一种促进iNKT细胞形成的诱导剂及其制备方法和应用与流程

专利检索2025-12-27  10


本发明属于免疫学,具体涉及用于一种促进inkt细胞形成的诱导剂及其制备方法和应用。


背景技术:

1、i型自然杀伤t细胞(type i invarian nature killer),即inkt细胞,兼具nk细胞和t细胞标志的特殊免疫细胞,在先天固有性免疫和后天适应性免疫中均有重要作用。与传统t细胞不同,inkt细胞可特异性识别cd1d分子呈递的糖脂抗原,在接受抗原刺激后快速活化并分泌颗粒酶b、穿孔素发挥细胞毒性作用,还可分泌大量炎症因子(如干扰素-γ和白细胞介素-4)激活自然杀伤(natural killer,nk)细胞、传统t细胞及b细胞等免疫细胞。由于其效应物的多样性,inkt细胞具有多种生物学功能,如抗肿瘤、抗感染、抗动脉粥样硬化、抗自身免疫性疾病等。

2、inkt细胞是一个不均一的细胞群体,根据其转录因子的表达情况及主要产生的细胞因子水平的不同,主要分为inkt1、inkt2和inkt17三个亚群。inkt细胞既能控制和缓解糖尿病、肿瘤及器官移植的排斥的进展,又能扩大和促进红斑狼疮、过敏性哮喘等的发生和发展,这些相互矛盾的实验结果,推测是与不同亚群的inkt细胞功能有关。鉴于功能和用途的多样性,inkt细胞被誉为免疫系统的“瑞士军刀”。

3、尽管inkt细胞具有强大的生物学效应,但inkt细胞的数量极少,仅占机体循环t细胞的0.01-0.1%,且由于激素和衰老等多种因素的影响,inkt细胞的发育场所-胸腺在青少年时期即开始萎缩,这进一步降低了机体中inkt细胞的数量,并严重限制了其在临床应用中的潜力。因此,如何促进inkt细胞形成成为当前免疫学领域研究的热点。

4、目前文献中报道的诱导扩增inkt细胞的方法有:1.将成熟的nkt细胞核转移至胚胎干细胞(es),从而大量扩增nkt细胞。2.骨髓来源的成体造血干细胞(hspc)大量诱导为inkt细胞。3.分离纯化小鼠脾脏inkt细胞进行大量的扩增。

5、中国发明专利cn107904203a提供了一种胸腺来源的inkt细胞定向诱导扩增的方法,该方法包括两个阶段:第一阶段为体内刺激inkt细胞增殖,使用特异性的刺激剂α-galcer刺激小鼠体内inkt细胞增殖;第二阶段为体外定向诱导inkt细胞扩增,取经α-galcer刺激的小鼠胸腺,制备单细胞悬液,并加入α-galcer、诱导剂以辅助inkt细胞扩增并引导其分化。但该方法存在技术难度大、操作繁琐和耗时长等缺点,且安全性未知。

6、与化学药物和生物药相比,天然药物的安全性较高,且原料易得,因此,从天然药物中筛选具有促进inkt细胞形成的诱导剂具有巨大前景。


技术实现思路

1、本发明针对现有技术存在的问题,提供了一种促进inkt细胞形成的诱导剂及其制备方法和应用。

2、为实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:

3、一种促进inkt细胞形成的诱导剂,所述诱导剂的组分包括灵芝、铁皮石斛、黄芪和丹参中的至少一种。

4、优选地,所述灵芝包括灵芝子实体和灵芝孢子粉。

5、优选地,所述灵芝子实体包括赤芝和紫芝。

6、优选地,所述灵芝孢子粉包括破壁灵芝孢子粉和去壁灵芝孢子粉。

7、优选地,所述诱导剂的组分包括灵芝、铁皮石斛、黄芪和丹参中的至少两种。

8、更优选地,所述诱导剂包括灵芝和铁皮石斛。

9、优选地,所述诱导剂的组分包括灵芝、铁皮石斛、黄芪和丹参中的至少三种。

10、更优选地,所述诱导剂包括灵芝、铁皮石斛和黄芪。

11、优选地,所述诱导剂包括灵芝、铁皮石斛、黄芪和丹参。

12、优选地,按质量份数计,包括如下组分:灵芝30-70份,铁皮石斛10-40份,黄芪10-20份,丹参10-60份。

13、更优选地,按质量份数计,包括如下组分:灵芝45-55份,铁皮石斛15-25份,黄芪15-20份,丹参10-40份。

14、进一步优选地,按质量份数计,包括如下组分:灵芝50份,铁皮石斛20份,黄芪20份,丹参10份。

15、本发明还提供了上述诱导剂的制备方法,包括如下步骤:

16、(1)取原料药材灵芝、铁皮石斛、黄芪和丹参中的一种或多种,过筛,水提,浓缩,得浓缩液;

17、(2)将步骤(1)得到的浓缩液过大孔树脂,洗脱,减压浓缩,干燥,即得。

18、优选地,步骤(1)中所述过筛的目数为10-20目,所述水提的加水量为原料药材总重量的5-20倍,水提的温度为40-70℃,水提的时间为0.5-5h。

19、优选地,步骤(2)中所述浓缩液过大孔树脂的上样流速为1-3bv/h,所述洗脱包括先用乙醇洗脱,弃去乙醇洗脱液,再用水洗脱,收集洗脱液。

20、优选地,所述大孔树脂需进行活化,所述减压浓缩的温度为50-60℃,所述减压浓缩至固含量为60-70%。

21、优选地,所述干燥的时间为40-50h,所述干燥为冷冻干燥。

22、优选地,所述乙醇的体积分数为60-70%,乙醇的用量为柱体积的3-6倍。

23、优选地,所述乙醇洗脱的流速为1-2bv/h,所述水洗脱的流速为1.5-2.5bv/h。

24、优选地,所述水的用量为柱体积的4-5倍。

25、本发明还提供了上述诱导剂在制备促进inkt细胞形成产品中的应用。

26、优选地,所述产品的形态为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液、软膏剂、栓剂、气雾剂、注射剂、散剂或丸剂。

27、相对于现有技术,本发明具有以下有益效果:

28、本发明从天然药物中筛选具有促进inkt细胞形成的诱导剂,具有原料易得、操作简单、成本低、安全性高等优点,适合工业化生产,具有广泛的应用前景。



技术特征:

1.一种促进inkt细胞形成的诱导剂,其特征在于,所述诱导剂的组分包括灵芝、铁皮石斛、黄芪和丹参中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的诱导剂,其特征在于,所述诱导剂的组分包括灵芝、铁皮石斛、黄芪和丹参中的至少两种。

3.根据权利要求2所述的诱导剂,其特征在于,按质量份数计,所述诱导剂包括如下组分:灵芝30-70份,铁皮石斛10-40份,黄芪10-20份,丹参10-60份。

4.根据权利要求1-3任一项所述的诱导剂,其特征在于,所述灵芝包括灵芝子实体和灵芝孢子粉。

5.根据权利要求4所述的诱导剂,其特征在于,所述灵芝子实体包括赤芝和紫芝,所述灵芝孢子粉包括破壁灵芝孢子粉和去壁灵芝孢子粉。

6.一种如权利要求1-5任一项所述的诱导剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述过筛的目数为10-20目,所述水提的加水量为原料药材总重量的5-20倍,水提的温度为40-70℃,水提的时间为0.5-5h。

8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述浓缩液过大孔树脂的上样流速为1-3bv/h,所述洗脱包括先用乙醇洗脱,弃去乙醇洗脱液,再用水洗脱,收集洗脱液,所述大孔树脂需进行活化,所述减压浓缩的温度为50-60℃,所述减压浓缩至固含量为60-70%,所述干燥的时间为40-50h,所述干燥为冷冻干燥。

9.根据权利要求8所述的制备方法,其特征在于,所述乙醇的体积分数为60-70%,乙醇的用量为柱体积的3-6倍,所述乙醇洗脱的流速为1-2bv/h,所述水洗脱的流速为1.5-2.5bv/h,所述水的用量为柱体积的4-5倍。

10.一种如权利要求1-5任一项所述的诱导剂或者权利要求6-9任一项所述的制备方法制备得到的诱导剂在制备促进inkt细胞形成的产品中的应用,其特征在于,所述产品的形态为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液、软膏剂、栓剂、气雾剂、注射剂、散剂或丸剂。


技术总结
本发明属于免疫学技术领域,具体涉及一种促进iNKT细胞形成的诱导剂及其制备方法和应用。本发明提供的促进iNKT细胞形成的诱导剂的组分包括灵芝、铁皮石斛、黄芪和丹参中的至少一种。本发明从天然药物中筛选具有促进iNKT细胞形成的诱导剂,具有原料易得、操作简单、成本低、安全性高等优点,适合工业化生产,具有广泛的应用前景。

技术研发人员:杨继鸿,李振皓,潘海涛,徐靖,李明焱
受保护的技术使用者:浙江寿仙谷植物药研究院有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/5/29
转载请注明原文地址:https://win.8miu.com/read-1159590.html

最新回复(0)