本发明涉及生物的，具体涉及rv1579c蛋白抗原在检测结核分枝杆菌感染中的应用。
背景技术：
1、结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,m.tb)是引起结核病(tb)的病原体。
2、通过基因组比较技术，人们发现减毒牛结核分枝杆菌-bcg(bacillus calmette-guérin，即卡介苗)基因组相对于毒性结核分枝杆菌h37rv或者牛结核分枝杆菌(m.bovis)基因组缺失了一些区域，即rd区(region of differences，基因差异区域)。毒性结核分枝杆菌h37rv具有16个rd区，共编码129个蛋白。rd区基因编码的效应蛋白对于结核分枝杆菌的致病性和免疫调节作用至关重要。由于绝大多数rd区基因在bcg和非结核分枝杆菌基因组中缺失，仅存在于毒性结核杆菌中，因而以rd区编码的抗原为基础建立的结核病诊断和疫苗具有独特价值和重要意义。近年来，越来越多的rd区编码蛋白的功能被报道，例如，rd2区编码的mpt64在结核病的血清学igg检测中具有重要潜在价值。然而，还有很多rd区编码的蛋白的功能尚不清楚。
3、结核病的诊断技术分为细菌学诊断、分子生物学诊断和抗体抗原诊断等，其中针对结核分枝杆菌特异性抗原的抗体诊断具有很大应用前景，多种针对结核分枝杆菌特异性抗原(ppd、esat-6/cfp10、ag85b、rv0440、rv0867c、rv1733c、rv1737c、rv1980c、rv2029c、rv2031c和rv2389c)的抗体已经被证实对tb具有临床诊断作用。研究发现未经治疗的早期肺结核患者血清中针对结核菌抗原rv2031的igg水平比家庭接触者及社区对照者显著升高，且rv2031特异性igg会随着结核病的药物治疗而降低。其中，igg4升高的临床意义主要为判断是否出现了自身免疫性疾病等。igg4主要是血清免疫学检查，为免疫球蛋白的一种，通过免疫球蛋白的检测，能够进一步明确是否出现了自身免疫性疾病。升高的情况下可能是出现了结缔组织病，如类风湿关节炎、干燥综合征、系统性红斑狼疮等。也可能是患有肺结核、麻风等疾病。因此，结核菌抗原特异性igg对结核病的诊断和治疗具有重要的理论意义和应用价值。
技术实现思路
1、为了发掘新型结核分枝杆菌血清学诊断技术，本发明的目的在于提供一种v1579c蛋白抗原在检测结核分枝杆菌感染中的应用，检测结核分枝杆菌rd3区抗原rv1579c(又称est12)特异性igg4抗体在诊断结核病中的效果，将est12特异性igg4检测用于临床诊断结核病。
2、为实现上述目的，本发明技术方案如下：
3、本发明的第一方面，提供一种rv1579c蛋白抗原在制备结核分枝杆菌检测产品中的应用。
4、所述rv1579c是毒性结核分枝杆菌h37rv的rd3区编码的分泌性蛋白，其氨基酸序列如seq id no:1所示。
5、所述应用包括以下中的任意一种：
6、(1)将所述rv1579c蛋白抗原单独用于检测结核分枝杆菌；
7、(2)以所述rv1579c蛋白抗原为基础，联合其它现有方法来检测结核分枝杆菌。
8、所述方法(2)中，以所述rv1579c蛋白抗原为基础，将est12特异性igg4检测用于临床诊断结核病；联合结核菌培养、抗酸染色、genexpert、t细胞斑点试验、结核菌igg抗体实验中的任意一种检测结核分枝杆菌。
9、联合诊断对于提高传统结核病检测项目t-spot的敏感性具有重要意义。
10、所述rv1579存在于结核分枝杆菌h37rv和h37ra。
11、本发明的第三方面，提供一种rv1579c蛋白抗原在制备结核分枝杆菌中试剂盒中的应用。
12、本发明的第三方面，提供一种用于检测结核分枝杆菌的试剂盒，包括所述的rv1579c蛋白抗原。
13、本发明中，检测rv1579c(又称est12)在不同分枝杆菌中的表达；克隆并原核表达est12重组蛋白。est12是结核分枝杆菌rd3区rv1579c基因编码的蛋白，其氨基酸序列如seqid no:1所示(vtpinrpltn derqlmhela vqvvcsqtgc spdaaveale sfakdgtlil rgdtenayleaggnvlvhad rdwlafhasy pgndplrdar pieqdddqga gsps)。编码est12蛋白的核苷酸序列如seq id no:2所示(gtgaccccga tcaaccggcc cctgaccaac gacgaacgac aactgatgcacgagctggca gtccaggttg tctgctcgca gacgggttgc tcacccgatg cggcggtcga agcactcgaatccttcgcga aagacggaac acttatcctc cgcggcgaca ccgagaacgc ctacctcgaa gccggaggcaatgttcttgt ccatgccgat cgtgactggc ttgccttcca cgcgtcgtat cccggcaacg acccgctgcgagacgcccga cctatcgagc aggacgacga ccagggggcg gggtcgccat cgtga)。将该基因克隆到原核表达载体pet-28a并在大肠杆菌e.coli bl-21(stain atcc baa-1025)中表达该蛋白，然后通过ni+柱纯化est12蛋白。
14、采用间接法酶联免疫吸附elisa实验检测结核病患者(tb)和健康自愿者(hd)外周血血清中est12特异性igg4的水平，并分析其诊断效果。
15、本发明发现结核病患者(tb)血清中est12特异性igg4的水平显著高于健康自愿者，且est12特异性igg4诊断结果与传统t-spot的检测结果具有较好的一致性，联合诊断atb的特异性高达94.39％。因此est12特异性igg4对活动性肺结核具有很重要的临床诊断价值。
16、本发明采用elisa法检测人类血清中est12抗原特异性igg4水平，能鉴别诊断结核病，并能排除其他非结核分枝杆菌感染的情况。总之，本发明发现了一种新的est12特异性igg4抗体作为结核诊断方法的潜在应用价值，对临床atb诊断具有重要指导意义。在结核病临床诊断等方面有着广阔的开发及应用前景。
17、本发明的有益效果：本发明为诊断结核病提供了一个新的抗原靶标蛋白，采用本发明的rv1579c蛋白抗原进行结核病血清学检测，对于结核病的诊断具有灵敏度高特异性好，检测成本低等优点。
1.rv1579c蛋白抗原在制备结核分枝杆菌检测产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述rv1579c是毒性结核分枝杆菌h37rv的rd3区编码的分泌性蛋白，其氨基酸序列如seq id no:1所示。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述应用包括以下中的任意一种：
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述方法(2)中，以所述rv1579c蛋白抗原为基础，将est12特异性igg4检测用于临床诊断结核病；联合结核菌培养、抗酸染色、genexpert、t细胞斑点试验、结核菌igg抗体实验中的任意一种检测结核分枝杆菌。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述rv1579存在于结核分枝杆菌h37rv和h37ra。
6.rv1579c蛋白抗原在制备结核分枝杆菌中试剂盒中的应用。
7.一种用于检测结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于：包括如权利要求1所述的rv1579c蛋白抗原。
