本发明涉及一种黄颡鱼mirna、其模拟物和抑制物的应用，具体涉及一种黄颡鱼mirna、其模拟物和抑制物在制备调控atg14基因表达试剂中的应用，属于分子生物技术学领域。
背景技术：
1、microrna(mirna)为一种内源性非编码小分子rna，长度约为20个核苷酸，与细胞的生长、代谢和分化等重要生命活动密切相关。在动物细胞核中首先由rna聚合酶ii转录形成初级mirna(pri-mirna)，经核酸内切酶drosha和dicer剪切产生成熟的mirna，与沉默复合体结合形成mirisc(mirna诱导沉默复合体)发挥作用。成熟的mirna能够与靶基因结合的位点序列称为种子序列，通常为mirna5’端的第2～8个核苷酸。种子序列与靶基因mrna的3’utr区结合位点完全匹配时发挥类似于干扰rna的作用，直接降解mrna；不完全匹配时可抑制靶mrna的翻译，最终达到调控靶基因表达的关键作用。随着高通量测序的快速发展，越来越多的mirna的功能被发现，包括其在鱼类抵抗病原菌感染中的重要作用，但通过生物信息学预测到mirna与基因的靶向关系存在一定的假阳性，因此，进一步通过实验手段验证mirna与候选靶基因的结合和调控关系十分必要。
2、黄颡鱼(pelteobagrus fulvidraco)作为我国重要的淡水经济鱼类，养殖规模不断扩大，产量逐年提高。但随着集约化养殖模式的应用，以维氏气单胞菌(aeromonasveronii)为主的病原菌引起的细菌性疾病频发已严重制约了黄颡鱼养殖产业的健康发展。维氏气单胞菌是一种广泛存在于淡水、河口以及周围土壤环境中的人畜共患菌，鱼类患病后出现典型的腹水和内脏充血肿胀等症状。维氏气单胞菌因含有众多毒力因子，可导致养殖鱼类快速死亡，造成巨大经济损失。因此，阐明mirna在调控黄颡鱼抗菌感染中的关键作用能够为开发绿色病害防控技术提供新思路。
3、自噬相关基因14(autophagy-related gene 14，atg14)，是调控生物体细胞自噬的关键基因之一，在生物体细胞稳态和疾病防御中起重要作用。自噬是真核细胞的基本生命活动之一，广泛参与各种生理和病理过程，包括清除损伤细胞以及入侵的病毒和细菌，是一种有效的自我防御手段。因此，atg14可通过调节自噬参与鱼类响应病原感染免疫反应。综上所述，明确mir-21-y的特征及其对atg14基因的结合和表达调控，尤其二者在抗感染免疫防御过程中的作用，能够促进我们对鱼类免疫调控机制的理解，从而有针对性地研发鱼类抗菌制剂。
技术实现思路
1、发明目的：本发明的第一目的是提供了一种黄颡鱼mirna、其模拟物和抑制物在制备调控atg14基因表达试剂中的应用。本发明的第二目的是提供了一种检测黄颡鱼mirna的试剂盒。本发明的第三目的在于提供一种上述黄颡鱼mirna、其模拟物和抑制物在制备预防和/或治疗与atg14基因相关的抗病原微生物感染的药物中的应用。
2、技术方案：本发明提供了一种黄颡鱼mirna、其模拟物和抑制物在制备调控atg14基因表达试剂中的应用，所述黄颡鱼mirna为mir-21-y，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
3、进一步地，所述模拟物由正义链和反义链合成，所述正义链和反义链的核苷酸序列如seq id no.3～4所示。
4、进一步地，所述应用中黄颡鱼mirna、其模拟物为下调atg14基因表达。
5、进一步地，所述抑制物的核苷酸序列如seq id no.10所示。
6、进一步地，所述应用中黄颡鱼mirna的抑制物为上调atg14基因表达。
7、进一步地，用于检测所述mir-21-y的特异性引物的核苷酸序列如seq id no.5所示。
8、进一步地，用于检测所述atg14基因的特异性引物的核苷酸序列如seq id no.6～7所示。
9、进一步地，所述试剂盒含有用于检测mir-21-y的特异性引物，所述特异性引物的核苷酸序列如seq id no.5所示。
10、本发明还提供了上述黄颡鱼mirna、其模拟物和抑制物在制备预防和/或治疗与atg14基因相关的抗病原微生物感染的药物中的应用。
11、进一步地，所述atg14基因相关的抗病原微生物感染为维氏气单胞菌(aeromonasveronii)感染。
12、有益效果：与现有技术相比，本发明具有如下突出的显著优点：本发明提供的mir-21-y能够靶向黄颡鱼atg14基因。mir-21-y的模拟物可提高mir-21-y的表达量，并进一步负向调控atg14基因的表达，从而促进维氏气单胞菌感染，mir-21-y的抑制物可降低mir-21-y的表达量，并进一步提高atg14基因的表达，从而抑制维氏气单胞菌感染，最终调控黄颡鱼响应病原微生物的免疫防御能力。
1.一种黄颡鱼mirna、其模拟物和抑制物在制备调控atg14基因表达试剂中的应用，其特征在于，所述黄颡鱼mirna为mir-21-y，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述模拟物由正义链和反义链合成，所述正义链和反义链的核苷酸序列如seq id no.3～4所示。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用中黄颡鱼mirna、其模拟物为下调atg14基因表达。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制物的核苷酸序列如seq id no.10所示。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用中黄颡鱼mirna的抑制物为上调atg14基因表达。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，用于检测所述mir-21-y的特异性引物的核苷酸序列如seq id no.5所示。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，用于检测所述atg14基因的特异性引物的核苷酸序列如seq id no.6～7所示。
8.一种检测黄颡鱼mirna的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有用于检测mir-21-y的特异性引物，所述特异性引物的核苷酸序列如seq id no.5所示。
9.一种黄颡鱼mirna、其模拟物和抑制物在制备预防和/或治疗与atg14基因相关的抗病原微生物感染的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述atg14基因相关的抗病原微生物感染为维氏气单胞菌(aeromonas veronii)感染。
