本发明属于分子生物学领域，具体涉及能够识别柯萨奇病毒a组16型(cva16)且具有中和活性的单克隆抗体及其应用。
背景技术：
1、引起手足口病(hand、foot and mouth disease，hfmd)的病毒属于小rna病毒科(picornavirus)肠道病毒属(enteroviruse)，包括柯萨奇病毒a组的2、4、5、6、7、9、10、16型等和b组的1、2、3、4、5、6、13型等以及肠道病毒71型(human enterovirus 71,ev71)、埃可病毒(echoviruses)等。
2、中国许多省市均有出现由cva16引起的手足口病病例数的报道。尽管多数cva16引起的病症较轻，常以发热和手、足、口腔等部位的皮疹、疱症为主要症状，但是cva16也能引起严重疾病，例如脑干脑膜炎、弛缓性麻痹、心肌炎、肺炎等。
3、构象中和抗体更能反应病毒的含量和功能，因此开发靶向构象表位、特异性识别cva16的中和活性单克隆抗体对疫苗研发的质控、临床样本的检测和实验室病毒鉴别、cva16基础功能的研究具有重要意义。
技术实现思路
1、基于此，有必要提供能够识别柯萨奇病毒a组16型(cva16)且具有中和活性的单克隆抗体及其应用。
2、本发明的技术方案如下：
3、本发明提供能够识别cva16空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性的单克隆抗体，所述单克隆抗体具有seq id no.1～3所示的重链互补决定区cdr1～cdr3，以及seq idno.4～6所示的轻链互补决定区cdr1～cdr3。
4、该单克隆抗体与现有的cva16单克隆抗体不同，其能够靶向构象表位、能够识别cva16空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性，可用于cva16病毒定量，且反应病毒的含量和功能，与免疫原性相关，对疫苗研发的质控至关重要。
5、优选的，所述单克隆抗体具有如seq id no.7所示的重链可变区氨基酸序列；和/或，所述单克隆抗体具有seq id no.9所示的轻链可变区氨基酸序列。
6、进一步，所述单克隆抗体为igg2a型抗体。
7、本发明提供一种编码上述单克隆抗体的基因。
8、进一步，编码所述单克隆抗体的重链可变区的核酸分子为以下几种中的任一种：
9、a、具有如seq id no:8所示的核苷酸序列；
10、b、与seq id no:8所示的核苷酸序列互补核苷酸序列；
11、c、与a和b的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与其不同的核苷酸序列；
12、和/或
13、编码所述单克隆抗体的轻链可变区的核酸分子为以下几种中的任一种：
14、e、具有如seq id no:10所示的核苷酸序列；
15、f、与seq id no:10所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列；
16、g、与e和f的核苷酸序列编码相同的蛋白质，但因遗传密码的简并性而与其不同的核苷酸序列。
17、本发明提供一种表达载体，该表达载体含有编码上述单克隆抗体的核酸分子。
18、本发明提供一种宿主细胞，该宿主细胞含有上述的核酸分子，或含有上述的表达载体。
19、本发明提供一种抗体偶联物，该抗体偶联物包含上述的单克隆抗体或其抗原结合片段及标记物，所述标记物选自酶标记、生物素标记、化学发光染料标记中的一种或多种。
20、本发明提供上述单克隆抗体在制备检测cva16试剂或试剂盒中的应用。
21、本发明提供上述单克隆抗体在制备抑制、预防和治疗cva16药物中的应用。
22、本发明上述单克隆抗体的制备方法为：以纯化后的柯萨奇病毒a组16型(cva16)病毒免疫小鼠，制备筛选杂交瘤细胞，从而制备得到的igg2a亚型非中和抗体。
23、本发明提供的单克隆抗体可与偶联物(辣根过氧化酶或异硫氰酸荧光素等)结合用于直接或间接检测、快速诊断，如可用于开发检测由cva16感染引起的临床样品的检测试剂或试剂盒，也可用于临床病毒分离株实验室鉴定抗体，同时还可用于制备预防性疫苗生产中间品及产品含cva16抗原的定量检测试剂。
1.识别cva16且具有中和活性的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3所示，轻链互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no:4、seq id no:5和seq id no:6所示。
2.根据权利要求1所述的识别cva16且具有中和活性的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示。
3.根据权利要求1所述的识别cva16且具有中和活性的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.9所示。
4.根据权利要求2或3所述的识别cva16且具有中和活性的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为igg2a型抗体。
5.编码权利要求1至4任一项所述的识别cva16且具有中和活性的单克隆抗体的基因。
6.根据权利要求5所述的基因，其特征在于，编码所述单克隆抗体的重链可变区的基因序列如seq id no:8所示；
7.一种表达载体，其特征在于，含有编码权利要求1～4任一项所述的单克隆抗体的基因。
8.一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求5或6所述的基因，或含有权利要求7所述的表达载体。
9.权利要求1至4任一项所述的识别cva16且具有中和活性的单克隆抗体在制备检测cva16试剂或试剂盒中的应用。
10.权利要求1至4任一项所述的识别cva16且具有中和活性的单克隆抗体在制备抑制、预防和治疗cva16药物中的应用。
