本发明属于免疫分析，具体涉及一种白介素检测试剂、制备方法和及其检测方法。
背景技术：
1、白细胞介素（interleukin, il），简称白介素，是一种由多种细胞产生并作用于多种细胞的细胞因子。白介素最初被认为只由白细胞表达，但后来发现许多其他体细胞也能产生。目前至少发现了38种白细胞介素，分别命名为il-1~il-38，功能复杂，复杂重叠；在免疫细胞的成熟、活化、增殖和免疫调节等一系列过程中均发挥重要作用，此外它们还参与机体的多种生理及病理反应。
2、研究者将目前已知的白细胞介素分为6个家族，包括il-1家族、il-2家族、il-6家族、il-8家族、il-10家族和il-17家族。白介素在感染、慢性炎症、免疫缺陷病、自身免疫疾病、代谢障碍、心血管疾病和癌症的治疗中都有重要的作用。如白介素-1 （il-1）最早是在1980年代被克隆出来，并很快备认为是调节炎症过程的关键因素，il-1有白介素-1 a（il-1a）和白介素-1β（il-1β）两个基因，il-1β是炎症反应的重要因子，并参与多种细胞活动，包括细胞增殖、分化和凋亡，也与自体免疫炎症、第二型糖尿病、阿尔茨海默氏症、肥胖症、癌症和动脉粥样硬化等疾病有关；白介素-2 （il-2）的生物学作用主要是刺激t细胞增殖，此外还有其他重要功能，例如，维持nk细胞的活化状态，促进nk细胞增殖和分化，调节并保持nk细胞的自然杀伤力。诱导细胞毒性t淋巴细胞(ctl)的产生和增殖，以及促进b细胞增殖分化等；白介素-4（il-4）活化细胞毒性t细胞，它被认为是典型的由th2细胞产生的细胞因子，对t、b淋巴细胞的发育以及驱动体液免疫反应和抗体产生起着十分重要的作用；白介素-8（il-8）水平升高多见于自身免疫性疾病，如银屑病、免疫性血管炎、肾小球肾炎和类风湿性关节炎；白介素-17（il-17）是一种高度通用的促炎细胞因子，在应对损伤、生理压力和感染期间在维持健康方面具有重要的环境和组织依赖性作用。
3、目前用于检测白介素的免疫分析方法主要有酶联免疫分析法、放射免疫分析法、荧光分析法。酶联免疫吸附法作为传统分析方法，其灵敏度有待提高；放射免疫分析法灵敏度较高，但存在放射性污染的问题；其他的分析方法存在操作步骤烦琐、费时、设备昂贵等问题。
4、化学发光免疫分析法采用催化剂催化化学发光物质形成一种激发态中间体，当激发态中间体回到稳定的基态时，发出光子，具有操作简单，自动化程度高，检测速度快等优点，但是市售的白介素抗体含有的少量杂质，会影响检测结果的准确度，尤其是当样本中的待检测物质的含量接近医学检测临界值时，超标或者降低的值只多（少）一点点，就会导致结果的误判。
技术实现思路
1、为了解决现有定量检测白介素的方法存在的准确性低、灵敏度低的问题，本发明提供了一种白介素检测试剂、制备方法及其检测方法。
2、本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：
3、一种白介素检测试剂，包括：r1试剂：生物素标记的白介素抗体1溶液、r2试剂：吖啶酯标记的白介素抗体2溶液、r3试剂链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，所述的生物素标记的白介素抗体1和吖啶酯标记的白介素抗体2分别作用于白介素-1β的不同表位，两个抗体中至少一个为单克隆抗体。
4、进一步地，所述的r1试剂浓度为0.01μg/ml-1.0μg/ml，r2试剂浓度为0.01μg/ml-1.0μg/ml，r3试剂含链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液0.01-0.5mg/ml。
5、进一步地，所述的r3试剂中，磁微粒为超顺磁微粒，表面的活性基团为羧基、氨基或苯甲磺酰基。
6、进一步地，所述的吖啶酯采用dmae类，包括吖啶酯或酰胺类吖啶酯。
7、进一步地，所述的白介素还选自il-1β、il-2、il-3、il-4、il-5、il-7、il-8、il-9、il-11、il-12、il-13、il-14、il-15、il-16、il-17a、il-18、il-19、il-20、il-21、il-22、il-23、il-24、il-25、il-26、il-27、il-28、il-29、il-30、il-31、il-32、il-33、il-34、il-35、il-36、il-37或il-38，在制备所述的一种白介素检测试剂时，根据所要检测的该白介素的种类，选择对应的白介素抗体1和白介素抗体2用于r1和r2试剂的制备，满足标记后的白介素抗体1和标记后的白介素抗体2分别作用于待检测白介素的不同表位。
8、进一步地，所述的检测试剂还包括校准品白介素重组蛋白溶液。
9、一种白介素-检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
10、r1试剂的制备：取白介素抗体1置于超滤离心管中，加入0.05m碳酸盐缓冲液，离心后液体弃去，将超滤管倒置于离心管中，加入0.05m碳酸盐缓冲液，离心后收集液体，按白介素抗体1和活化的生物素的质量比5:1-10:1的比例混合，室温避光放置2-4小时后置入透析袋中，将0.05m碳酸盐缓冲液置换为0.05-0.1 m的 pb缓冲液，将收集到的生物素标记白介素抗体1溶液选用标记保存液稀释至0.01μg/ml-1.0μg/ml；
11、r2试剂的制备：取白介素抗体2置于超滤离心管中，加入0.05m碳酸盐缓冲液，离心后液体弃去，将超滤管倒置于离心管中，加入0.05m碳酸盐缓冲液，离心后收集液体，按吖啶酯和白介素抗体2质量比0.1:1-0.3:1混合，充分混匀，室温避光放置2-4小时后置入透析袋中，将0.05m碳酸盐缓冲液置换为0.05-0.1 m的 pb缓冲液，将收集到的吖啶酯标记白介素抗体2溶液选用标记保存液稀释至0.01μg/ml-1.0μg/ml；
12、r3试剂的制备：用磁微粒保存液稀释预售的链霉亲和素的磁微粒悬浮液至链霉亲和素包被的磁微粒至0.01mg/ml-0.5mg/ml。
13、进一步地，所述的标记保存液为0.05-0.1 m磷酸盐缓冲液，所述的缓冲液含1%bsa、0.01% proclin300 。
14、进一步地，所述的r3试剂含0.1%氯乙酰胺。
15、进一步地，所述的白介素检测试剂的制备方法，还包括制备校准品的步骤，校准品的制备步骤为：取白介素重组蛋白，用校准品稀释液溶解，将白介素重组蛋白稀释成不同浓度的白介素重组蛋白溶液，所述的校准品稀释液为0.05-0.1 m磷酸盐缓冲液，缓冲液含1%bsa、0.01% proclin300，白介素重组蛋白溶液浓度及浓度范围根据检测白介素种类的不同进行调整。
16、进一步地，所述的磁微粒保存液为0.05-0.1 m的hepes缓冲液，所述的缓冲液含0.1% bsa、0.01% proclin300、0.1%氯乙酰胺。
17、进一步地，分别取r1试剂、r2试剂、r3试剂分别装入u形管中密封，包装于包装盒中，即得；根据包装规格的需求，r1试剂、r2试剂、r3试剂可以进行调整。根据需求，试剂盒中可放置校准品溶液，校准品溶液浓度可选择组合。
18、一种白介素检测试剂的检测方法，其特征在于该检测试剂的检测方法包括步骤如下：
19、1）取待检测血清或血浆样品，加入生物素标记的白介素抗体1溶液、吖啶酯标记的白介素抗体2溶液，形成生物素标记的白介素抗体1—白介素抗原—吖啶酯标记的白介素抗体2夹心复合体，37℃孵育；
20、2）向1）中加入链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，1）中的夹心复合物在链霉亲和素和生物素的相互作用下形成固相，37℃孵育；
21、3）加入清洗缓冲液，将游离的吖啶酯或者样品中不与抗体结合的其他物质的混合物清洗去除；
22、4）加入酸性激发液，使吖啶酯游离；
23、5）加入碱性激发液，使吖啶酯发射光子；
24、6）记录样品的光量子数，根据样品的光量子数与白介素浓度成正比的关系计算出白介素的浓度。
25、进一步地，所述的清洗缓冲液包括磷酸盐缓冲液和非离子性表面活性剂，酸性激发液为过氧化氢和硝酸的混合溶液，碱性激发液为氢氧化钠溶液。
26、本发明的有益效果：
27、1）与现有技术相比，r1试剂和r2试剂制备时均使用超滤离心管对白介素抗体1和白介素抗体2进行纯化，标记的抗体再使用透析袋将碳酸盐缓冲液置换为 pb缓冲液，可以减少检测过程中杂质的干扰，提高检测的准确度。
28、2）生物素标记的白介素抗体1和吖啶酯标记的白介素抗体2分别作用于白介素抗原的不同表位，可形成双抗体夹心复合体，再通过生物素-亲和素放大系统，大大提高了试剂的灵敏度。
1.一种白介素检测试剂，包括：r1试剂：生物素标记的白介素抗体1溶液、r2试剂：吖啶酯标记的白介素抗体2溶液、r3试剂：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，其特征在于所述的生物素标记的白介素抗体1和吖啶酯标记的白介素抗体2分别作用于白介素的不同表位，两个抗体中至少一个为单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的白介素检测试剂，其特征在于，所述的r1试剂浓度为0.01μg/ml-1.0μg/ml，r2试剂浓度为0.01μg/ml-1.0μg/ml，r3试剂含链霉亲和素包被的磁微粒0.01mg/ml-0.5mg/ml。
3.根据权利要求1所述的白介素检测试剂，其特征在于，所述的白介素抗体1和白介抗体2优选两个抗体均为单克隆抗体。
4.根据权利要求1所述的白介素检测试剂，其特征在于，所述的白介素选自il-1β、il-2、il-3、il-4、il-5、il-7、il-8、il-9、il-11、il-12、il-13、il-14、il-15、il-16、il-17、il-18、il-19、il-20、il-21、il-22、il-23、il-24、il-25、il-26、il-27、il-28、il-29、il-30、il-31、il-32、il-33、il-34、il-35、il-36、il-37或il-38。
5.根据权利要求1所述的白介素检测试剂，其特征在于，所述的检测试剂还包括校准品白介素重组蛋白溶液。
6.根据权利要求5所述的白介素检测试剂，其特征在于所述的校准品白介素重组蛋白溶液的溶剂为0.05-0.1 m磷酸盐缓冲液，缓冲液含1% bsa、0.01% proclin300 。
7.一种如权利要求1-6任一项所述的白介素检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的白介素检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的标记保存液为0.05-0.1 m磷酸盐缓冲液含1% bsa、0.01% proclin300 ，所述的r3试剂含0.1%氯乙酰胺。
9.根据权利要求7所述的白介素检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的磁微粒保存液为0.05-0.1 m的hepes缓冲液，所述的hepes缓冲液含0.1% bsa、0.01% proclin300、0.1%氯乙酰胺。
10.一种如权利要求1-9任一项所述的白介素检测试剂的检测方法，其特征在于该检测试剂的检测方法包括步骤如下：
11.根据权利要求10所述的白介素检测试剂的检测方法，其特征在于，所述的清洗缓冲液包括磷酸盐缓冲液和非离子性表面活性剂，酸性激发液为过氧化氢和硝酸的混合溶液，碱性激发液为氢氧化钠溶液。
