本发明涉及融合蛋白，具体涉及一种靶向肿瘤的融合蛋白及其应用。
背景技术：
1、随着全球癌症发病率和死亡率的不断升高，传统癌症治疗方法，如手术、放疗和化疗难以获得满意的临床疗效。各类新兴抗肿瘤疗法正在全面改变肿瘤治疗的格局，其中肿瘤免疫疗法是最具有突破性且发展最快的领域。胸腺素α1(thymosin alpha1，tα1)是一种由28个氨基酸组成的具有免疫调节作用的酸性多肽。作为先天免疫和适应性免疫的内源性调节剂，tα1具有多种免疫调节活性。tα1可以显著影响t细胞成熟、分化和功能，同时增加活化的t辅助细胞数量，诱导其向th1亚类的转移，从而刺激白介素-2、干扰素-γ等细胞因子产生。除了调节适应性免疫，tα1还可以刺激先天免疫，包括自然杀伤细胞和巨噬细胞。近期研究发现，在乳腺癌中tα1可显著逆转肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage，tam)的m2极化。近三十年来，tα1已经作为免疫增强剂在临床上应用于治疗各种病毒性感染疾病，包括败血症、乙型和丙型肝炎以及新冠病毒等。早期临床试验评结果表明，通过使用tα1可以削弱或者抵消常规化疗和放射治疗带来的免疫抑制，如今tα1在临床上的广泛应用也证实其具有抗肿瘤活性。
2、然而，由于tα1的半衰期短，且其抗肿瘤效果甚微，使得其在临床上的应用受到限制。
技术实现思路
1、发明目的
2、本发明针tα1的半衰期短且其抗肿瘤效果甚微，提供一种融合蛋白，其具有半衰期长和抗肿瘤效果显著等特点。
3、技术方案
4、在前期研究工作的基础上，我们将fc和irgd序列融合到tα1的c端，该融合蛋白被称为tα1-fc-irgd(以下简称tfi)。
5、一种融合蛋白tfi，其特征是：具有seq id no.2所示的氨基酸序列。
6、所述的融合蛋白tfi的制备方法，包括：构建羧基端含有如seq id no.1所示的核苷酸序列的载体，进行基因工程表达和分离纯化，获得融合蛋白。
7、一种药物组合物，其特征在于，含融合蛋白tfi及药学上可接受的载体。所述的融合蛋白tfi或所述的药物组合物在制备治疗肿瘤的药物的应用。
8、具体而言：
9、将合成的基因与原核表达载体连接，转化大肠杆菌，以乳糖进行诱导表达。使用镍离子交换柱对表达产物进行分离纯化，通过g-25凝胶柱脱盐，收集并冻干，即得。为了进行验证实验，同时合成了fc-irgd(fi)作为参比，药效学实验证明较fi和原型胸腺肽tα1，本发明的融合蛋白tfi具有更长的半衰期和更强的抗肿瘤作用。
10、原理：
11、fc是免疫球蛋白恒定区的一段片段，通过与fcγrs和fcrn结合而阻止溶酶体降解，增强体内igg稳定性与循环。因此，与fc片段融合可用于延长半衰期，从而增强药物的治疗效果。
12、整合素是由α和β两种亚基结合而成的二聚体，是一种能够介导细胞与细胞之间、细胞与基质之间相互黏附的一类细胞膜上的跨膜糖蛋白。整合素αvβ3在多种肿瘤组织新生血管内皮细胞膜高表达，而在绝大多数正常组织或成熟血管内皮细胞中不表达或低表达。rgd肽是一系列含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(arg-gly-asp)的多肽片段，是整合素与其配体蛋白相互作用的识别位点，介导细胞与胞外基质及细胞间的黏附作用。含有rgd的序列可以特异性地与整合素αvβ3结合，从而实现肿瘤靶向。肿瘤归巢肽irgd(氨基酸序列：crgdkgpdc，见seq id no.4)是一种由9个氨基酸组成的短肽，irgd可以识别并结合整合素αvβ3和αvβ5，然后被肿瘤组织中的蛋白酶切割，暴露出cendr基序，随后与nrp-1相互作用，最终促进细胞内化。基于irgd对肿瘤的靶向性和穿透性，将irgd与药物分子相连接，有助于药物的靶向递送，促进药物在肿瘤组织中的蓄积，是增强抗肿瘤作用的有效措施之一。
13、本发明将fc片段融合到胸腺肽α1的c端，获得同时兼有半衰期延长和抗肿瘤效果更好的融合蛋白tfi，此外irgd偶联以增强靶向肿瘤部位的能力。
14、有益效果：
15、1.半衰期测定实验结果表明，本发明融合蛋白较之其原型胸腺肽α1，半衰期显著延长；
16、2.通过构建免疫缺陷小鼠模型，发现本发明融合蛋白较之其原型胸腺肽α1可更有效地恢复小鼠的免疫系统；
17、3.动物体内抗肿瘤实验表明，本发明融合蛋白具有较强的抗肿瘤作用。在结肠癌中，治疗10天后，tα1组的肿瘤抑制率为44.98％，而tfi组的肿瘤抑制率为62.68％，明显高于tα1治疗的小鼠。在肺癌中，治疗10天后，tα1组的肿瘤抑制率为19.90％，而tfi组的肿瘤抑制率为42.81％，也显著提高tα1的抗肿瘤疗效。
18、综上所述，本发明提供一种融合蛋白，其半衰期显著延长，同时药效也增加。
1.一种融合蛋白，其特征是：具有seq id no.2所示的氨基酸序列。
2.一种如权利要求1所述的融合蛋白的构建方法，包括：构建羧基端含有如seq idno.1所示的核苷酸序列的载体，进行基因工程表达和分离纯化，获得融合蛋白。
3.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1的融合蛋白及药学上可接受的辅料。
4.根据权利要求1所述的融合蛋白或权利要求3所述的药物组合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
