本发明涉及生物，具体涉及检测非洲马瘟病毒抗体的融合串联多肽抗原。
背景技术：
1、非洲马瘟(african horse sickness，ahs)是由蠓虫传播的、主要引起马属动物发热、皮下水肿和病毒血症的一种急性或亚急性传染病，家犬是偶然宿主。非洲马瘟病毒(african horse sickness virus，ahsv)为呼肠孤病毒科环状病毒属成员，该属除ahsv外，还包括蓝舌病病毒(bluetongue virus,btv)、流行性出血热病毒(epizootichaemorrhagic disease virus,ehdv)和马器质性脑病病毒(equine encephalosisorbivirus,eev)等。非洲马瘟通过昆虫媒介传播，例如库蠓、伊蚊、螯蝇等，其中马类最易感染，影响易感马匹的呼吸和循环功能，主要症状为发热、皮下水肿和病毒血症，可导致高达95％的病死率。ahs在我国属于一类动物疫病，世界动物卫生组织(woah)也将其列为必须报告的动物疫病，主要流行于撒哈拉以南的非洲地区，目前全球共有41个国家报告疫情，近几年来，尼日利亚、厄立特里亚、埃塞俄比亚、喀麦隆、甚至泰国等多个国家均有报告非洲马瘟疫情。虽然非洲马瘟尚未在我国发现，但其危害巨大，应该引起高度重视。我国边境云南地区1979年首次发现蓝舌病毒的踪迹，并且分离出蓝舌病病毒，此后部分省份相继报道蓝舌病，显示我国存在与非洲马瘟同属病毒的传播、蔓延的生态和气候条件，需重视边境检疫以及做好诊断技术储备。
2、非洲马瘟病毒分为9个血清型，病毒粒子直径约80nm，基因组为分节段的双股rna，含有s1～s10 10个节段，基因分别编码vp1、vp2、vp3、vp4、vp5、vp7、ns1、ns2、ns3/ns3a、ns4蛋白。非结构蛋白ns1～ns4在ahsv感染细胞中主要参与病毒的复制、装配和释放等过程，并在病毒拮抗宿主细胞天然免疫反应中扮演重要角色。
技术实现思路
1、本发明所要解决的一个技术问题是如何提高非洲马瘟病毒抗体检测的敏感性与特异性，从而更准确地诊断非洲马瘟病毒病。
2、为了解决上述技术问题，本发明提供了用于制备非洲马瘟病毒抗体检测试剂的成套多肽或用于制备非洲马瘟病毒病诊断试剂的成套多肽。
3、第一方面，本发明要求保护一种多肽或成套多肽。
4、本发明所要求保护的多肽为evp7-1多肽。
5、本发明所要求保护的成套多肽为成套多肽1或成套多肽2。
6、所述成套多肽1由evp2-1多肽、evp5-1多肽和所述evp7-1多肽组成。
7、所述成套多肽2由所述evp5-1多肽和所述evp7-1多肽组成。
8、所述evp2-1多肽为如下p11、p12或p13所示：
9、p11、氨基酸序列为seq id no.1的多肽；
10、p12、氨基酸序列为seq id no.1的第2-46位的多肽；
11、p13、在p12所示多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基后得到的能够与载体蛋白偶联的多肽。
12、所述evp5-1多肽为如下p21、p22或p23所示：
13、p21、氨基酸序列为seq id no.4的多肽；
14、p22、氨基酸序列为seq id no.4的第2-38位的多肽；
15、p23、在p22所示多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基后得到的能够与载体蛋白偶联的多肽。
16、所述evp7-1多肽为如下p21、p22或p23所示：
17、p31、氨基酸序列为seq id no.7的多肽；
18、p32、氨基酸序列为seq id no.7的第2-51位的多肽；
19、p33、在p32所示多肽的氨基末端或羧基末端连接氨基酸残基后得到的能够与载体蛋白偶联的多肽。
20、其中，seq id no.1由46个氨基酸残基组成，第1位的半胱氨酸残基是为了与载体蛋白连接添加的连接臂，其它氨基酸残基来源于非洲马瘟病毒vp2蛋白；seq id no.4由38个氨基酸残基组成，第1位的半胱氨酸残基是为了与载体蛋白连接添加的连接臂，其它氨基酸残基来源于非洲马瘟病毒vp5蛋白。seq id no.7由51个氨基酸残基组成，第1位的半胱氨酸残基是为了与载体蛋白连接添加的连接臂，其它氨基酸残基来源于非洲马瘟病毒vp7蛋白。
21、在所述成套多肽1中，所述evp2-1多肽、所述evp5-1多肽和所述evp7-1多肽的质量比本领域技术人员可根据对非洲马瘟病毒抗体检测效果确定，如可为3:2:5。
22、在所述成套多肽2中，所述evp5-1多肽和所述evp7-1多肽的质量比本领域技术人员可根据对非洲马瘟病毒抗体检测效果确定，如可为1:1。
23、第二方面，本发明要求保护一种偶联物或成套偶联物。
24、本发明所要求保护的偶联物为evp7-1偶联物。
25、本发明所要求保护的成套偶联物为成套偶联物1或成套偶联物2。
26、所述成套偶联物1由evp2-1偶联物、evp5-1偶联物和所述evp7-1偶联物组成。
27、所述成套偶联物2由所述evp5-1偶联物和所述evp7-1偶联物组成。
28、所述evp2-1偶联物为由前文第一方面中所述evp2-1多肽和载体蛋白偶联得到的完全抗原；
29、所述evp5-1偶联物为由前文第一方面中所述evp5-1多肽和载体蛋白偶联得到的完全抗原；
30、所述evp7-1偶联物为由前文第一方面中所述evp7-1多肽和载体蛋白偶联得到的完全抗原。
31、在本发明的具体实施方式中，在所述成套偶联物1中，所述evp2-1偶联物、所述evp5-1偶联物和所述evp7-1偶联物的质量比为3:2:5。
32、在本发明的具体实施方式中，在所述成套偶联物2中，所述evp5-1偶联物和所述evp7-1偶联物的质量比为1:1。
33、其中，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、血蓝蛋白、人血清白蛋白、卵清蛋白、鼠血清白蛋白、甲状腺球蛋白或兔血清白蛋白等。
34、在本发明的具体实施方式中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白(bsa)。
35、第三方面，本发明要求保护前文第一方面中所述的多肽或成套多肽或前文第二方面中所述的偶联物或成套偶联物在如下任一中的应用：
36、(a1)制备检测非洲马瘟病毒抗体的试剂或试剂盒；
37、(a2)制备非洲马瘟病毒诊断抗原。
38、第四方面，本发明要求保护含有前文第一方面中所述的多肽或成套多肽或前文第二方面中所述的成套偶联物的试剂盒。
39、进一步地，所述试剂盒用于检测非洲马瘟病毒抗体；在所述试剂盒中，前文第一方面中所述的多肽或成套多肽或前文第二方面中所述的偶联物或成套偶联物作为包被抗原。
40、更进一步地，所述试剂盒为化学发光免疫分析试剂盒；所述试剂盒中还含有辣根过氧化物酶(hrp)标记二抗、包被缓冲液、洗涤液、二抗稀释液和/或校准品；所述二抗为能够抗所述非洲马瘟病毒抗体的抗体。
41、第五方面，本发明要求保护如下任一生物材料：
42、(b1)核酸分子，为核酸分子1；所述核酸分子1为能够编码前文第一方面中所述evp7-1多肽的核酸分子。
43、(b2)表达盒，为表达盒1；所述表达盒1为含有(b1)中所述核酸分子1的表达盒。
44、(b3)重组载体，为重组载体1；所述重组载体1为含有(b1)中所述核酸分子1的重组载体。
45、(b4)重组菌，为重组菌1；所述重组菌1为含有(b1)中所述核酸分子1的重组菌。
46、(b5)转基因细胞系，为转基因细胞系1；所述转基因细胞系1为含有(b1)中所述核酸分子1的转基因细胞系。
47、(b6)成套核酸分子，为成套核酸分子1或成套核酸分子2；所述成套核酸分子1由(b1)中所述核酸分子1、核酸分子2和核酸分子3组成；所述成套核酸分子2由(b1)中所述核酸分子1和所述核酸分子2组成；所述核酸分子2为能够编码前文第一方面中所述evp5-1多肽的核酸分子；所述核酸分子3为能够编码前文第一方面中所述evp2-1多肽的核酸分子。
48、(b7)成套表达盒，为成套表达盒1或成套表达盒2；所述成套表达盒1由(b2)中所述表达盒1、表达盒2和表达盒3组成；所述成套表达盒2由(b2)中所述表达盒1和所述表达盒2组成；所述表达盒2为含有(b6)中所述核酸分子2的表达盒；所述表达盒3为含有(b6)中所述核酸分子3的表达盒。
49、(b8)成套重组载体，为成套重组载体1或成套重组载体2；所述成套重组载体1由(b3)中所述重组载体1、重组载体2和重组载体3组成；所述成套重组载体2由(b3)中所述重组载体1和所述重组载体2组成；所述重组载体2为含有(b6)中所述核酸分子2的重组载体；所述重组载体3为含有(b6)中所述核酸分子3的重组载体。
50、(b9)成套重组菌，为成套重组菌1或成套重组菌2；所述成套重组菌1由(b4)中所述重组菌1、重组菌2和重组菌3组成；所述成套重组菌2由(b4)中所述重组菌1和所述重组菌2组成；所述重组菌2为含有(b6)中所述核酸分子2的重组菌；所述重组菌3为含有(b6)中所述核酸分子3的重组菌。
51、(b10)成套转基因细胞系，为成套转基因细胞系1或成套转基因细胞系2；所述成套转基因细胞系1由(b5)中所述转基因细胞系1、转基因细胞系2和转基因细胞系3组成；所述成套转基因细胞系2由(b5)中所述转基因细胞系1和所述转基因细胞系2组成；所述转基因细胞系2为含有(b6)中所述核酸分子2的转基因细胞系；所述转基因细胞系3为含有(b6)中所述核酸分子3的转基因细胞系。
52、第六方面，本发明要求保护前文第五方面中所述生物材料在如下任一中的应用：
53、(c1)制备前文第一方面中所述的多肽或成套多肽或前文第二方面中所述的偶联物或成套偶联物或前文第四方面中所述的试剂盒；
54、(c2)制备检测非洲马瘟病毒抗体的试剂或试剂盒；
55、(c3)制备非洲马瘟病毒诊断抗原。
56、第七方面，本发明要求保护前文第一方面中所述的多肽或成套多肽或前文第二方面中所述的偶联物或成套偶联物作为免疫原在制备非洲马瘟病毒抗体中的应用。
57、实验证明：用非洲马瘟病毒的全长vp2重组蛋白或非洲马瘟病毒的全长vp5重组蛋白或非洲马瘟病毒的全长vp7重组蛋白作为半抗原与载体蛋白偶联得到的偶联物作为包被原，不能有效地区分非洲马瘟病毒抗体与马传染性贫血病毒抗体、马动脉炎病毒抗体、马疱疹病毒抗体、马流感病毒抗体、马沙门氏菌抗体。为了提高非洲马瘟病毒抗体检测的特异性，本发明从非洲马瘟病毒的全长vp2和非洲马瘟病毒的全长vp5以及非洲马瘟病毒的全长vp7分别选择优势抗原表位evp2-1、evp5-1和evp7-1，分别与载体蛋白偶联得到的偶联物(bsa-evp2-1和/或bsa-evp5-1和/或bsa-evp7-1)作为包被原，可以有效地区分马传染性贫血病毒抗体、马动脉炎病毒抗体、马疱疹病毒抗体、马流感病毒抗体、马沙门氏菌抗体，提高了非洲马瘟病毒抗体检测的特异性。分别用bsa-evp2-1和/或bsa-evp5-1和/或bsa-evp7-1作为包被抗原制备的检测血清中的非洲马瘟病毒抗体的试剂盒可以将马传染性贫血病毒抗体阳性血清、马动脉炎病毒抗体阳性血清、马疱疹病毒抗体阳性血清、马流感病毒抗体阳性血清、马沙门氏菌抗体阳性血清进行准确区分。
58、利用包被抗原为bsa-evp2-1+bsa-evp5-1+bsa-evp7-1的本发明clia方法1与非洲马瘟病毒血清补体结合试验方法的总符合率为98.33％(阳性符合率为100％，阴性符合率为96.67％)；利用包被抗原为bsa-evp5-1+bsa-evp7-1的本发明clia方法4与非洲马瘟病毒血清补体结合试验方法的总符合率为95.83％(阳性符合率为95％，阴性符合率为96.67％)。利用包被抗原为bsa-evp7-1的本发明对照clia方法7与非洲马瘟病毒血清补体结合试验方法的总符合率为80.83％(阳性符合率为80％，阴性符合率为81.67％)。
59、本发明以bsa-evp2-1+bsa-evp5-1+bsa-evp7-1或bsa-evp5-1+bsa-evp7-1作为包被原制备的抗体检测试剂盒特异性强、敏感性高，准确性高，操作简单、快速，适用于基层各级兽医部门和出入境检验检疫局对非洲马瘟病毒感染血清抗体的快速大量筛选检测。
1.多肽或成套多肽，其特征在于：所述多肽为evp7-1多肽；
2.偶联物或成套偶联物，其特征在于：所述偶联物为evp7-1偶联物；
3.根据权利要求2所述的成套偶联物，其特征在于：在所述成套偶联物1中，所述evp2-1偶联物、所述evp5-1偶联物和所述evp7-1偶联物的质量比为3:2:5；和/或
4.权利要求1所述的多肽或成套多肽或权利要求2或3所述的偶联物或成套偶联物在如下任一中的应用：
5.含有权利要求1所述的多肽或成套多肽或权利要求2或3所述的成套偶联物的试剂盒。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒用于检测非洲马瘟病毒抗体；在所述试剂盒中，权利要求1所述的多肽或成套多肽或权利要求2或3所述的偶联物或成套偶联物作为包被抗原。
7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒为化学发光免疫分析试剂盒；所述试剂盒中还含有辣根过氧化物酶标记二抗、包被缓冲液、洗涤液、二抗稀释液和/或校准品；所述二抗为能够抗所述非洲马瘟病毒抗体的抗体。
8.如下任一生物材料：
9.权利要求8所述生物材料在如下任一中的应用：
10.权利要求1所述的多肽或成套多肽或权利要求2或3所述的偶联物或成套偶联物作为免疫原在制备非洲马瘟病毒抗体中的应用。
