在一些方面，本发明涉及结合至flt3和cd3的双特异性抗体或其抗原结合片段，以及此类抗体的用途。
背景技术：
1、flt3
2、flt3是fms相关受体酪氨酸激酶3。flt3也被称为胎肝激酶2(flk2)。flt3是iii类酪氨酸激酶受体家族的成员，在正常造血祖细胞以及白血病母细胞中表达，并且在细胞增殖、分化和存活中起重要作用。flt3配体对flt3受体的激活会引起受体二聚化和磷酸化，以及下游信号传导通路的激活，所述信号传导通路包括janus激酶(jak)2信号转导子(jak2)、信号转导子和转录激活子(stat)5和有丝分裂原激活蛋白激酶(mapk)通路。据信在约40％的aml患者中发现的flt3基因突变会促进其自身磷酸化和组成型激活，导致配体非依赖性增殖(frankfurt o等,current opinion in oncology(2007)19(6):635-649)。
3、正常flt3表达主要局限于cd34+造血干细胞(hsc)、早期造血祖细胞(hp)和树突状细胞(dc)。通过结合flt3配体(flt3l)对flt3的激活会促进下游血系的正常分化。
4、flt3在多种血液恶性肿瘤中高表达，包括大多数aml患者中。大多数患有aml的患者的aml母细胞表达flt3，并且认为这种表达会促进存活和增殖。已开发了酪氨酸激酶抑制剂(tki)来特异性靶向flt3；然而，导致flt3抗性的二次突变仍然是一个主要障碍。
5、cd3
6、cd3是分化簇3(t细胞辅受体)。cd3一般在成熟t细胞的膜表面上表达，并且激活原初t细胞群体。cd3辅受体帮助激活细胞毒性细胞和t辅助细胞(即，cd8+t细胞和cd4+t细胞)。cd3是由四条不同链组成的蛋白质复合物。在哺乳动物中，复合物含有cd3γ链、cd3δ链和两条cd3ε链，它们与t细胞受体(tcr)和ζ链缔合以在t淋巴细胞中产生激活信号。合在一起，tcr、ζ链和cd3分子构成tcr复合物。cd3的细胞内尾部含有保守基序，称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)，所述激活基序对于tcr的信号传导能力至关重要。itam磷酸化后，cd3链可以结合zap70(ζ相关蛋白)，一种参与t细胞信号传导级联的激酶。一旦激活，t细胞即分泌细胞因子并迅速协助免疫反应。
7、造血干细胞
8、造血干细胞是所有血细胞的共同祖先。作为多能细胞，它们可以分化成多个细胞谱系，但并非所有谱系都来源于三个胚层。造血干细胞分化产生淋巴和骨髓细胞谱系，这是造血的两个主要分支。(kondo,m."lymphoid and myeloid lineage commitment inmultipotent hematopoietic progenitors",immunol.rev.2010年11月；238(1):37-46)。淋巴谱系细胞包括t细胞、b细胞和自然杀伤(nk)细胞。骨髓谱系包括巨核细胞和红细胞(mege)以及属于骨髓谱系的不同粒细胞亚组(嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)、单核细胞、巨噬细胞和肥大细胞(gm)(同上引用kondo m等,biology ofhematopoietic stem cells and progenitors:implications for clinicalapplication.ann.rev immunol.2003；21:759-806,weissman il.translating stem andprogenitor cell biology to the clinic:barriers and opportunities.science(newyork,ny.2000年2月25日；287(5457):1442-6)；还参见iwaskaki,h.和akashi,k."myeloidlineage commitment from the hematopoietic stem cell",immunity 26(6)2007年6月,726-40)。
9、hsc呈现出自我更新潜力和分化成血系的能力；即，当干细胞分裂时，平均50％的子细胞会形成细胞谱系，而其余50％不会分化。所述过程通过不对称细胞分裂来维持相同数目的干细胞，以使每个分裂的干细胞产生一个新的干细胞和一个分化的细胞。相比之下，在对称分裂中，干细胞产生100％相同的干细胞。(gordon,m.stem cells andhaemopoiesis.hoffbrand,v.,catovsky,d.,tuddenham,e.g.,第5版blackwellpublishing,(2005):differential niche and wnt requirements during acutemyeloid leukemia,第1-12页.new york.)。
10、淋巴和骨髓谱系在祖细胞水平上是可分离的。共同淋巴祖细胞(clp)在生理条件下可以分化成所有类型的淋巴细胞，而没有明显的骨髓潜力(kondo m,scherer dc,miyamoto t,king ag,akashi k,sugamura k.等cell-fate conversion of lymphoidcommitted progenitors by instructive actions of cytokines.nature.2000年9月21日；407(6802):383-6)，但视实验条件而定，clp中可能会检测到一些骨髓相关基因(delogua,schebesta a,sun q,aschenbrenner k,perlot t,busslinger m.gene repression bypax5 in b cells is essential for blood cell homeostasis and is reversed inplasma cells.immunity.2006年3月；24(3):269-81)。
11、类似地，共同骨髓祖细胞(cmp)可以产生所有类别的骨髓细胞，而b细胞潜力不存在或水平极低(akashi k,traver d,miyamoto t,weissman il.a clonogenic commonmyeloid progenitor that gives rise to all myeloid lineages.nature.2000年3月9日；404(6774):193-7)。另一种细胞类型，树突状细胞(dc)，没有明确分为淋巴或骨髓谱系，因为dc可以由clp或cmp产生(manz mg,traver d,miyamoto t,weissman il,akashik.dendritic cell potentials of early lymphoid and myeloidprogenitors.blood.2001年6月1日；97(11):3333-41,traver d,akashi k,manz m,meradm,miyamoto t,engleman eg等,development of cd8alpha-positive dendritic cellsfrom a common myeloid progenitor.science(new york,ny.2000年12月15日；290(5499):2152-4))。cmp可以增殖并分化成巨核细胞-红细胞(mege)祖细胞和粒细胞-单核细胞(gm)祖细胞，进一步产生巨核细胞、红细胞、粒细胞、单核细胞等。(iwasaki h,akashik.myeloid lineage commitment from the hematopoietic stem cell.immunity.2007；26:726-740)。
12、转录因子表达水平的差异可能决定了分化细胞的谱系归属。转录因子pu.1和gata-1分别与骨髓和红细胞/巨核细胞谱系分化有关(gordon,m.stem cells andhaemopoiesis.hoffbrand,v.,catovsky,d.,tuddenham,e.g.,第5版blackwellpublishing,(2005):differential niche and wnt requirements during acutemyeloid leukemia,第1-12页.new york.)。
13、hsc的表征
14、hsc是未分化的并且类似于小淋巴细胞。大部分hsc是静止的，处于细胞周期的g0期，这保护它们免受细胞周期依赖性药物的作用。干细胞的静止状态由转化生长因子β(tgf-β)维持。tgf-β的活性由p53介导，p53是一种调控细胞增殖并靶向细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21的肿瘤抑制基因(gordon,m.stem cells and haemopoiesis.hoffbrand,v.,catovsky,d.,tuddenham,e.g.,第5版blackwell publishing,(2005):differentialniche and wnt requirements during acute myeloid leukemia,第1-12页.new york.)。hsc的静止不仅对于保护干细胞区室和长时间维持干细胞库至关重要，而且对于最大限度地减少复制相关突变的积累也至关重要。发现许多维持hsc静止的内在转录因子与白血病相关。举例来说，在急性髓系白血病中已报道了导致foxo和髓系/淋巴系白血病或混合谱系白血病融合的染色体易位(参见例如sergio paulo bydlowski和felipe de lara janz(2012).hematopoietic stem cell in acute myeloid leukemia development,advancesin hematopoietic stem cell research,rosana pelayo博士(编),isbn:978-953-307-930-1)。
15、大多数正常hsc存在于cd34+/cd38-/cd90+骨髓细胞部分中，在cd34-/lin-细胞中也观察到一些hsc。cd34+/cd38+细胞部分含有一些具有短期再植活性的hsc。其它公认的标志物包括酪氨酸激酶受体c-kit(cd117)，与终末分化标志物(cd4和cd8)的缺乏相结合(rossi等,methods in molecular biology(2011)750(2):47-59)。
16、hsc的分类
17、造血干细胞库可以细分为三大类：(1)短期hsc，仅能够在4-6周内产生分化细胞的克隆体；(2)中期hsc，能够在灭绝前维持分化细胞子代6-8个月；以及(3)长期hsc，能够无限期地维持造血作用。(testa u.annals of hematology(2011)90(3):245-271)。
18、造血作用
19、造血是一个高度协调的过程，其中hsc分化成由专门的调控微环境支持的成熟血细胞，所述微环境由控制干细胞和祖细胞的命运特化的组分组成，并通过提供必要的因子(“生态位”)维持其发育。如本文所用，术语“骨髓(bm)生态位”是指由在不同谱系的血细胞的存活、生长和分化中起重要作用的要素(例如，成骨细胞、破骨细胞、骨髓内皮细胞、基质细胞、脂肪细胞和细胞外基质蛋白(ecm))组成的组织良好的架构。骨髓生态位是重要的出生后微环境，在其中hsc增殖、成熟并产生骨髓和淋巴祖细胞。
20、骨髓(bm)存在于所有动物骨骼的髓腔中。它由多种前体细胞和成熟细胞类型组成，包括造血细胞(成熟血细胞的前体)和基质细胞(广泛的结缔组织细胞的前体)，这两种细胞似乎都能够分化成其它细胞类型。骨髓的单核部分含有基质细胞、造血前体和内皮前体。
21、与具有包括红髓和白髓在内的明显大体结构的次级淋巴器官(诸如脾)不同，除了含有成骨细胞的骨内膜外，bm没有明确的结构特征。内膜区域与钙化硬骨接触，并且提供维持hsc活性所必需的特殊微环境(kondo m,immunology reviews(2010)238(1):37-46；bydlowski和de lara janz(2012).hematopoietic stem cell in acute myeloidleukemia development,advances in hematopoietic stem cell research,rosanapelayo博士(编),isbn:978-953-307-930-1)。
22、在生态位内，据信hsc接收来自多个来源的支持和生长信号，所述来源包括：成纤维细胞、内皮细胞和网状细胞、脂肪细胞、成骨细胞和间充质干细胞(msc)。生态位的主要功能是整合营养物、氧气、旁分泌和自分泌信号的局部变化，并响应来自全身循环的信号而改变hsc的静止、运输和/或扩张(broner,f.和carson,mc.topics in bonebiology.springer.2009；4:第2-4页.new york,usa.)。
23、尽管真正的msc的性质仍然被误解，但最近报道了表达cxc趋化因子配体12(cxcl12)的cd146 msc是自我更新的祖细胞，所述祖细胞驻留在血窦表面上并有助于血窦壁结构的组织，产生血管生成素1(ang-1)，并且能够产生形成骨内膜生态位的成骨细胞(konopleva,my和jordan,ct,biology and therapeutic targeting(2011)9(5):591-599)。这些cxcl12网状细胞可以用作hsc在成骨细胞与血管生态位之间穿梭的运输通路，在这些生态位中提供必要但不同的维持信号。
24、由骨髓msc产生的细胞因子和趋化因子继发于不同的局部产生并通过细胞因子结合糖胺聚糖的作用而集中在特定的生态位中。其中，cxcl12/基质细胞衍生因子1α正向调控hsc归巢，而转化生长因子fms样酪氨酸激酶3(flt3)配体和ang-1充当静止因子(参见例如sergio paulo bydlowski和felipe de lara janz(2012).hematopoietic stem cell inacute myeloid leukemia development,advances in hematopoietic stem cellresearch,rosana pelayo博士(编),isbn:978-953-307-930-1)。cxcl12-cxcr4信号传导参与个体发生期间hsc归巢至bm中以及集落形成祖细胞的存活和增殖。cxcr4选择性拮抗剂诱导的hsc动员至外周血中进一步指示cxcl12在造血器官中保留hsc方面的作用。bm植入涉及随后通过bmsc产生的复杂细胞外基质进行的细胞间相互作用。因此，血管细胞粘附分子1(vcam-1)或纤连蛋白对于粘附至bm衍生的msc至关重要。以这种方式，造血干细胞增殖动力学的控制对于调控正确的造血细胞产生是至关重要的。这些控制机制可以分为干细胞内在的或外在的，或两者的组合(参见例如sergio paulo bydlowski和felipe de lara janz(2012).hematopoietic stem cell in acute myeloid leukemia development,advancesin hematopoietic stem cell research,rosana pelayo博士(编),isbn:978-953-307-930-1)。
25、hsc的自我更新和分化可以受外部因素控制(外在控制)，诸如造血微环境中的细胞间相互作用或细胞因子，诸如scf(干细胞因子)及其受体c-kit、flt-3配体、tgf-β、tnf-α等。细胞因子通过多种信号转导通路的激活来调控多种造血细胞功能。与细胞增殖和分化相关的主要通路是janus激酶(jak)/信号转导子和转录激活子(stat)、有丝分裂原激活蛋白(map)激酶和磷脂酰肌醇(pi)3-激酶通路(sergio paulo bydlowski和felipe de larajanz(2012).hematopoietic stem cell in acute myeloid leukemia development,advances in hema topoietic stem cell research,rosana pelayo博士(编),isbn:978-953-307-930-1)。
26、另外，其它转录因子，诸如干细胞白血病(scl)造血转录因子；gata-2；和参与细胞周期控制的基因产物，诸如细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cki)pl6、p21和p27的表达已显示对于造血细胞从最早阶段的发育至关重要(内在控制)(sergio paulo bydlowski和felipe de lara janz(2012).hematopoietic stem cell in acute myeloid leukemiadevelopment,advances in hematopoietic stem cell research,rosana pelayo博士(编),isbn:978-953-307-930-1)。
27、notch-1-jagged通路可能用来整合细胞外信号与细胞内信号传导和细胞周期控制。notch-1是造血干细胞膜上的表面受体，所述受体结合至其在基质细胞上的配体jagged。这会导致notch-1的细胞质部分裂解，然后可以充当转录因子(gordon,m.stemcells and haemopoiesis.hoffbrand,v.,catovsky,d.,tuddenham,e.g.,第5版blackwellpublishing,(2005):differential niche and wnt requirements during acutemyeloid leukemia,第1-12页.new york.)。
28、使用bm/hsc移植治疗的病症
29、使用骨髓(bm)/造血干细胞(hsc)移植治疗的病症包括但不限于急性髓系白血病(aml)、急性淋巴母细胞白血病(all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性髓系白血病(cml)、母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(bpdcn)、外周t细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(hodgkin lymphoma)、非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkinlymphoma)、神经母细胞瘤、非恶性遗传性和获得性骨髓病症(例如，镰状细胞性贫血、重型β地中海贫血、难治性戴蒙德-布莱克凡贫血(refractory diamond-blackfan anemia)、骨髓增生异常综合征、特发性严重再生障碍性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、纯红细胞再生障碍、范可尼贫血(fanconi anemia)、无巨核细胞增多症或先天性血小板减少症)、多发性骨髓瘤和严重联合免疫缺陷(scid)。
30、造血系统恶性肿瘤
31、大多数造血系统恶性肿瘤包含功能异质细胞，其中只有一个亚组(称为癌症干细胞)负责肿瘤维持。癌症干细胞之所以如此命名，是因为它们具有类似于正常组织干细胞的品质，包括自我更新、延长存活时间以及产生具有更多分化特征的细胞的能力(jones rj和armstrong sa,biol blood marrow transplant.2008年1月；14(增刊1):12-16)。
32、造血干细胞中的转化事件可以产生几种不同的恶性肿瘤，包括但不限于慢性髓系白血病、骨髓增生异常综合征、急性髓系白血病，并且甚至可能是急性淋巴细胞白血病，这取决于与致癌打击(oncogenic hit)相关的分化程度(jones rj和armstrong sa,biolblood marrow transplant.2008年1月；14(增刊1):12-16)。
33、癌症干细胞概念是基于以下观点：特定组织的肿瘤常常似乎“试图”囊括起源组织中发现的细胞异质性，因此肿瘤中类似干细胞的细胞产生不同的细胞类型。关于这一假设的基本测试是肿瘤细胞是否可以分为具有肿瘤再生能力的细胞和不具有这种能力的细胞。这种细胞层次结构在急性骨髓性白血病中得到最清楚的证明，其中一些aml拥有具有独特免疫表型的细胞，这些细胞能够在免疫缺陷小鼠中引发白血病，而大多数细胞无法引发白血病发展。此外，引发白血病的细胞也会产生失去肿瘤引发活性的细胞，因此囊括原始肿瘤中发现的细胞异质性(lapidot t等,nature.1994；367:645-648；bonnet d等,natmed.1997；3:730-737)。
34、急性髓系白血病
35、急性髓系白血病(aml)是克隆性病症，其特征在于骨髓谱系的分化停滞与骨髓中不成熟祖细胞的积聚相结合，导致造血衰竭(poll yea da等,british journal ofhaematology(2011)152(5):523-542)。白血病母细胞的外观存在很大的患者间异质性。急性髓系白血病(aml)中引发白血病的细胞的发现始于绝大多数aml母细胞不增殖并且只有一小部分能够形成新集落的发现(testa u,annals of hematology(2011)90(3):245-271)。所有aml病例的共同特征是异常分化停滞，导致骨髓中超过20％的母细胞积聚(gilliland,dg和tallman ms,cancer cell(2002)1(5):417-420)。
36、超过80％的髓系白血病与至少一种染色体重排相关(pandolfi pp,oncogene(2001)20(40):5726-5735)，并且已克隆了超过100种不同的染色体易位(gilliland,dg和tallman ms,cancer cell(2002)1(5):417-420)。这些易位经常涉及编码转录因子的基因，这些转录因子已显示在造血谱系发育中起重要作用。因此，转录机制的改变似乎是导致分化停滞的常见机制(pandolfi pp,oncogene(2001)20(40):5726-5735；tenen dg,naturereviews of cancer(2003)3(2):89-101)。
37、临床研究和实验动物模型表明，急性白血病的临床表现至少需要两种基因改变。根据gilliland和tallman(cancer cell(2002)1(5):417-420)提出的模型，i类激活突变与诱导分化终止的ii类突变之间的合作产生aml。i类突变，诸如受体酪氨酸激酶基因flt3和kit、ras家族成员的突变以及神经纤维蛋白1的功能丧失，赋予造血祖细胞增殖和/或存活优势，通常是信号转导通路异常激活的结果。ii类突变经由干扰转录因子或辅激活子导致分化停止(frankfurt o等,current opinion in oncology(2007)19(6):635-649)。虽然白血病干细胞(lsc)似乎共享许多先前为hsc鉴定的细胞表面标志物，诸如cd34、cd38、hla-dr和cd71，但多个小组已报告了在两个群体中差异性表达的表面标志物。举例来说，cd90或thy-1已被描述为lsc区室的潜在特异性。当最原始的干细胞向祖细胞阶段进展时，thy-1在正常造血中下调。(hope kj等,archives of medical research(2003)34(6):507-514)。
38、白血病祖细胞上的cxcl12(基质细胞衍生因子1α)与其受体cxcr4之间的相互作用有助于它们归巢至骨髓微环境。cxcr4水平在来自aml患者的白血病细胞中显著升高，并且cxcr4表达与不良结果相关(konopleva my和jordan ct,biology and therapeutictargeting(2011)29(5):591-599)。
39、原代人类aml干细胞的核因子κβ(nf-kβ)通路i的组成型激活提供了以下证据：nf-kβ在lsc以及一般aml细胞类型的总体存活中起重要作用。(konopleva my和jordan ct,biology and therapeutic targeting(2011)29(5):591-599)。
40、aml患者临床预后较差并且治疗选择有限，其中清髓后进行造血干细胞移植(hsct)是唯一的治愈性治疗。常用的调理方案不加区别地杀死所有高度增殖的细胞类型，导致危及生命的副作用，并且对静止的aml亚群也可能无效。
41、淋巴恶性肿瘤
42、当细胞进展至其正常的分化阶段时，大多数组织的自我更新能力就会丧失；例如，超出造血干细胞水平的骨髓谱系血细胞不再具有自我更新能力。分化相关的自我更新丧失的一个显著例外是淋巴系统，其中自我更新能力一直保留到记忆淋巴细胞阶段，以维持终生免疫记忆(fearon dt等,science.2001；293:248-250；luckey cj等,proc natl acadsci us a.2006；103:3304-3309)。体细胞超突变是出现b细胞恶性肿瘤的分化阶段的标志物。一般来说，体细胞超突变的存在将肿瘤鉴定为在生发中心或生发中心后b细胞中出现，而突变的不存在则鉴定了生发中心前b细胞。与骨髓恶性肿瘤相反，但与谱系保留的自我更新能力一致，免疫球蛋白(lg)突变模式表明b细胞恶性肿瘤可以由b细胞分化的整个阶段的细胞产生(lapidot t等,nature.1994；367:645-648；bonnet d和dick je,nat med.1997；3:730-737；jones rj等,j natl cancer inst.2004；96:583-585)。
43、多发性骨髓瘤
44、一般认为多发性骨髓瘤(mm)是恶性浆细胞疾病，所述疾病的许多临床结果是由浆细胞块引起的。然而，正常浆细胞是终末分化的并缺乏自我更新能力，并且30多年已明朗，只有少数来自小鼠和人类mm的细胞是克隆源性的。这些罕见的克隆源性细胞被称为“肿瘤干细胞”(park ch等,j natl cancer inst.1971；46:411-422；hamburger aw和salmon se,science.1977；197:461-463)。mm浆细胞由一小群自我更新的癌症干细胞产生，这些干细胞类似于记忆b细胞。这些克隆型b细胞不仅在大多数患者中循环，而且还对许多标准抗mm剂具有抗性，因此似乎是大多数疾病复发的原因(matsui wh等,blood.2004；103:2332-2336；kukreja a等,j exp med.2006；203:1859-1865；jones rj和armstrong sa,biol bloodmarrow transplant.2008年1月；14(增刊1):12-16)。
45、霍奇金氏淋巴瘤
46、作为霍奇金氏淋巴瘤(hl)标志的里德-斯滕伯格(reed-sternberg，rs)细胞是除了浆细胞之外唯一偶尔表达cd138的血细胞(carbone a等,blood.1998；92:2220-2228)。已显示hl细胞系包括一小群细胞，这些细胞缺乏其余细胞上存在的rs标志物cd15和cd30，同时表达与记忆b细胞表型一致的标志物(newcom sr等,int j cell cloning.1988；6:417-431；jones rj等,blood.2006；108:470)。这种小亚群的表型记忆b细胞具有hl细胞系内的所有克隆形成能力。大多数hl患者，包括患有早期疾病的那些患者，都具有与患者rs细胞具有相同克隆lg基因重排的循环记忆b细胞(jones rj等,blood.2006；108:470；jones rj和armstrong sa,biol blood marrow transplant.2008年1月；14(增刊1):12-16)。这些数据表明这些克隆型记忆b细胞可能代表hl干细胞。
47、血液恶性肿瘤的治疗
48、造血干细胞(hsc)用于骨髓移植以治疗血液恶性肿瘤以及非恶性病症(warner等,oncogene(2004)23(43):7164-7177)。在研究人员发现哪些细胞组分负责清髓患者中供体造血和免疫系统的植入之前，多年来，骨髓(bm)一直作为未分级细胞库进行移植(参见例如sergio paulo bydlowski和felipe de lara janz(2012).hematopoietic stem cell inacute myeloid leukemia development,advances in hematopoietic stem cellresearch,rosana pelayo博士(编),isbn:978-953-307-930-l)。患者进行骨髓/造血干细胞(bm/hsc)移植的准备或调理是程序的关键要素。它有两个主要目的：(1)它为患者提供足够的免疫抑制并在骨髓中为移植的hsc清除足够的生态位空间，从而允许移植的细胞在接受体中植入；以及(2)它常常有助于根除恶性肿瘤的根源。
49、传统上，患者的调理已通过施用最大耐受剂量的联合或不联合放射的化学治疗剂混合物来达成。混合物的组分常常被选择为具有不重叠的毒性。当前使用的所有准备方案都是有毒的，并且具有可能危及生命的严重副作用。这些副作用有粘膜炎、恶心和呕吐、脱发、腹泻、皮疹、外周神经病变、不孕、肺毒性和肝毒性。这些副作用中有许多对于老年和患病患者来说尤其危险，并且常常成为决定患者是否接受移植的决定性组成部分。
50、因此，需要准备或调理适合骨髓/造血干细胞(bm/hsc)移植而没有这些毒性的患者。
51、还需要在没有这些毒性的情况下治疗血液恶性肿瘤，诸如aml。
技术实现思路
1、本文提供了结合至flt3和cd3或其抗原结合片段的双特异性抗体。本文还提供了包含此类抗体或片段的药物组合物。本文还提供了使用此类抗体或片段消除受试者中的造血干细胞/造血祖细胞(hsc/hp或一起为hspc)和/或治疗受试者的癌症的方法。
2、在一些方面，本公开提供了一种结合至人类flt3和人类cd3的双特异性人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含：
3、(i)第一轻链可变区(vl1)，所述第一轻链可变区包含vl1互补决定区(cdr)1、vl1cdr2和vl1 cdr3，所述vl1 cdr1、vl1 cdr2和vl1 cdr3是包含seq id no:9的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的轻链可变区(vl)的cdr；和/或
4、(ii)第一重链可变区(vh1)，所述第一重链可变区包含vh1互补决定区(cdr)1、vh1cdr2和vh1 cdr3，所述vh1 cdr1、vh1cdr2和vh1 cdr3是包含seq id no:10的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的重链可变区(vh)的cdr；
5、其中所述vl1和所述vh1结合至人类flt3；并且
6、还包含结合至人类cd3的第二vl(vl2)和第二vh(vh2)。
7、在一些前述或相关方面，vl1 cdr1包含氨基酸序列qeisgy(seq id no:31)(或基本上由其组成或由其组成)，vl1 cdr2包含氨基酸序列aas(seq id no:32)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl1 cdr3包含氨基酸序列lqyasyplt(seq id no:37)(或基本上由其组成或由其组成)；并且vh1 cdr1包含氨基酸序列gfslsrstmg(seq id no:38)(或基本上由其组成或由其组成)，vh1 cdr2包含氨基酸序列ikwndsk(seq id no:39)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh1 cdr3包含氨基酸序列arivyys tyvgyfdv(seq id no:36)(或基本上由其组成或由其组成)。在这些实施方案中的一些实施方案中，cdr如由kabat所确定。
8、在一些前述或相关方面，vl1 cdr1包含氨基酸序列rasqeis gyls(seq id no:71)(或基本上由其组成或由其组成)，vl1 cdr 2包含氨基酸序列aastlhs(seq id no:72)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl1 cdr3包含氨基酸序列lqyasyplt(seq id no:37)(或基本上由其组成或由其组成)；并且vh1 cdr1包含氨基酸序列gfslsrstmgvg(seq idno:73)(或基本上由其组成或由其组成)，vh1 cdr2包含氨基酸序列hikwndskyynpal ks(seq id no:74)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh1 cdr3包含氨基酸序列ivyystyvgyfdv(seq id no:75)(或基本上由其组成或由其组成)。在这些实施方案中的一些实施方案中，cd r如由martin(增强型chothia)编号方案所定义，如http://bioinf.org.uk/abs/info.html#cdrid中所描述，其通过引用整体并入本文。在这些实施方案中的一些实施方案中，cdr如由http://bioinf.org.uk/abs/info.html#cdrid中的“howto identify the cdrs by looking at a sequenc e”部分所定义，其通过引用整体并入本文。
9、在一些前述或相关方面，
10、(iii)vl2包含vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2 cdr3，所述vl2cdr1、vl2 cdr2和vl2cdr3是包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vl的cdr：seq id no:4、seq id no:6、seq id no:14、seq id no:16、seq id no:24和seq idno:29；并且/或者
11、(iv)vh2包含vh2 cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3，所述vh2cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3是包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vh的cdr：seqid no:5、seq id no:7、seq id no:12、seq id no:18、seq id no:20和seq id no:22；其中所述vl2和所述vh2结合至人类cd3。
12、在一些前述或相关方面，
13、vl2 cdr1包含tgavttsny(seq id no:40)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，vl2 cdr2包含gtn(seq id no:41)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl2 cdr3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：alwysnlwv(seq id no:42)、alwfsnhwv(seq id no:46)和alwysnhwv(seq id no:47)；并且
14、vh2 cdr1包含gftfntya(seq id no:43)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含irskynnyat(se q id no:44)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：vrhgnfgnsyvswfay(seq id no:45)、vrh gnfgtsyvswfay(seq id no:48)、vrhghfgtsyvswfay(seq id no:49)、vrhgmfgtsyvswfay(seq id no:50)和vrhgqfgtsyvswfay(seq id no:51)。在这些实施方案中的一些实施方案中，cdr如由kabat所定义。
15、在一些前述或相关方面，
16、vl2 cdr1包含tgavttsny(seq id no:40)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，vl2 cdr2包含gtn(seq id no:41)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl2 cdr3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：alwysnlwv(seq id no:42)、alwfsnhwv(seq id no:46)和alwysnhwv(seq id no:47)；并且/或者
17、vh2 cdr1包含gftfntya(seq id no:43)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含irskynnyat(se q id no:44)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：hgnfgnsyvswfay(seq id no:83)、hgnfgt syvswfay(seq id no:84)、hghfgtsyvswfay(seq id no:85)、hgmfgtsyvswfay(seq id no:86)和hgqfgtsyvsw fay(seq id no:87)。
18、在一些前述或相关方面，vl2 cdr1包含gsstgavttsnyan(seq id no:76)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，vl2cdr2包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：gtnkrss(seq id no:77)、gtnkrvs(seq id no:78)和gtnkrss(seq id no:79)和gtnkras(seq id no:80)；以及vl2 cdr3；并且vl2 cdr3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：alwysnlwv(seq id no:42)、alwfsnhwv(seq id no:46)和alwysnhwv(seq id no:47)；并且/或者
19、vh2 cdr1包含gftfntyamn(seq id no:81)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含rirskynnya tyyadsvkg(seq id no:82)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：hgnfgnsyvswfay(seq id no:83)、hgnfgtsyvswfay(seq id no:84)、hghfgtsyvswf ay(seq id no:85)、hgmfgtsyvswfay(seq id no:86)和hgqfgtsyvswfay(seq id no:87)。在这些实施方案中的一些实施方案中，cdr如由martin(增强型chothia)编号方案所定义，如http://bioinf.org.uk/abs/info.html#cdrid中所描述，其通过引用整体并入本文。在这些实施方案中的一些实施方案中，cdr如由http://bioinf.org.uk/abs/info.html#cdrid中的“how to identify the cdrs by lookin g at a sequence”部分所定义，其通过引用整体并入本文。
20、在一些前述或相关方面，vl2 cdr1包含gsstgavttsnyan(seq id no:76)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，vl2cdr2包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：gtnkrss(seq id no:77)、gtnkrvs(seq id no:78)和gtnkrss(seq id no:79)和gtnkras(seq id no:80)；以及vl2 cdr3；并且vl2 cdr3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：alwysnlwv(seq id no:42)、alwfsnhwv(seq id no:46)和alwysnhwv(seq id no:47)；并且/或者
21、vh2 cdr1包含gftfntyamn(seq id no:81)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含rirskynnya tyyadsvkg(seq id no:82)的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：vrhgnfgnsyvswfay(seq id no:45)、vrhgnfgtsyvswfay(seq id no:48)、vrhghfg tsyvswfay(seq id no:49)、vrhgmfgtsyvswfay(seq id no:50)和vrhgqfgtsyvswfay(seq id no:51)。在这些实施方案中的一些实施方案中，cdr中的任一者如由kabat所确定。
22、在一些前述或相关方面，
23、vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2 cdr3是包含seq id no:4的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vl的cdr，并且/或者vh2 cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3是包含seq id no:5的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vh的cdr。在任何前述或相关方面，
24、vl2 cdr1包含氨基酸序列tgavttsny(seq id no:40)(或基本上由其组成或由其组成)，vl2 cdr2包含氨基酸序列gtn(seq id no:41)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl2 cdr3包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:42)(或基本上由其组成或由其组成)；并且/或者
25、vh2 cdr1包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:43)(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含氨基酸序列irskyn nyat(seq id no:44)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2cdr3包含氨基酸序列vrhgnfgnsyvswfay(seq id no:45)(或基本上由其组成或由其组成)。在这些实施方案中的一些实施方案中，cdr如由kabat所定义。在其它实施方案中，cdr如由mart in(增强型chothia)编号方案或http://bioinf.org.uk/abs/info.html#cdrid中的“how to identify the cdrs by looking at a sequence”部分所定义。
26、在一些前述或相关方面，
27、vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2 cdr3是包含seq id no:4的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vl的cdr，并且/或者vl2 cdr1包含氨基酸序列tgavttsny(seq id no:40)(或基本上由其组成或由其组成)，vl2 cdr2包含氨基酸序列gtn(seq id no:41)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl2 cdr3包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:42)(或基本上由其组成或由其组成)；并且/或者
28、vh2 cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3是包含seq id no:5的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vh的cdr，并且/或者vh2 cdr1包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:43)(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:44)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含氨基酸序列hgnfgnsyvswfay(seqid no:83)(或基本上由其组成或由其组成)。
29、在一些前述或相关方面，
30、vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2 cdr3是包含seq id no:4的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vl的cdr，并且/或者vl2 cdr1包含氨基酸序列tgavttsny(seq id no:40)(或基本上由其组成或由其组成)，vl2 cdr2包含氨基酸序列gtn(seq id no:41)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl cdr3包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:42)(或基本上由其组成或由其组成)；并且/或者
31、vh2 cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3是包含seq id no:12的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vh的cdr，并且/或者vh2 cdr1包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:43)(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:44)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含氨基酸序列vrhgnfgtsyvswfay(seq id no:48)(或基本上由其组成或由其组成)。
32、在一些前述或相关方面，
33、vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2 cdr3是包含seq id no:14或seq id no:16的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vl的cdr，并且/或者vl2 cdr1包含氨基酸序列tgavttsny(seq id no:40)(或基本上由其组成或由其组成)，vl2 cdr2包含氨基酸序列gtn(seq id no:41)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl cdr3包含氨基酸序列alwfsnhwv(seq id no:46)(或基本上由其组成或由其组成)；并且/或者
34、vh2 cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3是包含seq id no:12的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vh的cdr，并且/或者vh2 cdr1包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:43)(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:44)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含氨基酸序列vrhgnfgtsyvswfay(seq id no:45)(或基本上由其组成或由其组成)。
35、在一些前述或相关方面，vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2 cdr3是包含seq id no:14的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vl的cdr，并且/或者vl2 cdr1包含氨基酸序列tgavttsny(seq id no:40)(或基本上由其组成或由其组成)，vl2 cdr2包含氨基酸序列gtn(seq id no:41)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl cdr3包含氨基酸序列alwfsnhwv(seq id no:46)(或基本上由其组成或由其组成)；并且/或者
36、vh2 cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3是包含seq id no:18的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vh的cdr，并且/或者vh2 cdr1包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:43)(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:44)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含氨基酸序列vrhghfgtsyvswfay(seq id no:49)(或基本上由其组成或由其组成)。
37、在一些前述或相关方面，vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2 cdr3是包含seq id no:14的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vl的cdr，并且/或者vl2 cdr1包含氨基酸序列tgavttsny(seq id no:40)(或基本上由其组成或由其组成)，vl2 cdr2包含氨基酸序列gtn(seq id no:41)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl cdr3包含氨基酸序列alwfsnhwv(seq id no:46)(或基本上由其组成或由其组成)；并且/或者
38、vh2 cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3是包含seq id no:20的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vh的cdr，并且/或者vh2 cdr1包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:43)(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:44)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含氨基酸序列vrhgmfgtsyvswfay(seq id no:50)(或基本上由其组成或由其组成)。
39、在一些前述或相关方面，
40、vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2 cdr3是包含seq id no:14的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vl的cdr，并且/或者vl2 cdr1包含氨基酸序列tgavttsny(seq idno:40)(或基本上由其组成或由其组成)，vl2 cdr2包含氨基酸序列gtn(seq id no:41)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl cdr3包含氨基酸序列alwfsnhwv(seq id no:46)(或基本上由其组成或由其组成)；并且/或者
41、vh2 cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3是包含seq id no:22的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vh的cdr，并且/或者vh2 cdr1包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:43)(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:44)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含氨基酸序列vrhgqfgtsyvswfay(seq id no:51)(或基本上由其组成或由其组成)。
42、在一些前述或相关方面，vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2 cdr3是包含seq id no:24或seq id no:29的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vl的cdr，并且/或者vl2cdr1包含氨基酸序列tgavttsny(seq id no:40)(或基本上由其组成或由其组成)，vl2cdr2包含氨基酸序列gtn(seq id no:41)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl cdr3包含氨基酸序列alwysnhwv(seq id no:47)(或基本上由其组成或由其组成)；并且/或者
43、vh2 cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3是包含seq id no:5的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vh的cdr，并且/或者vh2 cdr1包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:43)(或基本上由其组成或由其组成)，vh2 cdr2包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:44)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含氨基酸序列vrhgnfgnsyvswfay(seq id no:45)(或基本上由其组成或由其组成)。
44、在一些方面，本公开提供了一种结合至人类flt3和人类cd3的双特异性人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含：
45、vl2，所述vl2包含vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2 cdr3，所述vl2 cdr1、vl2 cdr2和vl2cdr3是包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vl的cdr：seq id no:14、seq id no:16、seq id no:24和seq id no:29；和/或vh2，所述vh2包含vh2 cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3，所述vh2cdr1、vh2 cdr2和vh2 cdr3是包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)的vh的cdr：seq id no:12、seq idno:18、seq id no:20和seq id no:22；其中所述vl2和所述vh2结合至人类cd3；并且还包含结合至人类flt3的vl1和vh1。
46、在一些前述或相关方面，vl2 cdr1包含氨基酸序列tgavttsny(seq id no:40)(或基本上由其组成或由其组成)，vl2cdr2包含氨基酸序列gtn(seq id no:41)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vl2 cdr3包含氨基酸序列alwfsnhwv(seq id no:46)或alwysnhwv(seq id no:47)(或基本上由其组成或由其组成)；并且/或者vh2 cdr1包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:43)，vh2 cdr2包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:44)(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2 cdr3包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：vrhgnfgtsyvsfay(seq id no:48)、vrhghfgtsyvsfay(seq id no:49)、vrhgmfgtsyvsfay(seq id no:50)和vrhgqfgtsyvsfay(seq id no:51)。
47、在一些前述或相关方面，vl1包含seq id no:9的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
48、在一些前述或相关方面，vh1包含seq id no:10的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
49、在一些前述或相关方面，本文所描述的双特异性人源化抗flt3/cd3抗体和片段包含单链可变片段(scfv)，其中所述scfv包含vl1和vh1，诸如本文所描述的任何vl1和vh1。在一些实施方案中，scfv包含seq id no:52的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
50、在一些前述或相关方面，本文所描述的双特异性人源化抗flt3/cd3抗体包含重链(hc)和轻链(lc)，其中所述hc包含vl1、vh1和vh2。在一些实施方案中，vl1通过第一接头连接至vh1，并且vh1通过第二接头连接至vh2。在一些实施方案中，vl1的c末端通过第一接头连接至vh1的n末端，并且vh1的c末端通过第二接头连接至vh2的n末端。在一些实施方案中，第一接头和第二接头具有式(gly3-4-ser)1-4。在一些实施方案中，第一接头具有式(gly4-ser)4。在一些实施方案中，第二接头具有式(gly4-ser)3。
51、在一些前述或相关方面，本文所描述的双特异性人源化抗flt3/cd3抗体包含hc，所述hc包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：seq idno:53、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56和seq id no:57。
52、在一些实施方案中，hc包含seq id no:53的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
53、在一些实施方案中，hc包含seq id no:54的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
54、在一些实施方案中，hc包含seq id no:55的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
55、在一些实施方案中，hc包含seq id no:56的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
56、在一些实施方案中，hc包含seq id no:57的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
57、在一些前述或相关方面，本文所描述的双特异性人源化抗flt3/cd3抗体包含含有vh2的lc。
58、在一些前述或相关方面，lc包含选自由以下组成的组的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)：seq id no:4、seq id no:14、seq id no:16、seq id no:24和seq idno:29。
59、在一些实施方案中，lc包含seq id no:4的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
60、在一些实施方案中，lc包含seq id no:14的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
61、在一些实施方案中，lc包含seq id no:16的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
62、在一些实施方案中，lc包含seq id no:24的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
63、在一些实施方案中，lc包含seq id no:29的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
64、在一些方面，本公开提供了一种结合至人类flt3和人类cd3的双特异性人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含：
65、(i)第一轻链可变区(vl1)，其中所述vl1包含seq id no:1的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或
66、(ii)第一重链可变区(vh1)，其中所述vh1包含seq id no:2的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；其中所述vl1和所述vh1结合至人类flt3；并且还包含结合至人类cd3的第二轻链可变区(vl2)和第二重链可变区(vh2)。
67、在一些前述或相关方面，vl1包含seq id no:1的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh1包含seq id no:2的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
68、在一些前述或相关方面，本文所描述的双特异性人源化抗flt3/cd3抗体和片段包含单链可变片段(scfv)，其中所述scfv包含vl1和vh1，并且其中所述scfv包含seq id no:3的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
69、在一些前述或相关方面，
70、(iii)vl2包含seq id no:4或seq id no:6的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；并且/或者
71、(iv)vh2包含seq id no:5或seq id no:7的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
72、在一些前述或相关方面，vl2包含seq id no:4的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2包含seq id no:5的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
73、在一些前述或相关方面，vl2包含seq id no:6的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2包含seq id no:7的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
74、在一些方面，本公开提供了一种结合至人类flt3和人类cd3的双特异性人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含：vl2，所述vl2包含seq id no:4或seq idno:6的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或vh2，所述vh2包含seq id no:5或seq id no:7的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；其中所述vl2和所述vh2结合至人类cd3；并且还包含结合至人类flt3的vl1和vh1。在一些实施方案中，vl2包含seq idno:4的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2包含seq id no:5的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。在一些实施方案中，vl2包含seq id no:6的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)，并且vh2包含seq id no:7的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
75、在一些前述或相关方面，抗体包含重链(hc)和/或轻链(lc)。在一些实施方案中，lc包含恒定结构域。在一些实施方案中，恒定结构域包含seq id no:58的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
76、在一些前述或相关方面，hc包含fc区。在一些实施方案中，fc区是igg。在一些实施方案中，igg是人类igg1、人类igg2、人类igg3或人类igg4。在一些实施方案中，igg是igg1。
77、在一些前述或相关方面，fc区包含seq id no:59的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。在一些前述或相关方面，fc区包含seq id no:27的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
78、在一些前述或相关方面，抗体包含lc，所述lc包含seq id no:8的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或hc，所述hc包含seq id no:11的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
79、在一些前述或相关方面，抗体包含lc，所述lc包含seq id no:8的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或hc，所述hc包含seq id no:13的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
80、在一些前述或相关方面，抗体包含lc，所述lc包含seq id no:15的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或hc，所述hc包含seq id no:13的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
81、在一些前述或相关方面，抗体包含lc，所述lc包含seq id no:17的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或hc，所述hc包含seq id no:13的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
82、在一些前述或相关方面，抗体包含lc，所述lc包含seq id no:17的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或hc，所述hc包含seq id no:19的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
83、在一些前述或相关方面，抗体包含lc，所述lc包含seq id no:17的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或hc，所述hc包含seq id no:21的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
84、在一些前述或相关方面，抗体包含lc，所述lc包含seq id no:17的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或hc，所述hc包含seq id no:23的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
85、在一些前述或相关方面，抗体包含lc，所述lc包含seq id no:25的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或hc，所述hc包含seq id no:28的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
86、在一些前述或相关方面，抗体包含lc，所述lc包含seq id no:30的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)；和/或hc，所述hc包含seq id no:28的氨基酸序列(或基本上由其组成或由其组成)。
87、在一些前述或相关方面，双特异性人源化抗flt3/cd3抗体或片段是单克隆抗体。在一些前述或相关方面，抗体或片段是纯化的。
88、在一些前述或相关方面，抗体或片段在人体内的半衰期是1天至14天。在一些前述或相关方面，抗体或片段在人体内的半衰期是4天至7天。
89、在一些方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的任一前述或相关方面的抗体或片段以及药学上可接受的赋形剂。在一些前述或相关方面，药物组合物还可以包含抗肿瘤剂。
90、在一些方面，本公开提供了一种治疗有需要的受试者的血液癌症的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用(例如，治疗有效量的)：(i)任一前述或相关方面的抗体或片段，或(ii)任何前述或相关方面的药物组合物。
91、在一些方面，本公开提供了一种准备或调理有需要的受试者用于造血细胞移植的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用(例如，治疗有效量的)：(i)任一前述或相关方面的抗体或片段，(ii)任一前述或相关方面的药物组合物。在一些实施方案中，施用在造血细胞移植之前进行。在一些实施方案中，有需要的受试者患有血液癌症。
92、在方法的一些实施方案中，施用治疗有效量的抗体或片段使表达cd34、flt3、cd33、cd11b、cd16、cd15和cd66b中的一者或多者的细胞群体降低至少90％。在一些实施方案中，施用治疗有效量的抗体或片段使表达cd34、flt3中的一者或多者的细胞群体降低至少90％。
93、在方法的一些实施方案中，所述方法还包括在施用后对受试者进行造血细胞移植。在一些实施方案中，造血细胞移植包括向受试者移植造血干细胞和/或造血祖细胞。在一些实施方案中，在施用后5天至5周进行造血细胞移植。在一些实施方案中，在施用后约2至3周进行造血细胞移植。
94、在方法的一些实施方案中，血液癌症是急性髓系白血病(aml)、急性淋巴母细胞白血病(all)、慢性髓系白血病(cml)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、外周t细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、神经母细胞瘤、非恶性遗传性或获得性骨髓病症、多发性骨髓瘤、树突状细胞肿瘤或母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(bpdcn)。在一些实施方案中，血液癌症是aml。在一些实施方案中，血液癌症是树突状细胞肿瘤。在一些实施方案中，血液癌症是母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(bpdcn)。在一些实施方案中，血液癌症是非恶性遗传性或获得性骨髓病症，并且其中所述非恶性遗传性或获得性骨髓病症选自镰状贫血、重型β-地中海贫血、难治性戴蒙德-布莱克凡贫血、骨髓增生异常综合征、特发性严重再生障碍性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、纯红细胞再生障碍、范可尼贫血、无巨核细胞增多症或先天性血小板减少症。
95、在方法的一些实施方案中，向受试者施用的抗体或片段的量或治疗有效量为约0.01mg/kg至约2mg/kg。在一些实施方案中，向受试者施用的抗体或片段的量或治疗有效量为约0.1mg/kg至约0.3mg/kg。
96、在方法的一些实施方案中，施用是单剂量一次。
97、在方法的一些实施方案中，每1-14天施用一次，持续约1至4周。在方法的一些实施方案中，每3-7天施用一次，持续2至3周。
98、在方法的一些实施方案中，施用是静脉内施用(例如，通过输注至受试者体内)。
99、在药物组合物的一些实施方案中，所述组合物还包含检查点抑制剂。
100、在方法的一些实施方案中，所述方法还包括施用检查点抑制剂。
101、在一些前述或相关方面，检查点抑制剂是抗pd1拮抗剂、抗pd-l1拮抗剂和/或抗ctla4拮抗剂(例如，拮抗性抗体)。在一些前述或相关方面，检查点抑制剂是抗pd1抗体。
102、在一些前述或相关方面，抗体或片段的施用与检查点抑制剂的施用同时进行。在一些前述或相关方面，抗体或片段的施用在检查点抑制剂的施用之前进行。在一些前述或相关方面，抗体或片段的施用在检查点抑制剂的施用之后进行。
103、在一些前述或相关方面，受试者是人。
104、定义
105、如本文所用，术语“约”当用于修饰数值时，指示高于和低于所述数值至多10％的偏差保持在所叙述值的预期含义内。
106、如本文所用，术语“vl”是指抗体的轻链可变区。
107、如本文所用，术语“vh”是指抗体的重链可变区。
108、如本文所用，相对于参考多肽序列的术语“氨基酸序列同一性百分比(％)”或“序列同一性百分比”被定义为候选序列中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。序列同一性百分比在比对序列并引入空位(如有必要)后确定，以达成最大序列同一性百分比。为了确定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以通过本领域中已知的各种方式来达成。示例比对工具包括但不限于blastp、blast-2、align(例如，align-2)或megalign(dnastar)软件。
1.一种结合至人类flt3和人类cd3的双特异性人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含：
2.如权利要求1所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
3.如权利要求1所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
4.如权利要求1-3中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
5.如权利要求4所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
6.如权利要求4所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
7.如权利要求4所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
8.如权利要求4所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
9.如权利要求4所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
10.如权利要求4所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
11.如权利要求4所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
12.如权利要求4所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
13.如权利要求4所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
14.一种结合至人类flt3和人类cd3的双特异性人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含：
15.如权利要求14所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
16.如权利要求1-15中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述vl1包含seq id no:9的氨基酸序列。
17.如权利要求1-16中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述vh1包含seq id no:10的氨基酸序列。
18.如权利要求1-17中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，所述抗体或片段包含单链可变片段(scfv)，其中所述scfv包含所述vl1和所述vh1，并且其中所述scfv包含seqid no:52的氨基酸序列。
19.如权利要求1-18中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述抗体或片段包含重链(hc)和轻链(lc)，其中所述hc包含所述vl1、所述vh1和所述vh2。
20.如权利要求19所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述vl1通过第一接头连接至所述vh1，并且其中所述vh1通过第二接头连接至所述vh2；任选地，其中所述vl1的c末端通过第一接头连接至所述vh1的n末端，并且其中所述vh1的c末端通过第二接头连接至所述vh2的n末端。
21.如权利要求20所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述第一接头和所述第二接头具有式(gly3-4-ser)1-4。
22.如权利要求21所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述第一接头具有式(gly4-ser)4。
23.如权利要求21或22所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述第二接头具有式(gly4-ser)3。
24.如权利要求19所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述hc包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：seq id no:53、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56和seqid no:57。
25.如权利要求24所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述hc包含seq id no:53的氨基酸序列。
26.如权利要求24所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述hc包含seq id no:54的氨基酸序列。
27.如权利要求24所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述hc包含seq id no:55的氨基酸序列。
28.如权利要求24所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述hc包含seq id no:56的氨基酸序列。
29.如权利要求24所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述hc包含seq id no:57的氨基酸序列。
30.如权利要求19-29中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述lc包含所述vh2。
31.如权利要求30所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述lc包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：seq id no:4、seq id no:14、seq id no:16、seq id no:24和seq idno:29。
32.如权利要求31所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述lc包含seq id no:4的氨基酸序列。
33.如权利要求31所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述lc包含seq id no:14的氨基酸序列。
34.如权利要求31所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述lc包含seq id no:16的氨基酸序列。
35.如权利要求31所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述lc包含seq id no:24的氨基酸序列。
36.如权利要求31所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述lc包含seq id no:29的氨基酸序列。
37.一种结合至人类flt3和人类cd3的双特异性人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含：
38.如权利要求37所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述vl1具有seq id no:1的氨基酸序列，并且所述vh1具有seq id no:2的氨基酸序列。
39.如权利要求37所述的双特异性人源化抗体或片段，所述抗体或片段包含单链可变片段(scfv)，其中所述scfv包含所述vl1和所述vh1，并且其中所述scfv包含seq id no:3的氨基酸序列。
40.如权利要求37-39中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中：
41.如权利要求40所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述vl2具有seq id no:4的氨基酸序列，并且所述vh2具有seq id no:5的氨基酸序列。
42.如权利要求40所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述vl2具有seq id no:6的氨基酸序列，并且所述vh2具有seq id no:7的氨基酸序列。
43.一种结合至人类flt3和人类cd3的双特异性人源化抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段包含：
44.如权利要求43所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述vl1具有seq id no:4的氨基酸序列，并且所述vh1具有seq id no:5的氨基酸序列。
45.如权利要求43所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述vl1具有seq id no:6的氨基酸序列，并且所述vh1具有seq id no:7的氨基酸序列。
46.如权利要求37-45中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述抗体或片段包含重链(hc)和轻链(lc)。
47.如权利要求19-36和46中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述lc包含恒定结构域。
48.如权利要求47所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述恒定结构域包含seqid no:58的氨基酸序列。
49.如权利要求19-36和46-48中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述hc包含fc区。
50.如权利要求49所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述fc区是igg。
51.如权利要求50所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述igg是人类igg1、人类igg2、人类igg3或人类igg4。
52.如权利要求49所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述fc区包含seq id no:59的氨基酸序列。
53.如权利要求49所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述fc区包含seq id no:27的氨基酸序列。
54.如权利要求1或4所述的双特异性人源化抗体，其中所述抗体包含含有seq id no:8的氨基酸序列的lc和含有seq id no:11的氨基酸序列的hc。
55.如权利要求1或4所述的双特异性人源化抗体，其中所述抗体包含含有seq id no:8的氨基酸序列的lc和含有seq id no:13的氨基酸序列的hc。
56.如权利要求1或4所述的双特异性人源化抗体，其中所述抗体包含含有seq id no:15的氨基酸序列的lc和含有seq id no:13的氨基酸序列的hc。
57.如权利要求1或4所述的双特异性人源化抗体，其中所述抗体包含含有seq id no:17的氨基酸序列的lc和含有seq id no:13的氨基酸序列的hc。
58.如权利要求1或4所述的双特异性人源化抗体，其中所述抗体包含含有seq id no:17氨基酸序列的lc和含有seq id no:19的氨基酸序列的hc。
59.如权利要求1或4所述的双特异性人源化抗体，其中所述抗体包含含有seq id no:17的氨基酸序列的lc和含有seq id no:21的氨基酸序列的hc。
60.如权利要求1或4所述的双特异性人源化抗体，其中所述抗体包含含有seq id no:17氨基酸序列的lc和含有seq id no:23的氨基酸序列的hc。
61.如权利要求1或4所述的双特异性人源化抗体，其中所述抗体包含含有seq id no:25的氨基酸序列的lc和含有seq id no:28的氨基酸序列的hc。
62.如权利要求1或4所述的双特异性人源化抗体，其中所述抗体包含含有seq id no:30的氨基酸序列的lc和含有seq id no:28的氨基酸序列的hc。
63.如权利要求1-62中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，所述抗体或片段是单克隆抗体。
64.如权利要求1-63中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述抗体或片段是纯化的。
65.如权利要求1-64中任一项所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述抗体或片段在人体中的半衰期为1天至14天。
66.如权利要求65所述的双特异性人源化抗体或片段，其中所述抗体或片段在人体中的半衰期为4天至7天。
67.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的权利要求1-66中任一项所述的抗体或片段和药学上可接受的赋形剂。
68.如权利要求67所述的药物组合物，所述药物组合物还包含抗肿瘤剂。
69.一种治疗有需要的受试者的血液癌症的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的：(i)权利要求1-66中任一项所述的抗体或片段，或(ii)权利要求67或68所述的药物组合物。
70.如权利要求69所述的方法，其中所述血液癌症是急性髓系白血病(aml)、急性淋巴母细胞白血病(all)、慢性髓系白血病(cml)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、外周t细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、神经母细胞瘤、非恶性遗传性或获得性骨髓病症、多发性骨髓瘤、树突状细胞肿瘤或母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(bpdcn)。
71.如权利要求69所述的方法，其中所述血液癌症是aml。
72.如权利要求69所述的方法，其中所述血液癌症是树突状细胞肿瘤。
73.如权利要求69所述的方法，其中所述血液癌症是母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(bpdcn)。
74.如权利要求69所述的方法，其中所述血液癌症是非恶性遗传性或获得性骨髓病症，并且其中所述非恶性遗传性或获得性骨髓病症选自镰状贫血、重型β-地中海贫血、难治性戴蒙德-布莱克凡贫血、骨髓增生异常综合征、特发性严重再生障碍性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、纯红细胞再生障碍、范可尼贫血、无巨核细胞增多症或先天性血小板减少症。
75.一种准备或调理有需要的受试者用于造血细胞移植的方法，其中所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的：(i)权利要求1-66中任一项所述的抗体或片段，或(ii)权利要求67或68所述的药物组合物；并且其中所述施用在所述造血细胞移植之前进行。
76.如权利要求75所述的方法，其中所述治疗有效量使表达cd34、flt3、cd33、cd11b、cd16、cd15和cd66b中的一者或多者的细胞群体减少至少90％。
77.如权利要求75所述的方法，其中所述治疗有效量使表达flt3和cd34的细胞群体减少至少90％。
78.如权利要求75和77中任一项所述的方法，其中有需要的所述受试者患有血液癌症。
79.如权利要求78所述的方法，其中所述血液癌症是急性髓系白血病(aml)、急性淋巴母细胞白血病(all)、慢性髓系白血病(cml)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、外周t细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、神经母细胞瘤、非恶性遗传性或获得性骨髓病症、多发性骨髓瘤、树突状细胞肿瘤或母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(bpdcn)。
80.如权利要求78所述的方法，其中所述血液癌症是aml。
81.如权利要求78所述的方法，其中所述血液癌症是树突状细胞肿瘤。
82.如权利要求78所述的方法，其中所述血液癌症是母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(bpdcn)。
83.如权利要求78所述的方法，其中所述血液癌症是非恶性遗传性或获得性骨髓病症，并且其中所述非恶性遗传性或获得性骨髓病症选自镰状贫血、重型β-地中海贫血、难治性戴蒙德-布莱克凡贫血、骨髓增生异常综合征、特发性严重再生障碍性贫血、阵发性睡眠性血红蛋白尿、纯红细胞再生障碍、范可尼贫血、无巨核细胞增多症或先天性血小板减少症。
84.如权利要求75-83中任一项所述的方法，所述方法还包括在所述施用后对所述受试者进行造血细胞移植。
85.如权利要求84所述的方法，其中所述造血细胞移植包括向所述受试者移植造血干细胞和/或造血祖细胞。
86.如权利要求84或85所述的方法，其中所述造血细胞移植在所述施用后5天至5周进行。
87.如权利要求86所述的方法，其中所述造血细胞移植在所述施用后约2至3周进行。
88.如权利要求69-87中任一项所述的方法，其中所述治疗有效量是约0.01mg/kg至约2mg/kg的所述抗体或片段的量。
89.如权利要求88所述的方法，其中所述治疗有效量是约0.1mg/kg至约0.3mg/kg的所述抗体或片段的量。
90.如权利要求69-89中任一项所述的方法，其中所述施用是单剂量一次。
91.如权利要求69-89中任一项所述的方法，其中所述施用是每1-14天一次，持续约1至4周。
92.如权利要求69-89中任一项所述的方法，其中所述施用是每3-7天一次，持续2至3周。
93.如权利要求69-92中任一项所述的方法，其中所述施用是静脉内施用。
94.如权利要求93所述的方法，其中所述静脉内施用是通过输注至所述受试者中。
95.如权利要求69-94中任一项所述的方法，所述方法还包括施用检查点抑制剂。
96.如权利要求95所述的方法，其中所述检查点抑制剂是抗pd1拮抗剂、抗pd-l1拮抗剂和/或抗ctla4拮抗剂。
97.如权利要求96所述的方法，其中所述检查点抑制剂是抗pd1抗体。
98.如权利要求95-97中任一项所述的方法，其中所述施用与所述检查点抑制剂的所述施用同时或之后进行。
99.如权利要求69-98中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
