、脱蜡干净、组织细胞形态完整、染色清晰、明显、说明使用本试剂处理的病理切片具有良好的脱蜡效果,且不会损坏病理组织细胞结构;本实施例的一种石蜡组织切片的脱蜡修复液配制及其应用,其脱蜡修复液在免疫组化实验中脱蜡、水化、抗原修复作用:组织石蜡切片置于60

65℃烤箱中烤60分钟,然后将切片放入预先加热到75℃脱蜡修复液中,将脱蜡修复液继续加热到100℃,持续20分钟;取出切片后先用预先加热到75℃脱蜡修复液中漂洗一次,然后用水冲洗即完成脱蜡修复;如图4为本实施例的脱蜡修复液ihc染色结果:ck5/6在扁桃体组织上染色结果显示,切片表面的蜡没有明显的留存,脱蜡效果明显干净,经ck5/6染色可以看出抗原修复良好,组织细胞形态保留良好的原始状态及其完整性,ck5/6阴性表达的细胞核苏木素染色清晰、明显,ck5/6阳性染色信号清晰、明确。该脱蜡修复液符合组织切片的免疫组化的脱蜡、水化、抗原修复的要求。
38.实施例三、一种石蜡组织切片的脱蜡修复液配制及其应用,其配制的原料组成如下表所示:配制操作步骤1:配制0.01mmtris

hcl(ph9.0)缓冲液,加入edta使其浓度达到0.001mm,即为抗原修复液。称取tris 1.21g与edta0.29g,溶解于1l蒸馏水中,充分溶解后,用盐酸调节ph值为9.0即可;配制操作步骤2:依据以上组成比例,依次量取水溶性脱蜡剂(peg200、乙二醇、脂肪醇聚氧乙烯醚)、渗透剂(triton x

100、丙三醇)、分散剂(tween

20)、消泡剂(聚氧丙烯
甘油醚)加入到步骤1的抗原修复液中,充分搅拌溶解即可;本实施例的一种石蜡组织切片的脱蜡修复液配制及其应用,其脱蜡修复液在免疫组化实验中充当脱蜡剂的作用(含水化作用):组织石蜡切片置于60

65℃烤箱中烤60分钟,然后将切片放入预先加热到75℃脱蜡修复液中,恒温浸泡20分钟;取出切片后再次直接放入另一缸预先加热到75℃脱蜡修复液中,恒温浸泡20分钟,然后用水冲洗即完成脱蜡并完成水化作用。脱蜡水化的病理切片、进行he染色、脱水、透明和封片;如图5为本实施例的脱蜡修复液he染色结果:结果显示切片表面没有留蜡、脱蜡干净、组织细胞形态完整、染色清晰、明显、说明使用本试剂处理的病理切片具有良好的脱蜡效果,且不会损坏病理组织细胞结构;本实施例的一种石蜡组织切片的脱蜡修复液配制及其应用,其脱蜡修复液在免疫组化实验中脱蜡、水化、抗原修复作用:组织石蜡切片置于60

65℃烤箱中烤60分钟,然后将切片放入预先加热到75℃脱蜡修复液中,将脱蜡修复液继续加热到100℃,持续20分钟;取出切片后先用预先加热到75℃脱蜡修复液中漂洗一次,然后用水冲洗即完成脱蜡修复;如图6为本实施例的脱蜡修复液ihc染色结果:p63在扁桃体组织上染色结果显示,切片表面的蜡没有明显的留存,脱蜡效果明显干净,经p63染色可以看出抗原修复良好,组织细胞形态保留良好的原始状态及其完整性,p63阴性表达的细胞核苏木素染色清晰、明显,p63阳性染色信号清晰、明确。该脱蜡修复液符合组织切片的免疫组化的脱蜡、水化、抗原修复的要求。
39.以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。
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