本申请涉及生物医药领域，尤其涉及一种硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体在制备粘膜给药的制剂中的应用。
背景技术：
1、壳聚糖是由α-(1-4)-连接的d-葡糖胺和n-乙酰基-d-葡糖胺组成的一种线性天然阳离子多糖，具有良好的生物降解性、生物相容性和较低免疫原性，在生物医药领域具有重要的用途。壳聚糖分子具有较强的粘膜粘附特性，它可以穿过粘膜中上皮细胞间的紧密连接从而进入机体组织，是一种较为理想的粘膜药物递送载体。但现有技术利用壳聚糖作为粘膜药物递送载体的应用仍不成熟，对壳聚糖的改性还有待优化。
技术实现思路
1、本申请的目的是，至少部分克服现有技术的不足，提供一种粘膜穿透性更显著，药物递送效果更好的改性壳聚糖载体——硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体，并将该载体应用于制备粘膜给药的制剂。
2、为达到以上技术目的，本申请采用的技术方案如下：
3、一种硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体在制备粘膜给药的制剂中的应用。
4、优选地，所述硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体的制备方法包括以下步骤步骤：
5、将壳聚糖加入到稀盐酸溶液中充分溶解；
6、利用edc/nhs偶联剂活化半胱氨酸中的羧基；
7、混合经过上述处理的壳聚糖和半胱氨酸，室温下磁力搅拌20～30h得到反应液；
8、去除反应液中未反应的半胱氨酸，得到硫醇修饰的壳聚糖缀合物；
9、利用静电喷涂技术制备硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体。
10、优选地，壳聚糖的重均分子量为100-300kda，脱乙酰度≥75％以上；交联得到的硫醇壳聚糖缀合物中的硫醇化程度为20-25％。
11、进一步优选地，所述稀盐酸溶液为体积比1％的盐酸水溶液，ph 5.0-6.0，溶解后的壳聚糖质量体积百分比为10％；所述半胱氨酸活化时的质量体积百分比为8％,edc/nhs偶联剂中的n-乙基-n′-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基磺基琥珀酰亚胺的工作浓度分别为50mm/l；半胱氨酸的活化时间20-30min。
12、可选择地，所述去除未反应半胱氨酸的方法包括：选择截留分子量＞10kda的透析袋，将反应后的溶液加入透析袋，连续透析48h，期间每隔8h更换一次透析液，透析产物冷冻干燥后得到硫醇修饰的壳聚糖缀合物。
13、进一步可选择地，所述利用静电喷涂技术制备硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体包括：硫醇壳聚糖缀合物溶解在醋酸溶液中，室温下磁力搅拌12-18h，其中，醋酸溶液浓度为体积比70％,所配制的用于静电喷涂的溶液质量体积百分比为2-5％；高压静电场的条件为：电压为20-25kv，给液速度为0.2-0.8ml/h，给液总体积为0.8-2.5ml，接收距离为13-18cm，接收器为铝箔覆盖的硬纸板，尺寸为15cm×15cm。
14、优选地，硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体的直径分布范围为200-800nm。
15、优选地，所述硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体的单体分子式如下：
16、
17、可选择地，所述粘膜给药的制剂中的活性成分包括以下至少之一：dna片段、质粒、荧光探针、人工囊泡和抗原。
18、与现有技术相比较，本申请具有如下优势：
19、(1)本申请利用硫醇修饰的壳聚糖制备给药载体，提高了壳聚糖穿透粘膜的性能，并且经过试验，本申请能够成为dna片段、质粒、荧光探针、人工囊泡、抗原甚至更广泛的活性物质的递送系统。
20、(2)本申请将硫醇修饰的壳聚糖制备成纳米微球的形式，有利于增强药物递送系统的适用性，通过调整纳米微球的粒径有效控制药物的包封率和释药速度，适应不同的递送要求。
21、(3)本申请利用静电喷涂技术制备纳米微球，静电喷涂技术成熟，制粒过程不引入有毒辅料，制粒之后不产生废料，成本可控、环境友好。
1.一种硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体在制备粘膜给药的制剂中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体的制备方法包括以下步骤步骤：
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，壳聚糖的重均分子量为100-300kda，脱乙酰度≥75％以上；交联得到的硫醇壳聚糖缀合物中的硫醇化程度为20-25％。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述稀盐酸溶液为体积比1％的盐酸水溶液，ph 5.0-6.0，溶解后的壳聚糖质量体积百分比为10％；所述半胱氨酸活化时的质量体积百分比为8％,edc/nhs偶联剂中的n-乙基-n′-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基磺基琥珀酰亚胺的工作浓度分别为50mm/l；半胱氨酸的活化时间20-30min。
5.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述去除未反应半胱氨酸的方法包括：选择截留分子量＞10kda的透析袋，将反应后的溶液加入透析袋，连续透析48h，期间每隔8h更换一次透析液，透析产物冷冻干燥后得到硫醇修饰的壳聚糖缀合物。
6.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述利用静电喷涂技术制备硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体包括：硫醇壳聚糖缀合物溶解在醋酸溶液中，室温下磁力搅拌12-18h，其中，醋酸溶液浓度为体积比70％,所配制的用于静电喷涂的溶液质量体积百分比为2-5％；高压静电场的条件为：电压为20-25kv，给液速度为0.2-0.8ml/h，给液总体积为0.8-2.5ml，接收距离为13-18cm，接收器为铝箔覆盖的硬纸板，尺寸为15cm×15cm。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体的直径分布范围为200-800nm。
8.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述硫醇修饰的壳聚糖纳米微球载体的单体分子式如下：
9.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述粘膜给药的制剂中的活性成分包括以下至少之一：dna片段、质粒、荧光探针、人工囊泡和抗原。
