本发明涉及微生物与疫苗，特别涉及一种鹅源鸡毒支原体灭活疫苗及其制备方法和应用。
背景技术：
1、广东地区是国内鹅养殖数量最多的地区之一，年出栏肉鹅约1.2亿只，种鹅饲养量在1000万只左右，约占全国总量的五分之一，产值高达50亿元，因此广东省养鹅业在我国具有重要地位。近些年来有陆续报道疑似有鹅感染支原体的情况发生，常见的支原体有鹅支原体、鸭支原体、泄殖腔支原体、滑液囊支原体、鹅疫支原体、模仿支原体、鸡毒支原体(mycoplasma gallisepticum，mg)。鹅群中鸡毒支原体感染发现较早，但长期以来对其致病性认识不足，对其产生的危害也不够重视。其他对鹅危害严重的病原体，例如禽流感病毒、新城疫病毒、小鹅瘟病毒等，有相对完善的监测制度，而鸡毒支原体长期缺乏监测，导致鸡毒支原体的感染日渐严重且快速蔓延。
2、16srrna进化分析显示鹅源鸡毒支原体基因组与鸡源鸡毒支原体基因组之间亲缘关系较远，属于不同的分支；mgc2作为鸡毒支原体的主要毒力基因，鹅源分型结果显示mg临床株为h～m型，均与鸡源鸡毒支原体参考株差异巨大。鹅感染鸡毒支原体后排毒周期较长，因此能够在鹅群中不断地传播，目前市场尚未有针对鹅源鸡毒支原体的疫苗，且临床反馈鸡源鸡毒支原体疫苗对于鹅的保护率低，不能遏制该疾病在鹅中的蔓延，因此开展鹅源鸡毒支原体疫苗的研发工艺流程及评估其对靶动物安全性、有效性充分满足了市场的迫切需求。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种鹅源鸡毒支原体灭活疫苗及其制备方法和应用，以预防鹅群感染鸡毒支原体，来实现对鹅源鸡毒支原体感染的有效防治。
2、根据本发明的第一个方面，提供了一种鹅源鸡毒支原体灭活疫苗，该疫苗含有灭活的鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株，所述鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株保藏编号为cctccno：m 20232686。该疫苗攻毒后保护率达到85％，远高于鸡源鸡毒支原体的30％的保护率，说明鹅源鸡毒支原体疫苗对于预防鹅群感染鸡毒支原体的效果要好于鸡源鸡毒支原体，该疫苗具备应激小、安全性好、吸收良好、预防效果佳的特性。
3、在某些实施方式中，该疫苗还包括药学上可接受的辅料或佐剂。
4、在某些实施方式中，所述鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株的灭活方法包括：将菌液离心，并将离心后菌液用pbs进行重悬，然后将β-丙内酯添加至待灭活的重悬菌液中，4℃静置24h以上，然后置于37℃恒温培养箱分解1h即可灭活该菌株，该β丙内脂与用pbs重悬后的菌液比例是1:4000。β-丙内酯易水解、无残留，水解后的产品无危害；并且其直接作用于病毒或病原物的核酸，可以更好的保持免疫原性以及强灭活效果；而且灭活时间短，可以缩短了灭活疫苗生产周期，因此将β-丙内酯用于该菌液的灭活，功效更好。
5、根据本发明的第二个方面，提供了所述鹅源鸡毒支原体灭活疫苗在制备防治鹅源鸡毒支原体感染疾病的药物中的应用。由此，可以安全、有效地对鹅源鸡毒支原体感染疾病进行防治。
6、根据本发明的第三个方面，提供了所述鹅源鸡毒支原体灭活疫苗在制备免疫鹅的药物中的应用。由此，可以安全、有效地对鹅群进行免疫。
7、根据本发明的第四个方面，提供了一种鹅源鸡毒支原体灭活疫苗的制备方法，该方法包括如下步骤：
8、1)鹅源鸡毒支原体菌株的分离及鉴定；
9、2)对步骤1)中获得菌株进行灭活处理；
10、3)油相制备：取注射用白油94份，硬脂酸铝1份，80℃水浴加热条件下混合均匀，再缓慢加入5份司本-80，高压蒸汽灭菌115℃维持40min，冷却后备用；
11、4)水相制备：向步骤2)中获得的灭活苗进行浓缩富集并检验合格后，向含有灭活苗的菌液中加入终浓度为5％吐温-80，充分混匀即为水相；
12、5)乳化：取油相3份加入适当的无菌容器中，开动均质机13000r/min搅拌90秒，重复3-5次，然后缓缓加入水相2份，再以15000r/min搅拌90秒，重复3-5次，至乳白色均一相，即制得所述的灭活疫苗。
13、由此，通过采用上述制备方法，可以制备获得安全性高，对鹅群攻毒后保护效果达到85％的灭活疫苗，远超过鸡源鸡毒支原体疫苗的30％的保护效果。
14、在某些实施方式中，步骤1)中分离获得的鹅源鸡毒支原体菌株为mg-gd01/22株，所述mg-gd01/22株保藏编号为cctcc no：m 20232686。
15、在某些实施方式中，步骤2)中菌株的灭活方法包括：将菌液离心，并将离心后菌液用pbs进行重悬，然后将β-丙内酯添加至待灭活的重悬菌液中，4℃静置过夜，然后置于37℃恒温培养箱分解1h即可灭活该菌株，该β丙内脂与用pbs重悬后的菌液比例是1:4000。β-丙内酯易水解、无残留，水解后的产品无危害；并且其直接作用于病毒或病原物的核酸，可以更好的保持免疫原性以及强灭活效果；而且灭活时间短，可以缩短了灭活疫苗生产周期，因此将β-丙内酯用于该菌液的灭活，功效更好。
16、在某些实施方式中，所述的4℃静置过夜时长为不低于24h。
17、根据本发明的第五个方面，提供了一种保藏编号为cctcc no：m20232686的鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株在制备预防或治疗鹅源鸡毒支原体的疫苗中的应用。由此，通过该菌株可以制备安全、高效的鹅源鸡毒支原体的疫苗。
18、本发明的有益效果：
19、本发明公开了一种鹅源鸡毒支原体灭活疫苗及其制备方法，该疫苗含有灭活的鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株菌液，该鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株保藏编号为cctcc no：m20232686。通过将该鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株采用β-丙内酯处理，然后4℃静置24h以上，再在37℃恒温培养箱分解1h制得的灭活苗，经过乳化等程序制备的灭活疫苗，该灭活疫苗具备应激小、安全性好、吸收良好、预防效果佳的特性，其攻毒后保护率可达到85％，远高鸡源鸡毒支原体疫苗的30％的保护率，其可以作为优质候选疫苗供临床推广应用，具有巨大的应用价值和市场前景。
1.一种鹅源鸡毒支原体灭活疫苗，其中，所述疫苗含有灭活的鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株，所述鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株保藏编号为cctcc no：m 20232686。
2.根据权利要求1中所述的灭活疫苗，其中，所述疫苗还包括药学上可接受的辅料或佐剂。
3.根据权利要求1中所述的灭活疫苗，其中，所述鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株的灭活方法包括：将菌液离心，并将离心后菌液用pbs进行重悬，然后将β-丙内酯添加至待灭活的重悬菌液中，4℃静置24h以上，然后置于37℃恒温培养箱分解1h即可灭活该菌株，所述β丙内脂与用pbs重悬后的菌液比例是1:4000。
4.权利要求1-3任一项中所述的灭活疫苗在制备防治鹅源鸡毒支原体感染疾病的药物中的应用。
5.权利要求1-3任一项中所述的灭活疫苗在制备免疫鹅的药物中的应用。
6.一种鹅源鸡毒支原体灭活疫苗的制备方法，其中，所述方法包括如下步骤：
7.根据权利要求6中所述的制备方法，其中，所述步骤1)中分离获得的鹅源鸡毒支原体菌株为mg-gd01/22株，所述mg-gd01/22株保藏编号为cctcc no：m 20232686。
8.根据权利要求6中所述的制备方法，其中，所述步骤2)中菌株的灭活方法包括：将菌液离心，并将离心后菌液用pbs进行重悬，然后将β-丙内酯添加至待灭活的重悬菌液中，4℃静置过夜，然后置于37℃恒温培养箱分解1h即可灭活该菌株，所述β丙内脂与用pbs重悬后的菌液比例是1:4000。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其中，所述的4℃静置过夜时长为不低于24h。
10.保藏编号为cctcc no：m 20232686的鹅源鸡毒支原体mg-gd01/22株在制备预防或治疗鹅源鸡毒支原体的疫苗中的应用。
