本发明属于药物分析，涉及一种心痛宁药物的检测方法。
背景技术：
1、心痛宁滴丸，为贵州威利德制药有限公司的产品，功效为温经活血，理气止痛。用于寒凝气滞，血瘀阻络，胸痹心痛，遇寒发作，舌苔色白，有瘀斑者。
2、心痛宁滴丸目前检测执行的标准为ws3-b-2858-98-10及2020年版《中国药典》，该检测标准存在的问题：(1)川芎和香附的薄层鉴别主斑点较模糊、重现性差、且出现拖尾现象，影响检验结果的判断；(2)川芎和香附分开进行薄层鉴别，操作复杂，检测成本高；(3)检测项目中未涉及肉桂药材中的含量测定，不能有效控制心痛宁滴丸成品的质量；(4)阿魏酸原有含量测定方法，分离度差，峰形不好、精确度差、稳定性差等问题。
3、为了解决上述问题，有效提高产品质量，提升心痛宁滴丸的质量标准，本发明团队对心痛宁滴丸原检测方法进行深入研发、考察，建立了一种用于心痛宁药物的检测方法，该方法不仅解决了川芎和香附薄层鉴别出现的斑点模糊，重现性差的问题，还解决了川芎和香附的分别进行薄层鉴别，存在操作复杂、检测成本高的问题，还建立了同时检测阿魏酸和桂皮醛含量测定，进一步提高产品质量标准，且节约了检测成本。
技术实现思路
1、本发明的目的提供一种心痛宁药物的检测方法。
2、本发明所述心痛宁药物由由肉桂65.3g、川芎654.0g、醋炙香附392.3g组成组成；
3、其制备方法为：取肉桂、川芎加9倍量水，蒸馏5小时，提取挥发油，挥发油另器收集；药渣加8倍量水煎煮二次，第一次为2.5小时，第二次为2小时，合并煎液，浓缩至相对密度在50℃时为1.20～1.25的清膏，加等量乙醇使沉淀，吸取上清液，滤过，滤液备用；香附粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法用80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗滤，收集渗辘液3300ml，与肉桂、川芎滤液合并，回收乙醇，浓缩至约110ml；取挥发油，加乙醇适量溶解，加7ml吐温-80，制成增溶液；取833g聚乙二醇-6000，加热熔融后，加入清膏及挥发油增溶液，搅拌均匀，保持温度在60～90℃，滴入0～5℃的液体石蜡中，滴制成丸，制成1000g，即得；其特征在于，检测内容为：性状；用薄层色谱法鉴别川芎和香附；用薄层色谱法鉴别肉桂；检查；用高效液相色谱法测定川芎的阿魏酸含量和肉桂的桂皮醛含量。
4、本发明所述用薄层色谱法鉴别川芎和香附的方法为：取本品5g，研细，加水饱和的乙醚20～30ml，回流提取20～60分钟，滤过，滤液自然挥干，残渣加醋酸乙酯提取2次，每次10-30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另分别取川芎对照药材和香附对照药材各1g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、川芎对照药材溶液和香附对照药材溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以比例为7∶2∶1环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
5、优选的，本发明所述用薄层色谱法鉴别川芎和香附的方法为：取本品5g，研细，加水饱和的乙醚30ml，回流提取30分钟，滤过，滤液自然挥干，残渣加醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另分别取川芎对照药材和香附对照药材各1g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、川芎对照药材溶液和香附对照药材溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以比例为7∶2∶1环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
6、本发明所述用薄层色谱法鉴别肉桂的方法为：取本品5g，研细，加30～60℃的石油醚10～20ml冷浸过夜，滤过，滤液挥去石油醚至1ml，作为供试品溶液；另取桂皮醛对照品适量，加乙醇制成每1ml中含1μl的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以比例为10：1的甲苯-三氯甲烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7、优选的，本发明所述用薄层色谱法鉴别肉桂的方法为：取本品5g，研细，加30～60℃的石油醚15ml冷浸过夜，滤过，滤液挥去石油醚至1ml，作为供试品溶液；另取桂皮醛对照品适量，加乙醇制成每1ml中含1μl的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以比例为10：1的甲苯-三氯甲烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
8、本发明所述用高效液相色谱法测定川芎的阿魏酸含量和肉桂的桂皮醛含量的方法为：
9、(1)供试品溶液的制备：取本品3g，精密称定，精密加入20～30ml甲醇超声提取30～60分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液；
10、(2)对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，加比例为95:5甲醇-甲酸溶液制成5μg/ml，摇匀，即得；取桂皮醛对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；
11、(3)色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.05～0.15％磷酸溶液为流动相b，按下表进行梯度洗脱；检测波长为310nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000；
12、
13、(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，即得。
14、优选的，本发明所述(1)供试品溶液的制备为：取本品3g，精密称定，精密加入25ml甲醇超声提取30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。
15、优选的，本发明所述(3)色谱条件与系统适应性试验为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.08～0.12％％磷酸溶液为流动相b，按下表进行梯度洗脱；检测波长为310nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。
16、
17、进一步优选的，本发明所述(3)色谱条件与系统适应性试验为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸溶液为流动相b，按下表进行梯度洗脱；检测波长为310nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。
18、
19、本发明所述超声，功率为250w，频率为40khz。
20、本发明的有益效果
21、1、本发明在心痛宁滴丸原有检测项目的基础上，优化了川芎和香附的薄层鉴别，且在同一色谱条件下同时检测川芎和香附的薄层鉴别；新增了桂皮醛的含量测定，该含量测定方法可同时检测阿魏酸和桂皮醛的含量，节约了检测成本，提升质量检测标准，更有利于保证产品的质量。
22、2、本发明川芎和香附的薄层鉴别方法的修定，通过了供试品制备方法的选择、展开剂的优化等筛选实验，得到了在同一色谱条件下同时鉴别川芎和香附药材的方法，该方法通过了检测结果斑点清晰，分离度符合要求，rf值适中，重现性好；并通过了专属性实验、不同厂家薄层板的比较的方法学考察，表明该方法薄层色谱斑点清晰，专属性较好，能同时鉴别川芎和香附药材。不同厂家的薄层板斑点比移值和分离效果虽然有一定的差异，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的主斑点。故确认川芎和香附的薄层鉴别的修定内容纳入心痛宁滴丸标准。
23、3、本发明新增了桂皮醛的含量测定，通过对原有含量检测方法中色谱条件的筛选，结果得到可同时测定阿魏酸和桂皮醛的含量的方法。该含量测定方法该方法阿魏酸和桂皮醛峰峰形，峰纯度，分离度、峰形均较好，且该方法稳定性好，适用于心痛宁滴丸的检验。
24、4、本发明对阿魏酸和桂皮醛含量检测方法通过了专属性的方法学考察，结果表明阴性对照溶液在阿魏酸和桂皮醛相应的位置无干扰，该方法专属性较好。
25、5、本发明对阿魏酸和桂皮醛含量检测方法通过了线性和范围的方法学考察，结果表明阿魏酸在0.75-5.00μg范围内，桂皮醛在1.50-10.00μg范围内,均呈良好的线性关系。
26、6、本发明对阿魏酸和桂皮醛含量检测方法通过了溶液稳定性的方法学考察，结果表明供试品溶液在48小时内稳定性良好。
27、7、本发明对阿魏酸和桂皮醛含量检测方法通过了精密度的方法学考察，结果表明6份供试品溶液的阿魏酸、桂皮醛的含量测定结果rsd均＜2％，说明该方法重复性较好。
28、8、本发明对阿魏酸含量进行了重现性考察，结果不同的实验室间测定结果相对平均偏差＜2％，表明重现性较好。
29、9、本发明对阿魏酸含量检测方法通过了耐用性的方法学考察，结果表明取同一份供试品3份，按供试品制备方法制备平行样，分别用不同的色谱柱测定样品含量，结果不同色谱柱含量测定结果相近，表明该方法耐用性较好。
30、10、本发明的含量检测方法通过10批样品的测定，结果表明不同批次心痛宁滴丸人阿魏酸、桂皮醛的含量差异较小，工艺较稳定。
1.一种心痛宁药物的检测方法，该药物由肉桂65.3g、川芎654.0g、醋炙香附392.3g组成；其制备方法为：取肉桂、川芎加9倍量水，蒸馏5小时，提取挥发油，挥发油另器收集；药渣加8倍量水煎煮二次，第一次为2.5小时，第二次为2小时，合并煎液，浓缩至相对密度在50℃时为1.20～1.25的清膏，加等量乙醇使沉淀，吸取上清液，滤过，滤液备用；香附粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法用80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗滤，收集渗辘液3300ml，与肉桂、川芎滤液合并，回收乙醇，浓缩至约110ml；取挥发油，加乙醇适量溶解，加7ml吐温-80，制成增溶液；取833g聚乙二醇-6000，加热熔融后，加入清膏及挥发油增溶液，搅拌均匀，保持温度在60～90℃，滴入0～5℃的液体石蜡中，滴制成丸，制成1000g，即得；其特征在于，检测内容为：性状；用薄层色谱法鉴别川芎和香附；用薄层色谱法鉴别肉桂；检查；用高效液相色谱法测定川芎的阿魏酸含量和肉桂的桂皮醛含量。
2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于：所述用薄层色谱法鉴别川芎和香附的方法为：取本品5g，研细，加水饱和的乙醚20～30ml，回流提取20～60分钟，滤过，滤液自然挥干，残渣加醋酸乙酯提取2次，每次10～30ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另分别取川芎对照药材和香附对照药材各1g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、川芎对照药材溶液和香附对照药材溶液各2～5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以比例为7∶2∶1环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求2所述检测方法，其特征在于：所述用薄层色谱法鉴别川芎和香附的方法为：取本品5g，研细，加水饱和的乙醚30ml，回流提取30分钟，滤过，滤液自然挥干，残渣加醋酸乙酯提取2次，每次20ml，合并醋酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另分别取川芎对照药材和香附对照药材各1g，同法分别制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、川芎对照药材溶液和香附对照药材溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以比例为7∶2∶1环己烷-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于：所述用薄层色谱法鉴别肉桂的方法为：取本品5g，研细，加30～60℃的石油醚10～20ml冷浸过夜，滤过，滤液挥去石油醚至1ml，作为供试品溶液；另取桂皮醛对照品适量，加乙醇制成每1ml中含1μl的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以比例为10：1的甲苯-三氯甲烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
5.根据权利要求4所述检测方法，其特征在于：所述用薄层色谱法鉴别肉桂的方法为：取本品5g，研细，加30～60℃的石油醚15ml冷浸过夜，滤过，滤液挥去石油醚至1ml，作为供试品溶液；另取桂皮醛对照品适量，加乙醇制成每1ml中含1μl的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各3μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以比例为10：1的甲苯-三氯甲烷为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
6.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于：所述用高效液相色谱法测定川芎的阿魏酸含量和肉桂的桂皮醛含量的方法为：
7.根据权利要求6所述检测方法，其特征在于：所述(1)供试品溶液的制备为：取本品3g，精密称定，精密加入25ml甲醇超声提取30分钟，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，用0.45um的微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。
8.根据权利要求7所述检测方法，其特征在于：所述(3)色谱条件与系统适应性试验为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.08～0.12％％磷酸溶液为流动相b，按下表进行梯度洗脱；检测波长为310nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。
9.根据权利要求8所述检测方法，其特征在于：所述(3)色谱条件与系统适应性试验为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸溶液为流动相b，按下表进行梯度洗脱；检测波长为310nm，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。
10.根据权利要求6-7任一项所述检测方法，其特征在于：所述超声，功率为250w，频率为40khz。
