本发明属于生物，具体涉及一种缓解酒精引发的皮肤溃烂的人胚胎干细胞外泌体修复制剂。
背景技术：
0、技术背景
1、“诱导性多功能干细胞”(induced pulripotent stem cell，ips)最早是由当时在京都大学执教的山中伸弥(yamanaka shinya)的研究团队于2006年发现，并于2012年获诺贝尔医学生理学奖。ips是一种可以永久保存、无限扩增，并能“72变”的顶级干细胞，为再生医学以及探索美容未来领域提供了强大的武器。ips细胞的主要特征是“几乎能够无限增殖”，而且“能够变化为身体中的各种细胞”。发挥这些特征可以解码再生医疗，发现疾病原因，开阔疾病治疗和机体修复手段。因此探究ips的分泌的物质在各种疾病和疑难问题中的修复作用成为了非常核心的关键问题。
2、外泌体，是由几乎所有细胞释放的膜包裹的纳米囊泡细胞类型，已经被认为在细胞-细胞的中介中发挥重要沟通作用。近年来，外泌体的生理和病理作用的研究已经很广泛了。外泌体可以转移蛋白质，mrna,micrornas和其他生物活性分子到受体细胞并影响其生物学特性。目前已知人多能干细胞细胞的微囊泡/外泌体中鉴定出多种不同的染色体rna序列，还有多种丰富的细胞因子，在调控发育、代谢、组织器官修复、抗衰老等方面具有显著优势。
3、酒精诱导的皮炎是一种皮肤病，通常发生在饮酒后，特别是在酗酒或频繁饮酒的人中更为常见。酒精诱导的皮炎的症状包括皮肤红肿、瘙痒、脱屑、疼痛或烧灼感，极端情况下可能会导致皮肤溃烂。目前，多能干细胞的外泌体对酒精诱导皮炎损伤修复中的应用研究尚未报道。
技术实现思路
1、基于上述问题，本发明公开了一种多能干细胞的外泌体修复制剂，在酒精诱导皮炎损伤中起到抑制炎症伤口溃烂恶化、修复皮肤的作用。
2、所述修复制剂中含有浓度为1-1000亿颗粒数/ml人重编程多能干细胞hips外泌体；
3、所述人重编程多能干细胞hips外泌体的制备包括以下步骤：
4、步骤1，人重编程多能干细胞hips的培养，待融合度大于50％时开始收集上清，其中干细胞标记物oct4、nanog以及sox2的阳性率高于90％；人重编程多能干细胞hips细胞系由中国科学院干细胞库提供；
5、步骤2，一次离心，上清收集；
6、步骤3，二次离心，上清收集；
7、步骤4，过膜后三次离心，上清收集；
8、步骤5，吸取上清，不搅动沉淀，留1-5％左右液体，用枪头吹打均匀，加入到5-20倍体积的超离管中；
9、步骤6，预冷pbs补足，悬液离心；
10、步骤7，小心的吸取上清，沉淀用预冷pbs重悬，4℃或-80℃保存。
11、在一种实施方式中，所述步骤1中，人重编程多能干细胞hips的培养方法包括以下步骤：
12、步骤2-1，hips细胞系由中国科学院干细胞库提供，所有细胞均培养于mtesr培养基及含有5％co2的37℃细胞培养箱；
13、步骤2-2，生长培养基：在室温融化或4℃过夜融解mtesr1 5×培养基配套的商业化添加剂，将100ml解冻的添加剂完全混匀后加入到400ml mtesr1基础培养基中，混匀，50ml/管分装后-20℃保存。
14、步骤2-3，将lamin521基质胶按1:10的比例用含钙镁的dpbs培养基稀释后加到6孔板中，置于37℃培养箱包被1h；将细胞种于基质胶包被的6孔板中，每孔铺板40万，使用mtesr1培养基培养，每天换液；
15、步骤2-3，细胞长至50％融合时，进行培养基上清的收集分泌外泌体；待细胞长至70％-80％融合时，进行传代；吸去培液，用dpbs洗涤细胞后，加入1ml versene，37℃消化4-5min；吸去versene，将1ml mtesr1用移液枪垂直于孔板以画圈的动作打入孔中，将细胞聚集体吹下，进行传代。
16、在一种实施方式中，所述步骤2中离心条件为2000g 4℃，离心时间为10min；
17、所述步骤3中离心条件为12,000g 4℃，离心时间为10min；
18、所述步骤4中离心条件为12,000g 4℃，离心时间为90min；
19、所述步骤6中离心条件为4℃120,000g，离心时间为70min。
20、在一种实施方式中，所述步骤4中过膜为采用0.22μm滤膜过滤。
21、在一种实施方式中，修复制剂使用生理盐水进行配置。
22、本发明的第二个目的在于提供上述人胚胎干细胞外泌体修复制剂在缓解酒精引发的皮肤溃烂中的应用。
1.一种缓解酒精引发的皮肤溃烂的人胚胎干细胞外泌体修复制剂，其特征在于，所述修复制剂中含有浓度为1-1000亿颗粒数/ml人重编程多能干细胞 hips外泌体；
2.根据权利要求1所述的一种缓解酒精引发的皮肤溃烂的人胚胎干细胞外泌体修复制剂，其特征在于，所述步骤1中，人重编程多能干细胞hips的培养方法包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述的一种缓解酒精引发的皮肤溃烂的人胚胎干细胞外泌体修复制剂，其特征在于，所述步骤2中离心条件为2000 g 4℃ ，离心时间为10 min；
4.根据权利要求1所述的一种缓解酒精引发的皮肤溃烂的人胚胎干细胞外泌体修复制剂，其特征在于，所述步骤4中过膜为采用0.22 μm滤膜过滤。
5.根据权利要求1所述的一种缓解酒精引发的皮肤溃烂的人胚胎干细胞外泌体修复制剂，其特征在于，修复制剂使用生理盐水进行配置。
6.根据权利要求1-5所述的一种人胚胎干细胞外泌体修复制剂在缓解酒精引发的皮肤溃烂中的应用。
