本发明涉及细胞生物学和分子生物学，更具体的说是涉及一种应用nacl提高人胚胎干细胞多能性的培养体系及培养方法。
背景技术：
1、氯化钠对于生命体极其重要，钠离子和氯离子具有维持酸碱平衡和渗透压的生理功能，钠离子在能量的生成、糖代谢和氧的利用中起到重要的作用，而氯离子也主要存在于细胞外液，在体内参与胃酸的生成。此外，0.9％的氯化钠作为生理盐水可以代替体液维持渗透压，这也为体外培养胚胎提供了稳定的条件。
2、目前，对于高盐摄入的研究比较成熟。例如，高盐饮食促进akt的磷酸化和nadph的氧化，激活雌性大鼠脂肪组织的活性；高渗促使多能干细胞形成应激颗粒且不改变其多能性特点等。然而，这些研究都是基于高浓度氯化钠下获取的成果，在几乎不改变渗透压的情况下，氯化钠的加入对人胚胎干细胞的影响却没有研究。
3、为在体外获取分化潜能更强的的干细胞，各种重编程的方法也逐渐成熟，但是基于方法复杂性和成本的考虑，最终确定外源加入常见的成本较低的小分子化合物作为最佳的选择。
4、因此，本发明通过研究氯化钠对人胚胎干细胞的作用，希望能获得在体外提高人胚胎干细胞多能性的方法，为相关领域的科研提供基础研究。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明提供了一种应用nacl提高人胚胎干细胞多能性的培养体系及培养方法，以期获取分化潜能更高的胚胎细胞。
2、本发明采用培养人多能干细胞的mtesrtm1培养体系(stemcell，85850)，在martrigel(coring，354277)胶上将人胚胎干细胞稳定培养传代，且能够观察到显著的核仁和密集排列多层突出的细胞生长状态。此外，在体外还能维持人胚胎干细胞的多能性。
3、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
4、一种应用nacl提高人胚胎干细胞多能性的培养体系，在基础培养体系中加入0.1～1mm的nacl。
5、进一步的，在基础培养体系中加入1mm的nacl。
6、进一步的，所述基础培养体系为培养体系mtesrtm1。
7、进一步的，所述人胚胎干细胞为h9人胚胎干细胞。
8、一种应用nacl提高人胚胎干细胞多能性的培养方法，采用上述的培养体系培养。
9、进一步的，培养条件为：37℃/5％co2。
10、进一步的，传代条件为：trypletm消化5min，然后用3倍trypletm体积的dmem终止消化。
11、进一步的，冻存方法为：trypletm消化5min，200g离心5min后去上清液，然后加干细胞冻存液混匀后，-80℃放24h后转移至液氮中保存。
12、进一步的，所述干细胞冻存液由fbs、dmem/f12、eg和dmso组成，且四者的体积比为10:7:2:1。
13、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明取得的有益效果为：
14、(1)本发明的体外培养人胚胎干细胞的培养方法，用含有0.1～1mm nacl的mtesrtm1培养体系培养人胚胎干细胞，可提高细胞的多能性。在此培养体系下，人胚胎干细胞可进行稳定的传代、解冻和冻存等操作。本发明要求每天更换培养液，并且每天观察细胞状态，定期对细胞进行多能性检测。
15、(2)本发明利用含有nacl的mtesrtm1培养体系提高人胚胎干细胞的多能性，不同浓度的nacl对人胚胎干细胞多能性有着不同的影响，通过细胞的生长状态，碱性磷酸酶染色，及多能性标记基因oct4、klf2、klf4、klf5、sox2、nanog和rex1的表达结果，最终确定当细胞在nacl的浓度为1mm的体系培养时，该浓度不会引起渗透压的改变，且较对照组其克隆团动态地呈现紧密隆起的现象，多能性基因上调显著，增殖速率快，且细胞s周期缩短，脂肪酸的合成能力增强。同时，转录组和蛋白组数据都富集到上调pi3k-akt通路。
1.一种应用nacl提高人胚胎干细胞多能性的培养体系，其特征在于，在基础培养体系中加入0.1～1mm的nacl。
2.如权利要求1所述的培养体系，其特征在于，在基础培养体系中加入1mm的nacl。
3.如权利要求1所述的培养体系，其特征在于，所述基础培养体系为培养体系mtesrtm1。
4.如权利要求1所述的培养体系，其特征在于，所述人胚胎干细胞为h9人胚胎干细胞。
5.一种应用nacl提高人胚胎干细胞多能性的培养方法，其特征在于，采用权利要求1～4任一所述的培养体系培养。
6.如权利要求5所述的培养方法，其特征在于，培养条件为：37℃/5％co2。
7.如权利要求5所述的培养方法，其特征在于，传代条件为：trypletm消化5min，然后用3倍trypletm体积的dmem终止消化。
8.如权利要求5所述的培养方法，其特征在于，冻存方法为：trypletm消化5min，200g离心5min后去上清液，然后加干细胞冻存液混匀后，-80℃放24h后转移至液氮中保存。
9.如权利要求8所述的培养方法，其特征在于，所述干细胞冻存液由fbs、dmem/f12、eg和dmso组成，且四者的体积比为10:7:2:1。
