本发明属细胞生物学，具体涉及一种肾祖细胞分化为足细胞的方法。
背景技术：
1、足细胞（podocyte）也就是肾小囊脏层上皮细胞，其附着于肾小球基底膜的外侧，连同血管内皮细胞和肾小球基膜一起构成了肾小球血液滤过屏障，对肾脏的滤过功能起着极为重要的作用。足细胞损伤是肾脏中肾小球内的足细胞出现异常的疾病，葡萄糖代谢紊乱、免疫系统功能紊乱和病毒感染等均可以对祖细胞造成损伤，患者临床上表现为大量蛋白尿，多伴有肾小管功能受损。
2、在体外获得足细胞，可用于研究足细胞损伤的发病机制，开发治疗技术，阻断损伤的发生。目前足细胞获得主要通过动物原代细胞提取和干细胞分化获得。从肾祖细胞获得足细胞也有零星的报道，但是这些方法工艺繁琐，需要多种试剂，成本较高。
3、因此，现亟需一种操作简单、成本低廉、能够快速将肾祖细胞（npc）分化为足细胞的方法。
技术实现思路
1、本发明旨在简化从肾祖细胞诱导分化为肾脏足细胞的过程。为此，本发明提出一种足细胞的制备方法，该制备方法简单、快速将肾祖细胞分化为足细胞。
2、本发明第一方面的目的，在于提供一种由肾祖细胞分化为足细胞的方法。
3、本发明第二方面的目的，在于提供一种培养基在肾祖细胞分化成足细胞中的应用。
4、本发明第三方面的目的，在于提供一种培养基。
5、本发明第四方面的目的，在于提供足细胞在制备防治急性肾损伤药物方面的应用，或制备细胞模型方面的应用。
6、为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：
7、本发明的第一个方面，提供一种由肾祖细胞分化为足细胞的方法，包括以下步骤：用足细胞分化培养基培养肾祖细胞，即可获得足细胞；
8、所述足细胞分化培养基含有kosr血清替代物或人血小板裂解物。
9、在本发明一些实施方式中，所述培养基为rmpi 1640、dmem / f12培养基、advanermpi 1640、dmem任意一种或其组合。
10、在本发明一些实施方式中，所述kosr血清替代物或人血小板裂解物在足细胞分化培养基中的体积占比为1%～30%。
11、在本发明一些优选实施方式中，所述kosr血清替代物在足细胞分化培养基中的体积占比为1%～20%。
12、在本发明一些实施方式中，所述培养要将细胞接种于基质胶或含有基质胶的培养容器。
13、在本发明一些实施方式中，所述基质胶为vitronectinxf基质胶、明胶、iv型胶原蛋白、laminin521基质胶或matrigel基质胶中任一种。
14、在本发明一些实施方式中，所述足细胞分化培养基还包括fgf9、neaa、glutamax中至少一种。
15、在本发明一些实施方式中，所述fgf9的工作浓度为0～300ng/ml。
16、在本发明一些优选实施方式中，所述fgf9的工作浓度为0～200ng/ml。
17、在本发明一些更优选实施方式中，所述fgf9的工作浓度为10～200ng/ml。
18、在本发明一些实施方式中，所述neaa的工作浓度为0～2×。
19、在本发明一些优选实施方式中，所述neaa的工作浓度为0.4～1.6×。
20、在本发明一些更优选实施方式中，所述neaa的工作浓度为0.6～1.4×。
21、在本发明一些实施方式中，所述glutamax的工作浓度为0～2×。
22、在本发明一些优选实施方式中，所述glutamax的工作浓度为0.5～1×。
23、在本发明一些更优选实施方式中，所述glutamax的工作浓度为1×。
24、在本发明一些实施方式中，所述培养的条件为30～40℃培养3～10天。
25、在本发明一些优选实施方式中，所述培养的条件为35～38℃培养3～8天。
26、在本发明一些更优选实施方式中，所述培养的条件为37℃培养4～8天。
27、在本发明一些实施方式中，在所述培养的过程中至少每天更换一次培养基。
28、在本发明一些实施方式中，所述肾祖细胞可以参考中国发明专利cn202210155136.4、中国发明专利cn202311597553.5，或其他已经公开的方法或直接购买获得。
29、在本发明一些实施方式中，所述肾祖细胞的接种密度为1～10×105/cm2。
30、在本发明一些优选实施方式中，所述肾祖细胞的接种密度为2～9×105/cm2。
31、在本发明一些实施方式中，所述培养容器为培养皿、培养板或培养瓶。
32、在本发明一些实施方式中，所述含有基质胶的培养容器包括由以下步骤制备得到：将基质胶加入至培养容器中，35～40℃孵育1～3小时，即可。
33、本发明的第二个方面，提供一种培养基，所述培养基含有0～2×neaa、1%v/v～30%v/v kosr血清替代物或人血小板裂解物、0～300ng/mlfgf9和0～2×glutamax。
34、在本发明一些实施方式中，所述培养基含有0～1.6×neaa、1%v/v～20%v/v kosr血清替代物、0～200ng/mlfgf9和0～2×glutama。
35、在本发明一些优选实施方式中，所述培养基含有0.6～1.4×neaa、1%v/v～20%v/vkosr血清替代物和10～200ng/mlfgf9。
36、在本发明一些优选实施方式中，所述培养基含有1%v/v～20%v/v kosr血清替代物和4～2×glutama。
37、在本发明一些实施方式中，所述培养基为rmpi 1640、dmem / f12培养基、advanermpi 1640、dmem任意一种或其组合。
38、本发明的第三个方面，提供一种试剂盒，所述试剂盒包含本发明第二方面的培养基。
39、上述培养基、试剂盒应用于在肾祖细胞分化成足细胞。
40、本发明第四方面的目的，在于提供足细胞在制备防治急性肾损伤药物方面的应用，或制备细胞模型方面的应用。
41、在本发明一些实施方式中，足细胞按上述肾祖细胞分化为足细胞的方法获得。
42、本发明的有益效果是：
43、本发明提供的将肾祖细胞分化为足细胞的方法操作简单，诱导分化周期短，所需要的生物试剂少（降低支原体、病毒污染的风险，甚至无需含异种动物源性成分试剂，降低足细胞用于人体时产生异种免疫反应的风险），安全性高，成本低。该方法的转化率高，残留的肾祖细胞比较少，诱导得到的足细胞存活率高、数量多，容易规模化生产。同时，获得的足细胞对缺血再灌注损伤的肾脏具有一定恢复作用。
1.一种由肾祖细胞分化为足细胞的方法，包括以下步骤：用足细胞分化培养基培养肾祖细胞，即可获得足细胞；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基为rmpi 1640、dmem / f12培养基、advane rmpi 1640、dmem任意一种或其组合。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述kosr血清替代物或人血小板裂解物在足细胞分化培养基中的体积占比为1%～30%。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述培养要将细胞接种于基质胶或含有基质胶的培养容器。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述基质胶为vitronectinxf基质胶或laminin521基质胶、明胶、iv型胶原蛋白、matrigel基质胶中任一种。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述足细胞分化培养基还包括fgf9、neaa、glutamax中至少一种。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述fgf9的工作浓度为0～300ng/ml；和/或，所述neaa的工作浓度为0～2×；和/或，所述glutamax的工作浓度为0～2×。
8.一种制备足细胞的培养基，其特征在于，所述培养基含有0～2×neaa、1%v/v～30%v/v kosr血清替代物或人血小板裂解物、0～300ng/mlfgf9和0～2×glutamax。
9.一种制备足细胞的试剂盒，含有权利要求8所述的培养基。
10.权利要求1～7中任一方法制备的足细胞在制备防治急性肾损伤药物方面的应用，或在制备细胞模型方面的应用。
