本发明涉及一种人类神经系统细胞样细胞的培养方法、培养物、细胞凝集块、及受试物质的筛选方法。本申请基于2021年11月5日在日本提出申请的日本专利特愿2021-180737号主张优先权，并将其内容引用至本文中。
背景技术：
1、tau蛋白是在中枢神经系统及末梢神经系统的神经细胞或胶质细胞中出现的微管结合蛋白，已知tau蛋白有助于微管的稳定化。另外，已知tau蛋白除微管的稳定化以外，也参与了神经信号转导等神经系统的生理现象。
2、已知痴呆症的患者的大脑中常见的神经原纤维缠结((neurofibrillarytangles，nfts))中，通过tau蛋白的过度的磷酸化等，从微管解离，在神经细胞内生成错误折叠tau蛋白，并蓄积于神经细胞内。因此，作为用于对神经变性机制进行研究的手段、或用于对痴呆症药物进行探索的手段而使用的体外(in vitro)试验用的神经细胞需要是错误折叠tau蛋白蓄积而成的神经细胞。
3、作为获得错误折叠tau蛋白蓄积而成的神经细胞的方法，已知有一种使用外源性的tau蛋白凝集物(tau-种子(tau-seed))对神经细胞进行培养的方法(例如，参照非专利文献1及非专利文献2)。
4、现有技术文献
5、非专利文献
6、非专利文献1：卡里卡里tk等人，《不同tau菌株的有区别的构象、聚集及细胞内化》，前细胞神经科学.，第13卷第296条，2019年(karikari tk et al.,“distinctconformations,aggregation and cellular internalization of different taustrains.”,front cell neurosci.,vol.13,article 296,2019),https：//doi.org/10.3389/fncel.2019.00296.
7、非专利文献2：莱利亚p等人，“显示神经原纤维缠结及跨细胞传播的新型人类神经元tau模型”，神经生物学疾病.，第106卷，第222-234页，2017年.(reillya p et al.,“novel human neuronal tau model exhibiting neurofibrillary tangles andtranscellular propagation”,neurobiol dis.,vol.106,pp.222-234,2017.)
技术实现思路
1、发明所要解决的问题
2、然而，在非专利文献1及非专利文献2所记载的培养方法中，难以效率良好地制作错误折叠tau蛋白蓄积而成的神经细胞。
3、本发明是鉴于所述情况而成，提供一种可效率良好地制作由tau-种子(tau-seed)产生的错误折叠tau蛋白蓄积而成的人类神经细胞样细胞的培养方法。
4、解决问题的技术手段
5、即，本发明包含以下形态。
6、(1)一种培养方法，包含在tau蛋白凝集物的存在下对人类神经系统细胞样细胞的细胞凝集块进行培养，接着在含有5μg/ml以上的脂质的培养基中进行培养，
7、所述脂质为选自由甘油脂质、甘油磷脂质及鞘脂质所组成的群组中的一种以上。
8、(2)根据(1)所述的培养方法，其中，所述脂质为甘油脂质、甘油磷脂质及鞘脂质。
9、(3)根据(1)或(2)所述的培养方法，其中，所述培养基中包含的甾醇脂质的浓度为5μg/ml以下。
10、(4)根据(1)至(3)中任一项所述的培养方法，其中，所述脂质为选自由三酰基甘油、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱、磷脂酸及鞘磷脂所组成的群组中的一种以上。
11、(5)根据(1)至(4)中任一项所述的培养方法，其中，所述培养基中包含的所述脂质的浓度为5μg/ml以上且150μg/ml以下。
12、(6)根据(1)至(5)中任一项所述的培养方法，其中，所述培养基还含有神经营养因子。
13、(7)一种培养方法，包含在tau蛋白凝集物的存在下对人类神经系统细胞样细胞的细胞凝集块进行培养，接着在含有神经营养因子的培养基中进行培养。
14、(8)根据(6)或(7)所述的培养方法，其中，所述神经营养因子为脑源性神经营养因子或胶质细胞源性神经营养因子。
15、(9)根据(1)至(8)中任一项所述的培养方法，其中，所述人类神经系统细胞样细胞在微管相关蛋白tau基因中具有变异。
16、(10)根据(9)所述的培养方法，其中，所述变异中，外显子中的碱基序列的变异是对选自由n279k、v337m、p301l、p301s及r406w所组成的群组中的一种以上的氨基酸变异进行编码的碱基序列的变异，且
17、内含子10中的碱基序列的变异是选自由e10+14及e10+16所组成的群组中的一种以上的碱基序列的变异。
18、(11)根据(1)至(10)中任一项所述的培养方法，其中，所述tau蛋白凝集物是重组tau蛋白的凝集物。
19、(12)根据(11)所述的培养方法，其中，所述重组tau蛋白是由具有外显子10的碱基序列的变异的微管相关蛋白tau基因表达。
20、(13)根据(1)至(12)中任一项所述的培养方法，其中，所述人类神经系统细胞样细胞是培养物。
21、(14)一种培养物，是利用根据(1)至(6)中任一项所述的培养方法来培养。
22、(15)一种培养物，是利用根据(7)至(13)中所述的培养方法来培养。
23、(16)一种细胞凝集块，包含在细部内含有mc1阳性的tau蛋白的人类神经细胞样细胞。
24、(17)一种受试物质的筛选方法，包含使受试物质与根据(14)或(15)所述的培养物或根据(16)所述的含有人类神经细胞样细胞的细胞凝集块接触，并对人类神经细胞样细胞的影响进行评价。
25、发明的效果
26、通过所述形态的培养方法，可效率良好地制作错误折叠tau蛋白蓄积而成的人类神经细胞样细胞。
1.一种培养方法，包含在tau蛋白凝集物的存在下对人类神经系统细胞样细胞的细胞凝集块进行培养，接着在含有5μg/ml以上的脂质的培养基中进行培养，
2.根据权利要求1所述的培养方法，其中，所述脂质为甘油脂质、甘油磷脂质及鞘脂质。
3.根据权利要求1所述的培养方法，其中，所述培养基中包含的甾醇脂质的浓度为5μg/ml以下。
4.根据权利要求1所述的培养方法，其中，所述脂质为选自由三酰基甘油、溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱、磷脂酸及鞘磷脂所组成的群组中的一种以上。
5.根据权利要求1所述的培养方法，其中，所述培养基中包含的所述脂质的浓度为5μg/ml以上且150μg/ml以下。
6.根据权利要求1所述的培养方法，其中，所述培养基还含有神经营养因子。
7.一种培养方法，包含在tau蛋白凝集物的存在下对人类神经系统细胞样细胞的细胞凝集块进行培养，接着在含有神经营养因子的培养基中进行培养。
8.根据权利要求6或7所述的培养方法，其中，所述神经营养因子为脑源性神经营养因子或胶质细胞源性神经营养因子。
9.根据权利要求1或7所述的培养方法，其中，所述人类神经系统细胞样细胞在微管相关蛋白tau基因中具有变异。
10.根据权利要求9所述的培养方法，其中，所述变异中，外显子中的碱基序列的变异是对选自由n279k、v337m、p301l、p301s及r406w所组成的群组中的一种以上的氨基酸变异进行编码的碱基序列的变异，且
11.根据权利要求1或7所述的培养方法，其中，所述tau蛋白凝集物是重组tau蛋白的凝集物。
12.根据权利要求11所述的培养方法，其中，所述重组tau蛋白是由具有外显子10的碱基序列的变异的微管相关蛋白tau基因表达。
13.根据权利要求1或7所述的培养方法，其中，所述人类神经系统细胞样细胞是培养物。
14.一种培养物，是利用如权利要求1所述的培养方法来培养。
15.一种培养物，是利用如权利要求7所述的培养方法来培养。
16.一种细胞凝集块，包含在细部内含有mc1阳性的tau蛋白的人类神经细胞样细胞。
17.一种受试物质的筛选方法，包含使受试物质与如权利要求14或15所述的培养物或如权利要求16所述的含有人类神经细胞样细胞的细胞凝集块接触，并对人类神经细胞样细胞的影响进行评价。
