背景技术：
技术实现思路
1、本发明至少部分基于包含识别ha-2抗原(例如，yigevlvsv和/或yigevlvsm)的t细胞受体(tcr)的结合蛋白的发现。
2、一方面，提供了结合蛋白，其包含：a)t细胞受体(tcr)α链cdr序列，其与选自由表1中所列tcrα链cdr序列组成的组的tcrα链cdr序列具有至少约80％同一性；和/或b)tcr β链cdr序列，其与选自由表1中所列tcrβ链cdr序列组成的组的tcrβ链cdr序列具有至少约80％同一性，其中结合蛋白能够与ha-2免疫原性肽-mhc(pmhc)复合物结合，任选地其中结合亲和力具有小于或等于约5x10-4 m的kd。
3、在另一方面，提供了结合蛋白，其包含：a)tcrα链可变(vα)域序列，其与选自由表1中所列tcr vα域序列组成的组的tcr vα域序列具有至少约80％同一性；和/或b)tcrβ链可变(vβ)域序列，其与选自由表1中所列tcr vβ域序列组成的组的tcr vβ域序列具有至少约80％同一性，其中结合蛋白能够与ha-2免疫原性肽-mhc(pmhc)复合物结合，任选地其中结合亲和力具有小于或等于约5x10-4m的kd。
4、在另一方面，提供了结合蛋白，其包含：a)tcrα链序列，其与选自由表1中所列tcrα链序列组成的组的tcrα链序列具有至少约80％同一性；和/或b)tcrβ链序列，其与选自由表1中所列tcrβ链序列组成的组的tcrβ链序列具有至少约80％同一性，其中结合蛋白能够与ha-2免疫原性肽-mhc(pmhc)复合物结合，任选地其中结合亲和力具有小于或等于约5x10-4m的kd。
5、在又一方面，提供了结合蛋白，其包含：a)tcrα链cdr序列，其选自由表1中所列的tcrα链cdr序列组成的组；和/或b)tcrβ链cdr序列，其选自由表1中所列的tcrβ链cdr序列组成的组，其中结合蛋白能够与ha-2免疫原性肽-mhc(pmhc)复合物结合，任选地其中结合亲和力具有小于或等于约5x10-4 m的kd。
6、在另一方面，提供了结合蛋白，其包含：a)tcrα链可变(vα)域序列，其选自由表1中所列的tcr vα域序列组成的组；和/或b)tcrβ链可变(vβ)域序列，其选自由表1中所列的tcrvβ域序列组成的组，其中结合蛋白能够与ha-2免疫原性肽-mhc(pmhc)复合物结合，任选地其中结合亲和力具有小于或等于约5x10-4 m的kd。
7、在另一方面，提供了结合蛋白，其包含：a)tcrα链序列，其选自由表1中所列的tcrα链序列组成的组；和/或b)tcr β链序列，其选自由表1中所列的tcrβ链序列组成的组，其中结合蛋白能够与ha-2免疫原性肽-mhc(pmhc)复合物结合，任选地其中结合亲和力具有小于或等于约5x10-4 m的kd。
8、进一步提供了许多实施方案，这些实施方案可以应用于本发明所涵盖的任何方面和/或与本文所述的任何其他实施方案组合。例如，在一个实施方案中，提供了1)tcrα链cdr、tcr vα域和/或tcrα链由选自表1中所列的trav、traj和trac基因的组的trav、traj和/或trac基因或其片段编码，和/或2)tcrβ链cdr、tcr vβ域和/或tcrβ链由选自表1中所列的trbv、trbj和trbc基因的组的trbv、trbj和/或trbc基因或其片段编码，和/或3)结合蛋白的每个cdr与表1中所列的关联参考cdr序列相比具有多达五个氨基酸取代、插入、缺失或其组合。在另一个实施方案中，ha-2免疫原性肽包含氨基酸序列yigevlvsv或yigevlvsm。在另一个实施方案中，结合蛋白是嵌合的、人源化的或人的。在又一个实施方案中，结合蛋白是tcr、tcr的抗原结合片段、单链tcr(sctcr)、嵌合抗原受体(car)或包含tcr和效应物域的融合蛋白，任选地其中结合域包含跨膜域和细胞内的效应物域。在又一个实施方案中，tcrα链和tcrβ链共价连接，任选地其中tcrα链和tcrβ链通过接头肽共价连接。在另一个实施方案中，tcrα链和/或tcrβ链共价连接至部分，任选地其中共价连接的部分包含亲和标签或标记物。在另一个实施方案中，亲和标签选自由cd34富集标签、谷胱甘肽-s-转移酶(gst)、钙调蛋白结合蛋白(cbp)、蛋白c标签、myc标签、halotag、ha标签、flag标签、his标签、生物素标签和v5标签组成的组，和/或其中标记物是荧光蛋白。在又一个实施方案中，共价连接的部分选自由炎性剂、细胞因子、毒素、细胞毒性分子、放射性同位素或抗体或其抗原结合片段组成的组。在另一个实施方案中，结合蛋白与细胞表面上的pmhc复合物结合。在另一个实施方案中，mhc是mhc多聚体，任选地其中mhc多聚体是四聚体。在又一个实施方案中，mhc是mhci类分子。在另一个实施方案中，mhc包含为hla血清型hla-a*02的mhcα链。在另一个实施方案中，hla等位基因选自由hla-a*0201、hla-a*0202、hla-a*0203、hla-a*0205、hla-a*0206和hla-a*0207等位基因组成的组。在又一个实施方案中，本文所述的结合蛋白与ha-2肽-mhc(pmhc)复合物的结合引发免疫应答，任选地其中免疫应答是t细胞应答。在另一个实施方案中，t细胞应答选自由t细胞扩增、细胞因子释放和/或细胞毒性杀伤组成的组。在另一个实施方案中，结合蛋白能够以小于或等于约1x10-4 m、小于或等于约5x10-5 m、小于或等于约1x10-5 m、小于或等于约5x10-6 m、小于或等于约1x10-6 m、小于或等于约5x10-7m、小于或等于约1x10-7 m、小于或等于约5x10-8 m、小于或等于约1x10-8 m、小于或等于约5x10-9 m、小于或等于约1x10-9 m、小于或等于约5x10-10 m、小于或等于约1x10-10 m、小于或等于约5x10-11 m、小于或等于约1x10-11 m、小于或等于约5x10-12 m或小于或等于约1x10-12 m的kd与ha-2免疫原性肽-mhc(pmhc)复合物特异性结合。在又一个实施方案中，结合蛋白对肽-mhc(pmhc)的结合亲和力比已知的t细胞受体高。在另一个实施方案中，结合蛋白对肽-mhc(pmhc)的结合亲和力比已知的t细胞受体高至少1.05倍。在另一个实施方案中，在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时，结合蛋白与已知的t细胞受体相比诱导更多的t细胞扩增、细胞因子释放和/或细胞毒性杀伤。在又一个实施方案中，在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时，结合蛋白与已知的t细胞受体相比诱导t细胞扩增、细胞因子释放和/或细胞毒性杀伤的至少1.05倍增加。如本文所用，在一些实施方案中，对倍数变化的提及可以是与任何感兴趣的参考模态的比较，诸如与不同结合蛋白的比较；与不同背景下的相同结合蛋白的比较，如相同结合蛋白在不同免疫细胞中以不同水平的表达，联合本文所述的其他试剂；以及等等。在另一个实施方案中，靶细胞是del、thp-1或tf-1细胞系。在另一个实施方案中，靶细胞是癌细胞。在又一个实施方案中，癌症是血液恶性肿瘤。在另一个实施方案中，血液恶性肿瘤是白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常病症、骨髓增生性赘生物或骨髓瘤。
9、在另一方面，提供了选自由表1中所列的tcrα链和β链序列组成的组的tcrα链和/或β链。
10、在另一方面，提供了分离的核酸分子，其在严格条件下与编码选自由表1中所列多肽序列组成的组的多肽的核酸或与编码选自由表1中所列多肽序列组成的组的多肽的核酸具有至少约80％同源性的序列的互补物杂交，任选地其中分离的核酸分子包含1)选自表1中所列的trav、traj和trac基因的组的trav、traj和/或trac基因或其片段，和/或2)选自表1中所列的trbv、trbj和trbc基因的组的trbv、trbj和/或trbc基因或其片段。
11、进一步提供了许多实施方案，这些实施方案可以应用于本发明所涵盖的任何方面和/或与本文所述的任何其他实施方案组合。例如，在一个实施方案中，核酸针对在宿主细胞中的表达进行密码子优化。
12、在另一方面，提供了包含本文所述的分离的核酸的载体。
13、进一步提供了许多实施方案，这些实施方案可以应用于本发明所涵盖的任何方面和/或与本文所述的任何其他实施方案组合。例如，在一个实施方案中，载体是克隆载体、表达载体或病毒载体。在另一个实施方案中，载体进一步包含编码cd8α和/或cd8β的核酸序列。在又一个实施方案中，编码cd8α或cd8β的核酸序列可操作地连接至编码标签的核酸。在又一个实施方案中，编码标签的核酸位于编码cd8α或cd8β的核酸序列的5'上游，使得标签融合至cd8α或cd8β的n端。在另一个实施方案中，标签是cd34富集标签。在另一个实施方案中，本文所述的分离的核酸和编码cd8α和/或cd8β的核酸序列与内部核糖体进入位点或编码自切割肽的核酸序列相互连接。在又一个实施方案中，自切割肽是p2a、e2a、f2a或t2a。
14、在另一方面，提供了包含本文所述的分离的核酸、包含本文所述的载体和/或表达本文所述的结合蛋白的宿主细胞，任选地其中细胞是遗传工程化的。
15、进一步提供了许多实施方案，这些实施方案可以应用于本发明所涵盖的任何方面和/或与本文所述的任何其他实施方案组合。例如，在一个实施方案中，宿主细胞包含tcr基因、hla基因或两者的染色体基因敲除。在另一个实施方案中，宿主细胞包含选自α1巨球蛋白基因、α2巨球蛋白基因、α3巨球蛋白基因、β1微球蛋白基因、β2微球蛋白基因及其组合的hla基因的敲除。在又一个实施方案中，宿主细胞包含选自tcrα可变区基因、tcrβ可变区基因、tcr恒定区基因及其组合的tcr基因的敲除。在另一个实施方案中，宿主细胞表达cd8α和/或cd8β。在另一个实施方案中，cd8α和/或cd8β与cd34富集标签融合。在又一个实施方案中，宿主细胞使用cd34富集标签进行富集。在另一个实施方案中，宿主细胞是造血祖细胞、外周血单核细胞(pbmc)、脐带血细胞或免疫细胞。在另一个实施方案中，免疫细胞是细胞毒性淋巴细胞、细胞毒性淋巴细胞前体细胞、细胞毒性淋巴细胞祖细胞、细胞毒性淋巴细胞干细胞、cd4+t细胞、cd8+t细胞、cd4/cd8双阴性t细胞、gamma delta(γδ)t细胞、自然杀伤(nk)细胞、nk-t细胞、树突状细胞或其组合。在另一个实施方案中，t细胞是初始t细胞、中央记忆t细胞、效应记忆t细胞或其组合。在又一个实施方案中，t细胞是原代t细胞或t细胞系的细胞。在另一个实施方案中，t细胞不表达内源性tcr或具有较低的内源性tcr表面表达。在另一个实施方案中，宿主细胞在与包含肽-mhc(pmhc)复合物的靶细胞接触时能够产生细胞因子或细胞毒性分子，该肽-mhc(pmhc)复合物包含在mhc分子的背景下的ha-2肽表位。在又一个实施方案中，宿主细胞在体外、离体或体内与靶细胞接触。在另一个实施方案中，细胞因子是tnf-α、il-2和/或ifn-γ。在另一个实施方案中，细胞毒性分子是穿孔素和/或颗粒酶，任选地其中细胞毒性分子是颗粒酶b。在又一个实施方案中，宿主细胞在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时能够产生更高水平的细胞因子或细胞毒性分子。在另一个实施方案中，宿主细胞能够产生高至少1.05倍水平的细胞因子或细胞毒性分子。在另一个实施方案中，宿主细胞能够杀伤包含肽-mhc(pmhc)复合物的靶细胞，该肽-mhc(pmhc)复合物包含在mhc分子的背景下的ha-2肽表位。在又一个实施方案中，杀伤通过杀伤测定来确定。在另一个实施方案中，杀伤测定中宿主细胞与靶细胞的比率为20:1至0.625:1。在另一个实施方案中，靶细胞是用1μg/ml至50pg/ml的ha-2肽脉冲的t2细胞。在又一个实施方案中，宿主细胞在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时能够杀伤更多数量的靶细胞。在另一个实施方案中，宿主细胞能够杀伤高至少1.05倍数量的靶细胞。在另一个实施方案中，靶细胞是del、thp-1或tf-1细胞系。在又一个实施方案中，ha-2免疫原性肽包含氨基酸序列yigevlvsv或yigevlvsm。在另一个实施方案中，mhc分子是mhc i类分子。在另一个实施方案中，mhc分子包含为hla血清型hla-a*02的mhcα链。在又一个实施方案中，hla等位基因选自由hla-a*02:01、hla-a*0202、hla-a*0203、hla-a*0205、hla-a*0206和hla-a*0207等位基因组成的组。在另一个实施方案中，靶细胞是选自由del、thp-1和tf-1细胞系组成的组的细胞系，是表达ha-2的造血癌细胞，或者不是nb4。在另一个实施方案中，癌细胞是选自由白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常病症、骨髓增生性赘生物或骨髓瘤组成的组的血液恶性肿瘤的。在又一个实施方案中，宿主细胞不表达ha-2抗原、不由本文所述的结合蛋白识别、不属于血清型hla-a*02的，和/或不表达hla-a*02等位基因。
16、在另一方面，提供了本文所述的宿主细胞群。
17、在另一方面，提供了组合物，其包含：a)本文所述的结合蛋白，b)本文所述的分离的核酸，c)本文所述的载体，d)本文所述的宿主细胞，和/或e)本文所述的宿主细胞群，以及载剂。
18、在另一方面，提供了装置或试剂盒，其包含：a)本文所述的结合蛋白，b)本文所述的分离的核酸，c)本文所述的载体，d)本文所述的宿主细胞，和/或e)本文所述的宿主细胞群，所述装置或试剂盒任选地包含用于检测a)、d)和/或e)与pmhc复合物的结合的试剂。
19、在另一个方面，提供了产生本文所述的结合蛋白的方法，其中方法包括以下步骤：(i)在如下条件下培养转化的宿主细胞，该宿主细胞已由包含编码本文所述的结合蛋白的序列的核酸转化，该条件适合于允许所述结合蛋白的表达；(ii)回收表达的结合蛋白。
20、在另一方面，提供了产生表达本文所述的结合蛋白的宿主细胞的方法，其中方法包括以下步骤：(i)将包含编码本文所述的结合蛋白的序列的核酸引入宿主细胞中；(ii)在适合于允许表达所述结合蛋白的条件下培养转化的宿主细胞。
21、在另一方面，提供了检测ha-2抗原和/或表达ha-2的细胞的存在或不存在的方法，任选地其中细胞是过度增殖细胞，该方法包括通过使用本文所述的至少一种结合蛋白或本文所述的至少一种宿主细胞来检测样品中所述ha-2抗原的存在或不存在，其中ha-2抗原的检测指示ha-2抗原和/或表达ha-2的细胞的存在。
22、进一步提供了许多实施方案，这些实施方案可以应用于本发明所涵盖的任何方面和/或与本文所述的任何其他实施方案组合。例如，在一个实施方案中，本文所述的至少一种结合蛋白或本文所述的至少一种宿主细胞在mhc分子的背景下与ha-2肽形成复合物，并且复合物以以下形式检测：荧光激活细胞分选(facs)、酶联免疫吸附测定(elisa)、放射免疫测定(ria)、免疫化学、蛋白质印迹或细胞内流动测定。在另一个实施方案中，方法进一步包括从受试者获得样品。在又一个实施方案中，方法进一步包括通过骨髓生检确认表达ha-2的细胞。
23、在另一方面，检测受试者中的以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的水平的方法，其包括a)使从受试者获得的样品与本文所述的至少一种结合蛋白、本文所述的至少一种宿主细胞或本文所述的宿主细胞群接触；和b)检测反应性水平，其中与对照水平相比更高的反应性水平指示受试者中的以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的水平。
24、进一步提供了许多实施方案，这些实施方案可以应用于本发明所涵盖的任何方面和/或与本文所述的任何其他实施方案组合。例如，在一个实施方案中，对照水平是参考数字。在另一个实施方案中，对照水平是不患有以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的受试者的水平。
25、在另一个方面，提供了监测受试者中的以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的进展的方法，该方法包括：a)如本文所述，在第一时间点检测受试者样品中的ha-2抗原或表达ha-2的感兴趣细胞的水平；b)在随后的时间点重复步骤a)；和c)比较在步骤a)和b)中检测到的ha-2抗原或表达ha-2的感兴趣细胞的水平以监测受试者中的以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的进展，其中与步骤a)相比，步骤b)中检测到的ha-2抗原或表达ha-2的感兴趣细胞的缺乏或水平降低指示受试者中的以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的进展受到抑制。
26、进一步提供了许多实施方案，这些实施方案可以应用于本发明所涵盖的任何方面和/或与本文所述的任何其他实施方案组合。例如，在一个实施方案中，受试者已经在第一个时间点和随后的时间点之间经历治疗以治疗以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发。
27、在又一方面，提供了评估针对以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的疗法的功效的方法，其包括：a)在向受试者提供针对以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的疗法的至少部分之前，在从受试者获得的第一样品中，确定从受试者获得的样品与本文所述的至少一种结合蛋白、本文所述的至少一种宿主细胞或本文所述的宿主细胞群之间反应性的存在或水平，和b)在提供针对以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的疗法的部分之后，在从受试者获得的第二样品中，确定从受试者获得的样品与本文所述的至少一种结合蛋白、本文所述的至少一种宿主细胞或本文所述的宿主细胞群之间反应性的存在或水平，其中相对于第一样品，第二样品中反应性的不存在或水平降低是疗法有效治疗受试者中的以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的指示。
28、进一步提供了许多实施方案，这些实施方案可以应用于本发明所涵盖的任何方面和/或与本文所述的任何其他实施方案组合。例如，在一个实施方案中，反应性的水平由a)结合的存在和/或b)t细胞活化和/或效应物功能指示，任选地其中t细胞活化或效应物功能是t细胞增殖、杀伤或细胞因子释放。在另一个实施方案中，t细胞活化或效应物功能是t细胞增殖、杀伤或细胞因子释放。在另一个实施方案中，t细胞结合、活化和/或效应物功能使用荧光激活细胞分选法(facs)、酶联免疫吸附测定法(elisa)、放射免疫测定法(ria)、免疫化学、蛋白质印迹或细胞内流动测定进行检测。
29、在另一方面，预防和/或治疗受试者中的以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的方法，其包括向受试者施用治疗有效量的包含表达本文所述的至少一种结合蛋白的细胞的组合物。
30、进一步提供了许多实施方案，这些实施方案可以应用于本发明所涵盖的任何方面和/或与本文所述的任何其他实施方案组合。例如，在一个实施方案中，细胞是同种异体细胞、同系细胞或自体细胞。在另一个实施方案中，细胞是经遗传修饰的。在又一个实施方案中，细胞包含tcr基因、hla基因或tcr基因和hla基因两者的染色体基因敲除。在另一个实施方案中，细胞包含选自α1巨球蛋白基因、α2巨球蛋白基因、α3巨球蛋白基因、β1微球蛋白基因、β2微球蛋白基因及其组合的hla基因的敲除。在另一个实施方案中，细胞包含选自tcrα可变区基因、tcrβ可变区基因、tcr恒定区基因及其组合的tcr基因的敲除。在另一个实施方案中，细胞表达cd8α和/或cd8β，任选地其中cd8α和/或cd8β与cd34富集标签融合。在另一个实施方案中，细胞使用cd34富集标签进行富集。在又一个实施方案中，细胞是造血祖细胞、外周血单核细胞(pbmc)、脐带血细胞或免疫细胞。在另一个实施方案中，免疫细胞是细胞毒性淋巴细胞、细胞毒性淋巴细胞前体细胞、细胞毒性淋巴细胞祖细胞、细胞毒性淋巴细胞干细胞、cd4+t细胞、cd8+t细胞、cd4/cd8双阴性t细胞、gamma delta(γδ)t细胞、自然杀伤(nk)细胞、nk-t细胞、树突状细胞或其组合。在另一个实施方案中，t细胞是初始t细胞、中央记忆t细胞、效应记忆t细胞或其组合。在另一个实施方案中，t细胞是原代t细胞或t细胞系的细胞。在又一个实施方案中，t细胞不表达内源性tcr或具有较低的内源性tcr表面表达。在另一个实施方案中，细胞在与包含肽-mhc(pmhc)复合物的靶细胞接触时能够产生细胞因子或细胞毒性分子，该肽-mhc(pmhc)复合物包含在mhc分子的背景下的ha-2。在另一个实施方案中，细胞因子是tnf-α、il-2和/或ifn-γ。在又一个实施方案中，细胞毒性分子是穿孔素和/或颗粒酶，任选地其中细胞毒性分子是颗粒酶b。在另一个实施方案中，细胞在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时能够产生更高水平的细胞因子或细胞毒性分子。在另一个实施方案中，细胞能够产生高至少1.05倍水平的细胞因子或细胞毒性分子。在又一个实施方案中，宿主细胞能够杀伤包含肽-mhc(pmhc)复合物的靶细胞，该肽-mhc(pmhc)复合物包含在mhc分子的背景下的ha-2。在另一个实施方案中，宿主细胞在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时能够杀伤更多数量的靶细胞。在另一个实施方案中，宿主细胞能够杀伤高至少1.05倍数量的靶细胞。在又一个实施方案中，ha-2免疫原性肽包含氨基酸序列yigevlvsv或yigevlvsm。在另一个实施方案中，mhc分子是mhc i类分子。在另一个实施方案中，mhc分子包含为hla血清型hla-a*02的mhcα链。在又一个实施方案中，hla等位基因选自由hla-a*02:01、hla-a*0202、hla-a*0203、hla-a*0205、hla-a*0206和hla-a*0207等位基因组成的组。在另一个实施方案中，靶细胞是受试者中表达ha-2抗原的非恶性细胞或过度增殖细胞。在另一个实施方案中，组合物进一步包含药学上可接受的载剂。在又一个实施方案中，组合物诱导针对受试者中表达ha-2抗原的非恶性细胞或过度增殖细胞的免疫应答。在另一个实施方案中，组合物在受试者中诱导针对表达ha-2抗原的非恶性细胞或过度增殖细胞的抗原特异性t细胞免疫应答。在另一个实施方案中，抗原特异性t细胞免疫应答包括cd4+辅助性t淋巴细胞(th)应答和cd8+细胞毒性t淋巴细胞(ctl)应答中的至少一者。在又一个实施方案中，过度增殖性病症包括血液恶性肿瘤。在另一个实施方案中，血液恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常病症、骨髓增生性赘生物或骨髓瘤。在另一个实施方案中，血液恶性肿瘤包括白血病。在又一个实施方案中，白血病选自急性髓性白血病(aml)、急性淋巴细胞性白血病(all)、混合表型急性白血病(mpal)、慢性髓性白血病(cml)、b细胞幼淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病或慢性淋巴细胞性白血病(cll)。在又一个实施方案中，血液学病症包括淋巴瘤。在另一个实施方案中，淋巴瘤选自霍奇金淋巴瘤(hl)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、中枢神经系统淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤(sll)、cd37+树突状细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织(malt)的结外边缘区b细胞淋巴瘤、结边缘区b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大b细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、血管内大b细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或伯基特淋巴瘤。在另一个实施方案中，血液恶性肿瘤包括骨髓增生异常病症(mds)，任选地其中mds选自难治性血细胞减少症伴单系发育异常(难治性贫血、难治性中性粒细胞减少症和难治性血小板减少症)、难治性贫血伴环状铁粒幼细胞(rars)、难治性贫血伴环状铁粒幼细胞-血小板增多症(rars-t)、难治性血细胞减少伴多细胞发育不良(rcmd)、难治性血细胞减少伴多细胞发育不良和环铁粒幼细胞(rcmd-rs)、难治性贫血伴原始细胞过多(raeb)、不可分类的骨髓增生异常、难治性儿童血细胞减少症或mds伴孤立del(5q)。在另一个实施方案中，非恶性病症是免疫缺陷病症，任选地其中免疫缺陷病症选自由严重联合免疫缺陷(scid)、wiskott-aldrich综合征、omenn综合征、x连锁淋巴增生综合征、慢性肉芽肿病、白细胞粘附缺陷、digeorge综合征、造血干细胞移植(hct)的适应症组成的组。在又一个实施方案中，非恶性病症是非恶性血液病症，任选地其中非恶性血液病症选自由镰状细胞性贫血、地中海贫血、再生障碍性贫血、噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(hlh)、严重再生障碍性贫血、骨髓衰竭综合征、范可尼贫血、戴-布二氏贫血和施瓦赫曼-蒙德综合征组成的组。在另一个实施方案中，非恶性病症是自身免疫病症，任选地其中自身免疫病症是系统性硬化症或多发性硬化症。在另一个实施方案中，受试者正在接受或先前接受造血细胞移植(hct)，任选地其中hct包含不表达ha-2抗原、不由本文所述的结合蛋白识别、不属于血清型hla-a*02，和/或不表达hla-a*02:01等位基因的细胞。在又一个实施方案中，hct包含供体造血细胞，该供体造血细胞包含编码hla组分的基因的染色体敲除、编码tcr组分的基因的染色体敲除或两者。在另一个实施方案中，受试者先前已接受淋巴细胞消减性化学疗法。在另一个实施方案中，淋巴细胞消减性化学疗法包括环磷酰胺、氟达拉滨、抗胸腺细胞球蛋白或其组合。在又一个实施方案中，方法进一步包括向受试者施用针对非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的至少一种额外治疗。在另一个实施方案中，针对非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的至少一种额外治疗与组合物并行或序贯施用。在另一个实施方案中，受试者是以ha-2抗原为特征的病症的动物模型和/或受试者是哺乳动物，任选地其中哺乳动物是人、灵长类动物或啮齿动物。
31、在另一方面，提供了表达载体，其包含可操作地连接至编码cd8α和/或cd8β的核酸序列的启动子。
32、进一步提供了许多实施方案，这些实施方案可以应用于本发明所涵盖的任何方面和/或与本文所述的任何其他实施方案组合。例如，在一个实施方案中，编码cd8α或cd8β的核酸序列可操作地连接至编码标签的核酸，使得标签融合至cd8α或cd8β。在另一个实施方案中，编码标签的核酸位于编码cd8α或cd8β的核酸序列的5'上游，使得标签融合至cd8α或cd8β的n端。在又一个实施方案中，标签是cd34富集标签。在又一个实施方案中，载体进一步包含编码tcrα和/或tcrβ的核酸序列。在另一个实施方案中，tcrα和/或tcrβ包含突变的跨膜域和/或突变的恒定域。在又一个实施方案中，突变的跨膜域和/或突变的恒定域增强tcrα和/或tcrβ的细胞表面表达，同时降低内源性tcrα和/或tcrβ的表达。在又一个实施方案中，编码cd8α和/或cd8β的核酸序列和编码tcrα和/tcrβ的核酸序列与内部核糖体进入位点或编码自切割肽的核酸序列相互连接。在另一个实施方案中，自切割肽是p2a、e2a、f2a或t2a。在又一个实施方案中，载体进一步包含编码选自由表1中所列多肽序列组成的组的多肽的核酸序列，或与编码选自由表1中所列多肽序列组成的组的多肽的核酸具有至少约80％同源性的序列，任选地其中分离的核酸分子包含1)选自表1中所列的trav、traj和trac基因的组的trav、traj和/或trac基因或其片段和/或2)选自表1中所列的trbv、trbj和trbc基因的组的trbv、trbj和/或trbc基因或其片段。在又一个实施方案中，载体具有表2中所列的核酸序列。
1.一种结合蛋白，所述结合蛋白包含：
2.一种结合蛋白，所述结合蛋白包含：
3.一种结合蛋白，所述结合蛋白包含：
4.一种结合蛋白，所述结合蛋白包含：
5.一种结合蛋白，所述结合蛋白包含：
6.一种结合蛋白，所述结合蛋白包含：
7.如权利要求1-6中任一项所述的结合蛋白，其中1)所述tcrα链cdr、tcr vα域和/或tcrα链由选自表1中所列的trav、traj和trac基因的组的trav、traj和/或trac基因或其片段编码，和/或2)所述tcrβ链cdr、tcr vβ域和/或tcrβ链由选自表1中所列的trbv、trbj和trbc基因的组的trbv、trbj和/或trbc基因或其片段编码，和/或3)所述结合蛋白的每个cdr与表1中所列的关联参考cdr序列相比具有多达五个氨基酸取代、插入、缺失或其组合。
8.如权利要求1-7中任一项所述的结合蛋白，其中所述ha-2免疫原性肽包含氨基酸序列yigevlvsv或yigevlvsm。
9.如权利要求1-8中任一项所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白是嵌合的、人源化的或人的。
10.如权利要求1-9中任一项所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白是tcr、tcr的抗原结合片段、单链tcr(sctcr)、嵌合抗原受体(car)或包含tcr和效应物域的融合蛋白，任选地其中结合域包含跨膜域和细胞内的效应物域。
11.如权利要求1-10中任一项所述的结合蛋白，其中所述tcrα链和所述tcrβ链共价连接，任选地其中所述tcrα链和所述tcrβ链通过接头肽共价连接。
12.如权利要求1-11中任一项所述的结合蛋白，其中所述tcrα链和/或所述tcrβ链共价连接至部分，任选地其中所述共价连接的部分包含亲和标签或标记物。
13.如权利要求12所述的结合蛋白，其中所述亲和标签选自由cd34富集标签、谷胱甘肽-s-转移酶(gst)、钙调蛋白结合蛋白(cbp)、蛋白c标签、myc标签、halotag、ha标签、flag标签、his标签、生物素标签和v5标签组成的组，和/或其中所述标记物是荧光蛋白。
14.如权利要求1-13中任一项所述的结合蛋白，其中所述共价连接的部分选自由炎性剂、细胞因子、毒素、细胞毒性分子、放射性同位素或抗体或其抗原结合片段组成的组。
15.如权利要求1-14中任一项所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白与细胞表面上的所述pmhc复合物结合。
16.如权利要求1-15中任一项所述的结合蛋白，其中所述mhc是mhc多聚体，任选地其中所述mhc多聚体是四聚体。
17.如权利要求1-16中任一项所述的结合蛋白，其中所述mhc是mhci类分子。
18.如权利要求1-17中任一项所述的结合蛋白，其中所述mhc包含为hla血清型hla-a*02的mhcα链。
19.如权利要求1-18中任一项所述的结合蛋白，其中所述hla等位基因选自由hla-a*0201、hla-a*0202、hla-a*0203、hla-a*0205、hla-a*0206和hla-a*0207等位基因组成的组。
20.如权利要求1-19中任一项所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白与所述ha-2肽-mhc(pmhc)复合物的结合引发免疫应答，任选地其中所述免疫应答是t细胞应答。
21.如权利要求1-20中任一项所述的结合蛋白，其中所述t细胞应答选自由t细胞扩增、细胞因子释放和/或细胞毒性杀伤组成的组。
22.如权利要求1-21中任一项所述的结合蛋白，所述结合蛋白能够以小于或等于约1x10-4m、小于或等于约5x10-5m、小于或等于约1x10-5m、小于或等于约5x10-6m、小于或等于约1x10-6m、小于或等于约5x10-7m、小于或等于约1x10-7m、小于或等于约5x10-8m、小于或等于约1x10-8m、小于或等于约5x10-9m、小于或等于约1x10-9m、小于或等于约5x10-10m、小于或等于约1x10-10m、小于或等于约5x10-11m、小于或等于约1x10-11m、小于或等于约5x10-12m或小于或等于约1x10-12m的kd与所述ha-2免疫原性肽-mhc(pmhc)复合物特异性结合。
23.如权利要求1-22中任一项所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白对所述肽-mhc(pmhc)的结合亲和力比已知的t细胞受体高。
24.如权利要求1-23中任一项所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白对所述肽-mhc(pmhc)的结合亲和力比已知的t细胞受体高至少1.05倍。
25.如权利要求1-24中任一项所述的结合蛋白，其中在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时，所述结合蛋白与已知的t细胞受体相比诱导更多的t细胞扩增、细胞因子释放和/或细胞毒性杀伤。
26.如权利要求1-25中任一项所述的结合蛋白，其中在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时，所述结合蛋白与已知的t细胞受体相比诱导t细胞扩增、细胞因子释放和/或细胞毒性杀伤的至少1.05倍增加。
27.如权利要求25或26所述的结合蛋白，其中所述靶细胞是del、thp1或tf-1细胞系。
28.如权利要求25或26所述的结合蛋白，其中所述靶细胞是癌细胞。
29.如权利要求28所述的结合蛋白，其中所述癌症是血液恶性肿瘤。
30.如权利要求29所述的结合蛋白，其中所述血液恶性肿瘤是白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常病症、骨髓增生性赘生物或骨髓瘤。
31.一种tcrα链和/或β链，其选自由表1中所列的tcrα链和β链序列组成的组。
32.一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子在严格条件下与以下项的互补物杂交：编码选自由表1中所列多肽序列组成的组的多肽的核酸或与编码选自由表1中所列多肽序列组成的组的多肽的核酸具有至少约80％同源性的序列，任选地其中所述分离的核酸分子包含1)选自表1中所列的trav、traj和trac基因的组的trav、traj和/或trac基因或其片段，和/或2)选自表1中所列的trbv、trbj和trbc基因的组的trbv、trbj和/或trbc基因或其片段。
33.如权利要求32所述的分离的核酸，其中所述核酸针对在宿主细胞中的表达进行密码子优化。
34.一种载体，所述载体包含权利要求32或33所述的分离的核酸。
35.如权利要求34所述的载体，其中所述载体是克隆载体、表达载体或病毒载体。
36.如权利要求34或35所述的载体，其中所述载体进一步包含编码cd8α和/或cd8β的核酸序列。
37.如权利要求34-36中任一项所述的载体，其中所述编码cd8a或cd8β的核酸序列可操作地连接至编码标签的核酸。
38.如权利要求34-37中任一项所述的载体，其中所述编码标签的核酸位于所述编码cd8α或cd8β的核酸序列的5′上游，使得所述标签融合至cd8α或cd8β的n端。
39.如权利要求34-38中任一项所述的载体，其中所述标签是cd34富集标签。
40.如权利要求34-39中任一项所述的载体，其中权利要求23或24所述的分离的核酸和所述编码cd8α和/或cd8β的核酸序列与内部核糖体进入位点或编码自切割肽的核酸序列相互连接。
41.如权利要求34-40中任一项所述的载体，其中所述自切割肽是p2a、e2a、f2a或t2a。
42.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求32或33所述的分离的核酸，包含权利要求34-41中任一项所述的载体，和/或表达权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白，任选地其中所述细胞是遗传工程化的。
43.如权利要求42所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含tcr基因、hla基因或两者的染色体基因敲除。
44.如权利要求42或43所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含选自α1巨球蛋白基因、α2巨球蛋白基因、α3巨球蛋白基因、β1微球蛋白基因、β2微球蛋白基因及其组合的hla基因的敲除。
45.如权利要求42-44中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞包含选自tcrα可变区基因、tcrβ可变区基因、tcr恒定区基因及其组合的tcr基因的敲除。
46.如权利要求42-45中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞表达cd8a和/或cd8β。
47.如权利要求46所述的宿主细胞，其中所述cd8α和/或cd8β与cd34富集标签融合。
48.如权利要求47所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞使用所述cd34富集标签进行富集。
49.如权利要求42-48中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是造血祖细胞、外周血单核细胞(pbmc)、脐带血细胞或免疫细胞。
50.如权利要求42-49中任一项所述的宿主细胞，其中所述免疫细胞是细胞毒性淋巴细胞、细胞毒性淋巴细胞前体细胞、细胞毒性淋巴细胞祖细胞、细胞毒性淋巴细胞干细胞、cd4+t细胞、cd8+t细胞、cd4/cd8双阴性t细胞、gamma delta(γδ)t细胞、自然杀伤(nk)细胞、nk-t细胞、树突状细胞或其组合。
51.如权利要求42-50中任一项所述的宿主细胞，其中所述t细胞是初始t细胞、中央记忆t细胞、效应记忆t细胞或其组合。
52.如权利要求42-51中任一项所述的宿主细胞，其中所述t细胞是原代t细胞或t细胞系的细胞。
53.如权利要求42-52中任一项所述的宿主细胞，其中所述t细胞不表达内源性tcr或具有较低的内源性tcr表面表达。
54.如权利要求42-53中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞在与包含肽-mhc(pmhc)复合物的靶细胞接触时能够产生细胞因子或细胞毒性分子，所述肽-mhc(pmhc)复合物包含在mhc分子的背景下的ha-2肽表位。
55.如权利要求54所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞在体外、离体或体内与靶细胞接触。
56.如权利要求54或55所述的宿主细胞，其中所述细胞因子是tnf-α、il-2和/或ifn-γ。
57.如权利要求54-56中任一项所述的宿主细胞，其中所述细胞毒性分子是穿孔素和/或颗粒酶，任选地其中所述细胞毒性分子是颗粒酶b。
58.如权利要求54-57中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时能够产生更高水平的细胞因子或细胞毒性分子。
59.如权利要求58所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够产生高至少1.05倍水平的细胞因子或细胞毒性分子。
60.如权利要求54-59中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够杀伤包含肽-mhc(pmhc)复合物的靶细胞，所述肽-mhc(pmhc)复合物包含在mhc分子的背景下的ha-2肽表位。
61.如权利要求60所述的宿主细胞，其中所述杀伤通过杀伤测定来确定。
62.如权利要求60或61所述的宿主细胞，其中所述杀伤测定中宿主细胞与靶细胞的比率为20∶1至0.625∶1。
63.如权利要求60-62中任一项所述的宿主细胞，其中靶细胞是用1μg/ml至50pg/ml的ha-2肽脉冲的t2细胞。
64.如权利要求60-62中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时能够杀伤更多数量的靶细胞。
65.如权利要求64所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞能够杀伤高至少1.05倍数量的靶细胞。
66.如权利要求60、61、64和65中任一项所述的宿主细胞，其中所述靶细胞是del、thp1或tf-1细胞系。
67.如权利要求54-66中任一项所述的宿主细胞，其中所述ha-2免疫原性肽包含氨基酸序列yigevlvsv或yigevlvsm。
68.如权利要求54-67中任一项所述的宿主细胞，其中所述mhc分子是mhc i类分子。
69.如权利要求54-68中任一项所述的宿主细胞，其中所述mhc分子包含为hla血清型hla-a*02的mhcα链。
70.如权利要求54-69中任一项所述的宿主细胞，其中所述hla等位基因选自由hla-a*02：01、hla-a*0202、hla-a*0203、hla-a*0205、hla-a*0206和hla-a*0207等位基因组成的组。
71.如权利要求54-70中任一项所述的宿主细胞，其中所述靶细胞是选自由del、thp-1和tf-1细胞系组成的组的细胞系，所述靶细胞是表达ha-2的造血癌细胞，或所述靶细胞不是nb4。
72.如权利要求71所述的宿主细胞，其中所述癌细胞是选自由白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常病症、骨髓增生性赘生物或骨髓瘤组成的组的血液恶性肿瘤的。
73.如权利要求54-71中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞不表达ha-2抗原、不由权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白识别、不属于血清型hla-a*02的，和/或不表达hla-a*02等位基因。
74.如权利要求42-73中任一项所述的宿主细胞的群。
75.一种组合物，所述组合物包含：a)根据权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白，b)根据权利要求32或33所述的分离的核酸，c)根据权利要求34-41中任一项所述的载体，d)根据权利要求42-73中任一项所述的宿主细胞，和/或e)根据权利要求74所述的宿主细胞的群，以及载剂。
76.一种装置或试剂盒，所述装置或试剂盒包含：a)根据权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白，b)根据权利要求32或33所述的分离的核酸，c)根据权利要求34-41中任一项所述的载体，d)根据权利要求42-73中任一项所述的宿主细胞，和/或e)根据权利要求74所述的宿主细胞的群，所述装置或试剂盒任选地包含用于检测a)、d)和/或e)与pmhc复合物的结合的试剂。
77.一种产生根据权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白的方法，其中所述方法包括以下步骤：(i)在如下条件下培养转化的宿主细胞，所述宿主细胞已由包含编码根据权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白的序列的核酸转化，所述条件适合于允许所述结合蛋白的表达；和(ii)回收所述表达的结合蛋白。
78.一种产生表达根据权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白的宿主细胞的方法，其中所述方法包括以下步骤：(i)将包含编码根据权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白的序列的核酸引入所述宿主细胞中；(ii)在适合于允许表达所述结合蛋白的条件下培养所述转化的宿主细胞。
79.一种检测ha-2抗原和/或表达ha-2的细胞的存在或不存在的方法，任选地其中所述细胞是过度增殖细胞，所述方法包括通过使用至少一种根据权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白或至少一种根据权利要求42-73中任一项所述的宿主细胞来检测样品中所述ha-2抗原的存在或不存在，其中所述ha-2抗原的检测指示ha-2抗原和/或表达ha-2的细胞的存在。
80.如权利要求79所述的方法，其中所述至少一种结合蛋白或所述至少一种宿主细胞在mhc分子的背景下与所述ha-2肽形成复合物，并且所述复合物以以下形式检测：荧光激活细胞分选(facs)、酶联免疫吸附测定(elisa)、放射免疫测定(ria)、免疫化学、蛋白质印迹或细胞内流动测定。
81.如权利要求79或80所述的方法，所述方法进一步包括从受试者获得所述样品。
82.如权利要求79-81中任一项所述的方法，所述方法进一步包括通过骨髓生检确认表达ha-2的细胞。
83.一种检测受试者中的以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的水平的方法，所述方法包括：
84.如权利要求83所述的方法，其中所述对照水平是参考数字。
85.如权利要求83所述的方法，其中所述对照水平是不患有所述以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的受试者的水平。
86.一种监测受试者中的以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的进展的方法，所述方法包括：
87.如权利要求86所述的方法，其中在所述第一个时间点和所述随后的时间点之间，所述受试者已经经历治疗以治疗所述以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发。
88.一种评估针对以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的疗法的功效的方法，所述方法包括：
89.如权利要求83-88中任一项所述的方法，其中反应性的水平由a)结合的存在和/或b)t细胞活化和/或效应物功能指示，任选地其中所述t细胞活化或效应物功能是t细胞增殖、杀伤或细胞因子释放。
90.如权利要求89所述的方法，其中所述t细胞活化或效应物功能是t细胞增殖、杀伤或细胞因子释放。
91.如权利要求83-90中任一项所述的方法，其中所述t细胞结合、活化和/或效应物功能使用荧光激活细胞分选法(facs)、酶联免疫吸附测定法(elisa)、放射免疫测定法(ria)、免疫化学、蛋白质印迹或细胞内流动测定进行检测。
92.一种预防和/或治疗受试者中的以ha-2抗原表达为特征的非恶性病症、过度增殖性病症或过度增殖性病症复发的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的包含表达至少一种权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白的细胞的组合物。
93.如权利要求92所述的方法，其中所述细胞是同种异体细胞、同系细胞或自体细胞。
94.如权利要求92或93所述的方法，其中所述细胞是经遗传修饰的。
95.如权利要求92-94中任一项所述的方法，其中所述细胞包含tcr基因、hla基因或tcr基因和hla基因两者的染色体基因敲除。
96.如权利要求92-95中任一项所述的方法，其中所述细胞包含选自α1巨球蛋白基因、α2巨球蛋白基因、α3巨球蛋白基因、β1微球蛋白基因、β2微球蛋白基因及其组合的hla基因的敲除。
97.如权利要求92-96中任一项所述的方法，其中所述细胞包含选自tcrα可变区基因、tcrβ可变区基因、tcr恒定区基因及其组合的tcr基因的敲除。
98.如权利要求92-97中任一项所述的方法，其中所述细胞表达cd8α和/或cd8β，
99.如权利要求98所述的方法，其中细胞使用所述cd34富集标签进行富集。
100.如权利要求92-99中任一项所述的方法，其中所述细胞是造血祖细胞、外周血单核细胞(pbmc)、脐带血细胞或免疫细胞。
101.如权利要求92-100中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞是细胞毒性淋巴细胞、细胞毒性淋巴细胞前体细胞、细胞毒性淋巴细胞祖细胞、细胞毒性淋巴细胞干细胞、cd4+t细胞、cd8+t细胞、cd4/cd8双阴性t细胞、gamma delta(γδ)t细胞、自然杀伤(nk)细胞、nk-t细胞、树突状细胞或其组合。
102.如权利要求92-101中任一项所述的方法，其中所述t细胞是初始t细胞、中央记忆t细胞、效应记忆t细胞或其组合。
103.如权利要求92-102中任一项所述的方法，其中所述t细胞是原代t细胞或t细胞系的细胞。
104.如权利要求92-103中任一项所述的方法，其中所述t细胞不表达内源性tcr或具有较低的内源性tcr表面表达。
105.如权利要求92-104中任一项所述的方法，其中所述细胞在与包含肽-mhc(pmhc)复合物的靶细胞接触时能够产生细胞因子或细胞毒性分子，所述肽-mhc(pmhc)复合物包含在mhc分子的背景下的ha-2。
106.如权利要求92-105中任一项所述的方法，其中所述细胞因子是tnf-α、il-2和/或ifn-γ。
107.如权利要求92-106中任一项所述的方法，其中所述细胞毒性分子是穿孔素和/或颗粒酶，任选地其中所述细胞毒性分子是颗粒酶b。
108.如权利要求92-107中任一项所述的方法，其中所述细胞在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时能够产生更高水平的细胞因子或细胞毒性分子。
109.如权利要求108所述的方法，其中所述细胞能够产生高至少1.05倍水平的细胞因子或细胞毒性分子。
110.如权利要求92-109中任一项所述的方法，其中所述宿主细胞能够杀伤包含肽-mhc(pmhc)复合物的靶细胞，所述肽-mhc(pmhc)复合物包含在mhc分子的背景下的ha-2。
111.如权利要求92-110中任一项所述的方法，其中所述宿主细胞在与具有ha-2的杂合表达的靶细胞接触时能够杀伤更多数量的靶细胞。
112.如权利要求111所述的方法，其中所述宿主细胞能够杀伤高至少1.05倍数量的靶细胞。
113.如权利要求92-112中任一项所述的方法，其中所述ha-2免疫原性肽包含氨基酸序列yigevlvsv或yigevlvsm。
114.如权利要求92-113中任一项所述的方法，其中所述mhc分子是mhc i类分子。
115.如权利要求92-114中任一项所述的方法，其中所述mhc分子包含为hla血清型hla-a*02的mhcα链。
116.如权利要求92-115中任一项所述的方法，其中所述hla等位基因选自由hla-a*02：01、hla-a*0202、hla-a*0203、hla-a*0205、hla-a*0206和hla-a*0207等位基因组成的组。
117.如权利要求92-116中任一项所述的方法，其中所述靶细胞是所述受试者中表达所述ha-2抗原的非恶性细胞或过度增殖细胞。
118.如权利要求92-117中任一项所述的方法，其中所述组合物进一步包含药学上可接受的载剂。
119.如权利要求92-118中任一项所述的方法，其中所述组合物在所述受试者中诱导针对表达所述ha-2抗原的所述非恶性细胞或所述过度增殖细胞的免疫应答。
120.如权利要求92-119中任一项所述的方法，其中所述组合物在所述受试者中诱导针对表达所述ha-2抗原的所述非恶性细胞或所述过度增殖细胞的抗原特异性t细胞免疫应答。
121.如权利要求92-120中任一项所述的方法，其中所述抗原特异性t细胞免疫应答包括cd4+辅助性t淋巴细胞(th)应答和cd8+细胞毒性t淋巴细胞(ctl)应答中的至少一者。
122.如权利要求83-121中任一项所述的方法，其中所述过度增殖性病症包括血液恶性肿瘤。
123.如权利要求83-122中任一项所述的方法，其中所述血液恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤、骨髓增生异常病症、骨髓增生性赘生物或骨髓瘤。
124.如权利要求83-123中任一项所述的方法，其中所述血液恶性肿瘤包括白血病。
125.如权利要求83-124中任一项所述的方法，其中所述白血病选自急性髓性白血病(aml)、急性淋巴细胞性白血病(all)、混合表型急性白血病(mpal)、慢性髓性白血病(cml)、b细胞幼淋巴细胞性白血病、毛细胞白血病或慢性淋巴细胞性白血病(cll)。
126.如权利要求83-125中任一项所述的方法，其中血液学病症包括淋巴瘤。
127.如权利要求83-125中任一项所述的方法，其中所述淋巴瘤选自霍奇金淋巴瘤(hl)、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、中枢神经系统淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤(sll)、cd37+树突状细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤、粘膜相关淋巴组织(malt)的结外边缘区b细胞淋巴瘤、结边缘区b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大b细胞淋巴瘤、前体b淋巴母细胞性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、血管内大b细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤或伯基特淋巴瘤。
128.如权利要求83-123中任一项所述的方法，其中所述血液恶性肿瘤包括骨髓增生异常病症(mds)，任选地其中所述mds选自难治性血细胞减少症伴单系发育异常(难治性贫血、难治性中性粒细胞减少症和难治性血小板减少症)、难治性贫血伴环状铁粒幼细胞(rars)、难治性贫血伴环状铁粒幼细胞-血小板增多症(rars-t)、难治性血细胞减少伴多细胞发育不良(rcmd)、难治性血细胞减少伴多细胞发育不良和环铁粒幼细胞(rcmd-rs)、难治性贫血伴原始细胞过多(raeb)、不可分类的骨髓增生异常、难治性儿童血细胞减少症或mds伴孤立del(5q)。
129.如权利要求83-123中任一项所述的方法，其中所述非恶性病症是免疫缺陷病症，任选地其中所述免疫缺陷病症选自由严重联合免疫缺陷(scid)、wiskott-aldrich综合征、omenn综合征、x连锁淋巴增生综合征、慢性肉芽肿病、白细胞粘附缺陷、digeorge综合征和造血干细胞移植(hct)的适应症组成的组。
130.如权利要求83-121中任一项所述的方法，其中所述非恶性病症是非恶性血液病症，任选地其中所述非恶性血液病症选自由镰状细胞性贫血、地中海贫血、再生障碍性贫血、噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(hlh)、严重再生障碍性贫血、骨髓衰竭综合征、范可尼贫血、戴-布二氏贫血和施瓦赫曼-蒙德综合征组成的组。
131.如权利要求83-121中任一项所述的方法，其中所述非恶性病症是自身免疫病症，任选地其中所述自身免疫病症是系统性硬化症或多发性硬化症。
132.如权利要求92-131中任一项所述的方法，其中所述受试者正在接受或先前接受造血细胞移植(hct)，任选地其中所述hct包含不表达ha-2抗原、不由权利要求1-30中任一项所述的结合蛋白识别、不属于血清型hla-a*02，和/或不表达hla-a*02：01等位基因的细胞。
133.如权利要求132所述的方法，其中所述hct包含供体造血细胞，所述供体造血细胞包含编码hla组分的基因的染色体敲除、编码tcr组分的基因的染色体敲除或两者。
134.如权利要求92-133中任一项所述的方法，其中所述受试者先前已接受淋巴细胞消减性化学疗法。
135.如权利要求134所述的方法，其中所述淋巴细胞消减性化学疗法包括环磷酰胺、氟达拉滨、抗胸腺细胞球蛋白或其组合。
136.如权利要求92-135中任一项所述的方法，其进一步包括向所述受试者施用针对所述非恶性病症、所述过度增殖性病症或所述过度增殖性病症复发的至少一种额外治疗。
137.如权利要求92-136中任一项所述的方法，其中针对所述非恶性病症、所述过度增殖性病症或所述过度增殖性病症复发的所述至少一种额外治疗与所述组合物并行或序贯施用。
138.如权利要求81-137中任一项所述的方法，其中所述受试者是以ha-2表达为特征的病症的动物模型和/或哺乳动物，任选地其中所述哺乳动物是人、灵长类动物或啮齿动物。
139.一种表达载体，所述表达载体包含可操作地连接至编码cd8α和/或cd8β的核酸序列的启动子。
140.如权利要求139所述的载体，其中所述编码cd8a或cd8β的核酸序列可操作地连接至编码标签的核酸，使得所述标签融合至所述cd8α或cd8β。
141.如权利要求139或140的载体，其中所述编码标签的核酸位于所述编码cd8α或cd8β的核酸序列的5′上游，使得所述标签融合至cd8α或cd8β的n端。
142.如权利要求139-141中任一项所述的载体，其中所述标签是cd34富集标签。
143.如权利要求139-142中任一项所述的载体，其中所述载体进一步包含编码tcra和/或tcrβ的核酸序列。
144.如权利要求139-143中任一项所述的载体，其中所述tcrα和/或tcrβ包含突变的跨膜域和/或突变的恒定域。
145.如权利要求139-144中任一项所述的载体，其中所述突变的跨膜域和/或突变的恒定域增强tcrα和/或tcrβ的细胞表面表达，同时降低内源性tcrα和/或tcrβ的表达。
146.如权利要求139-145中任一项所述的载体，其中所述编码cd8α和/或cd8β的核酸序列和所述编码tcrα和/tcrβ的核酸序列与内部核糖体进入位点或编码自切割肽的核酸序列相互连接。
147.如权利要求139-146中任一项所述的载体，其中所述自切割肽是p2a、e2a、f2a或t2a。
148.如权利要求139-147中任一项所述的载体，其中所述载体进一步包含编码选自由表1中所列多肽序列组成的组的多肽的核酸序列，或与编码选自由表1中所列多肽序列组成的组的多肽的核酸具有至少约80％同源性的序列，任选地其中分离的核酸分子包含1)选自表1中所列的trav、traj和trac基因的组的trav、traj和/或trac基因或其片段和/或2)选自表1中所列的trbv、trbj和trbc基因的组的trbv、trbj和/或trbc基因或其片段。
149.如权利要求139-148中任一项所述的载体，其中所述载体具有表2中所列的核酸序列。
