本申请涉及生物检测,尤其涉及一种用于检测黄鳝的特异性引物组、探针及其应用。
背景技术:
1、黄鳝属于合鳃目合鳃科黄鳝属,黄鳝具有一种天然的性逆转的现象,使得黄鳝成为了一个研究性别决定和性别发育的良好的模式物种,也使其在生物学、医学和水产养殖学上具有较大的研究价值。同时黄鳝肉嫩味鲜,其富含维生素a,且营养价值比较高;并且它所含脂肪极少,是糖尿病患者的理想食品。
2、由于黄鳝肉价格较高,市场上常有假冒黄鳝肉进行销售,这严重影响公民饮食健康。现阶段针对黄鳝肉的检测包括针对黄鳝染色体上eel000313.2基因设计特异性引物序列,并采用pcr扩增和电泳检测的方法进行检测,但是该方法的检测步骤复杂、耗时太长且检测的特异性较低,不利于现场快速检测。
技术实现思路
1、本申请提供了一种用于检测黄鳝的特异性引物组、探针及其应用,以解决现有技术中针对黄鳝肉的检测步骤复杂且特异性较低的技术问题。
2、第一方面,本申请提供了一种用于检测黄鳝的特异性引物组,所述特异性引物组包括上游引物和下游引物,所述上游引物具有如seq id no.1所示的核苷酸序列,所述下游引物具有如seq id no.2所示的核苷酸序列。
3、第二方面,本申请提供了一种用于检测黄鳝的特异性探针,所述特异性探针具有如seq id no.3所示的核苷酸序列;
4、所述特异性探针的5’端具有至少一种荧光标记报告基团,所述特异性探针的3’端具有至少一种猝灭基团。
5、可选的,所述荧光标记报告基团包括fam。
6、可选的,所述猝灭基团包括tamra。
7、第三方面,本申请提供了一种用于检测黄鳝的试剂盒,所述试剂盒包括第一方面所述的特异性引物组和/或第二方面所述的特异性探针。
8、可选的,所述试剂盒包括所述特异性引物组和所述特异性探针。
9、可选的,所述试剂盒还包括rox染料和pcr扩增预混液。
10、第四方面,本申请提供了一种检测黄鳝的方法,所述方法包括:
11、对待测黄鳝样品进行dna提取,得到目的dna片段;
12、对所述目的dna片段和第三方面所述的试剂盒进行混合,后对混合物进行pcr扩增,得到扩增产物;
13、对所述扩增产物进行荧光检测,得到扩增产物的ct值;
14、根据所述扩增产物的ct值,确定待测黄鳝样品的真实性。
15、可选的,所述试剂盒中特异性引物组和特异性探针的体积比为1~3。
16、可选的,所述扩增产物的ct值≤30。
17、本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点:
18、本申请实施例提供的一种用于检测黄鳝的特异性引物组,针对黄鳝的基因设计特异性引物组,同时针对该特异性引物组设计特异性探针,可以利用特异性引物组针对待测黄鳝样品进行特异性的pcr扩增,从而可以得到足够多的扩增产物,最后通过设计的特异性探针与扩增产物结合,从而可以利用特异性探针上的荧光标记报告基团和猝灭基团配合使得扩增产物上形成荧光信号,通过检测荧光信号的强度,即可准确得到待测黄鳝样品中的核酸量;该检测过程可以实时荧光定量检测待测黄鳝样品中的核酸量,从而明确待测黄鳝样品是否含有真实的黄鳝肉,相比传统的电泳检测,实时荧光定量检测的步骤简单、耗时短且检测的特异性高,可以实现现场的快速检测。
1.一种用于检测黄鳝的特异性引物组,其特征在于,所述特异性引物组包括上游引物和下游引物,所述上游引物具有如seq id no.1所示的核苷酸序列,所述下游引物具有如seq id no.2所示的核苷酸序列。
2.一种用于检测黄鳝的特异性探针,其特征在于,所述特异性探针具有如seq id no.3所示的核苷酸序列;
3.根据权利要求2所述的特异性探针,其特征在于,所述荧光标记报告基团包括fam。
4.根据权利要求3所述的特异性探针,其特征在于,所述猝灭基团包括tamra。
5.一种用于检测黄鳝的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述的特异性引物组和/或权利要求2-4任一项所述的特异性探针。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括所述特异性引物组和所述特异性探针。
7.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括rox染料和pcr扩增预混液。
8.一种检测黄鳝的方法,其特征在于,所述方法包括:
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述试剂盒中特异性引物组和特异性探针的体积比为1~3。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述扩增产物的ct值≤30。
