本发明属于作物育种，具体涉及一种利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法及其应用。
背景技术：
1、要实现机械化轻简化收获，就需要有与农机相配套的油菜品种，才能使农机与农艺的有机结合，因此油菜的形态育种就显得非常重要，适合油菜种植机械化的株型育种越来越被育种家重视。
2、单倍体加倍植株每对染色体上的成对基因都是纯合的，自交产生后代不会发生性状分离，目前，主要通过花药培养或小孢子培养获得单倍体植株，但是，在花药培养的过程中，花粉粒、花粉愈伤组织、花药壁细胞等均有可能进行增殖，最终获得的愈伤组织或胚状体就不可能是纯粹的配子体起源，所得的再生植株也就不可能一定是单倍体植株。小孢子具有单细胞、单倍性、较高分化同步化、分散性好的特点，并且，在培养时不易受到花药壁、花丝等体细胞的影响而产生真正的单倍体植株，进而加倍成为双单倍体，因此，小孢子培养技术能有效地解决花药培养带来的问题，花药培养逐渐被小孢子培养所替代。
3、小孢子培养是研究花粉细胞分化条件、胚胎发生和形态建成机理的一种较为理想的方法，因此，该技术一直受到各国油菜育种家的普遍青睐。但是，甘蓝型油菜小孢子的胚状体再生频率受诸多方面因素的影响，再生频率仍然较低。因此，亟待提供一种再生频率更高的利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法及其应用。本发明提供的利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法，借助高效的小孢子培养技术和秋水仙碱诱导，缩短育种进程、提高育种效率。
2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
3、本发明提供了一种利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法，包括以下步骤：
4、以聚合亲本目标性状的f1代为供体，从冷处理的花蕾中分离游离小孢子；
5、将所述游离小孢子在含秋水仙碱的nln-13培养基中暗培养，离心收集孢子沉淀；
6、将收集的孢子沉淀转移至nln-13培养基中继续暗培养，得到子叶型胚状体；
7、将所述子叶型胚状体接种到固体b5培养基中光照培养，诱导并扩繁幼苗，得到dh系幼苗；
8、将所述dh系幼苗移栽到田间，筛选出雄性可育的dh株系，自交得到dh系种子。
9、优选的，所述冷处理的温度为4～6℃，时间为20～28h。
10、优选的，所述冷处理后还包括消毒。
11、优选的，所述秋水仙碱的浓度为45～90mg/l。
12、优选的，所述暗培养的培养温度为30～35℃，培养天数为1～3d。
13、优选的，所述继续暗培养的培养温度为22～28℃，培养天数为20～30d。
14、优选的，所述光照培养为16h/8h光照培养，光照强度为2000～4000lx。
15、优选的，所述光照培养的培养温度为22～28℃，培养天数为20～30d。
16、本发明提供了上述利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法在创制株型紧凑甘蓝型油菜新种质中的应用。
17、优选的，所述创制株型紧凑甘蓝型油菜新种质时，以紧凑矮杆油菜‘6361’为母本，高杆油菜‘5078’为父本进行杂交，得到杂交f1代。
18、有益效果：本发明提供了一种利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法，借助高效的小孢子培养技术，缩短育种进程、提高育种效率。本发明通过小孢子培养技术获得纯合的二倍体单株，这种二倍体单株的各种遗传性状已纯合，多代自交不会发生性状分离，可以快速使性状纯合，显著缩短了育种年限，加速育种进程。本发明对花蕾进行冷处理，提高了再生频率；利用秋水仙碱，能显著提高产胚率，小孢子的产胚率达到6.45胚/蕾。本发明利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法，可为今后选育品质优良的新种质材料提供参考。
19、本发明提供了上述利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法在创制株型紧凑甘蓝型油菜新种质中的应用，通过小孢子培养技术创制株型紧凑的半矮杆甘蓝型油菜新种质，能够符合当前机械化栽培油菜品种需求的特点，有较强的应用潜力。
1.一种利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷处理的温度为4～6℃，时间为20～28h。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述冷处理后还包括消毒。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述秋水仙碱的浓度为45～90mg/l。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述暗培养的培养温度为30～35℃，培养天数为1～3d。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述继续暗培养的培养温度为22～28℃，培养天数为20～30d。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述光照培养为16h/8h光照培养，光照强度为2000～4000lx。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述光照培养的培养温度为22～28℃，培养天数为20～30d。
9.权利要求1～8任一项所述利用小孢子培养技术创制油菜新种质的方法在创制株型紧凑甘蓝型油菜新种质中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述创制株型紧凑甘蓝型油菜新种质时，以紧凑矮杆油菜‘6361’为母本，高杆油菜‘5078’为父本进行杂交，得到杂交f1代。
