本申请涉及生物检测,尤其涉及一种同步检测青鱼和团头鲂的特异性引物组、探针及应用。
背景技术:
1、青鱼和团头鲂同属于鲤形目鲤科,由于鲤科鱼是目前分布最广泛且种类最多的鱼类,同时涵盖了食用鱼类、观赏鱼类等多个大类,其经济价值巨大,这使得鲤科鱼类的水产养殖规模巨大,同时鲤科鱼相关的鱼肉制品(例如鱼片、鱼丸、鱼糕、鱼排等)的消费量巨大,并且鲤科鱼在生物学、医学和水产养殖学上具有较大的研究价值。
2、由于青鱼和团头鲂肉的价格较高,市场上常有假冒青鱼或者团头鲂的肉制品进行销售,并且也有商贩将二者掺杂作为单种鱼肉出售,而这会严重威胁到消费者的食品安全。现阶段针对青鱼和团头鲂肉的区分检测包括设计的特异引物对hljflf2和hljflr2,并采用分子扩增电泳检测方法进行检测,但是该方法的检测步骤复杂、耗时太长且准确度不高,不利于现场快速检测。
技术实现思路
1、本申请提供了一种同步检测青鱼和团头鲂的特异性引物组、探针及应用,以解决现有技术中针对青鱼和团头鲂的检测步骤复杂且准确度不高的技术问题。
2、第一方面,本申请提供了一种同步检测青鱼和团头鲂的特异性引物组,所述特异性引物组包括第一引物对和第二引物对,所述第一引物对用于检测青鱼,所述第二引物对用于检测团头鲂;
3、所述第一引物对的上游引物具有如seq id no.1所示的核苷酸序列,所述第一引物对的下游引物具有如seq id no.2所示的核苷酸序列;
4、所述第二引物对的上游引物具有如seq id no.3所示的核苷酸序列,所述第二引物对的下游引物具有如seq id no.4所示的核苷酸序列。
5、第二方面,本申请提供了一种同步检测青鱼和团头鲂的特异性探针,所述特异性探针包括第一探针和第二探针,所述第一探针对用于检测青鱼,所述第二探针对用于检测团头鲂;所述第一探针具有如seq id no.5所示的核苷酸序列;所述第二探针具有如seq idno.6所示的核苷酸序列;
6、所述第一探针的5’端具有至少一种荧光标记报告基团,所述第一探针的3’端具有至少一种猝灭基团;
7、所述第二探针的5’端具有至少一种荧光标记报告基团,所述第二探针的3’端具有至少一种猝灭基团。
8、可选的,所述荧光标记报告基团包括fam。
9、可选的,所述猝灭基团包括tamra。
10、第三方面,本申请提供了一种同步检测青鱼和团头鲂的试剂盒,所述试剂盒包括第一方面所述的特异性引物组和/或第二方面所述的特异性探针。
11、可选的,所述试剂盒包括所述特异性引物组和所述特异性探针。
12、可选的,所述试剂盒还包括rox染料和pcr扩增预混液。
13、第四方面,本申请提供了一种同步检测青鱼和团头鲂的方法,所述方法包括:
14、对待测鱼肉样品进行dna提取,得到目的dna片段;
15、对所述目的dna片段和第三方面所述的试剂盒进行混合,后对混合物进行pcr扩增,得到扩增产物;
16、对所述扩增产物进行荧光检测,得到扩增产物的ct值;
17、根据所述扩增产物的ct值,确定待测鱼肉样品的组成;
18、其中,所述待测鱼肉样品包括青鱼、团头鲂以及青鱼和团头鲂的混合物。
19、可选的,所述试剂盒中特异性引物组和特异性探针的体积比为1~3。
20、可选的,所述扩增产物的ct值≤30。
21、本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点:
22、本申请实施例提供的一种同步检测青鱼和团头鲂的特异性引物组,针对青鱼和团头鲂的基因设计两组特异性引物对,以形成特异性引物组,同时针对该特异性引物组设计两种特异性探针,可以利用特异性引物组针对待测鱼肉样品中的青鱼或团头鲂进行特异性的pcr扩增,从而可以得到足够多的扩增产物,最后通过设计的特异性探针与扩增产物结合,从而可以利用特异性探针上的荧光标记报告基团和猝灭基团配合使得扩增产物上形成荧光信号,通过检测荧光信号的强度,即可明确待测鱼肉样品中青鱼或团头鲂的核酸量;该检测过程可以实时荧光定量检测待测鱼肉样品中青鱼和团头鲂的核酸量,从而明确待测鱼肉样品是否含有青鱼和团头鲂,相比传统的电泳检测,该实时荧光定量检测的步骤简单、耗时短且准确度高,可以实现现场的快速检测。
1.一种同步检测青鱼和团头鲂的特异性引物组,其特征在于,所述特异性引物组包括第一引物对和第二引物对,所述第一引物对用于检测青鱼,所述第二引物对用于检测团头鲂;
2.一种同步检测青鱼和团头鲂的特异性探针,其特征在于,所述特异性探针包括第一探针和第二探针,所述第一探针对用于检测青鱼,所述第二探针对用于检测团头鲂;所述第一探针具有如seq id no.5所示的核苷酸序列;所述第二探针具有如seq id no.6所示的核苷酸序列;
3.根据权利要求2所述的特异性探针,其特征在于,所述荧光标记报告基团包括fam。
4.根据权利要求3所述的特异性探针,其特征在于,所述猝灭基团包括tamra。
5.一种同步检测青鱼和团头鲂的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述的特异性引物组和/或权利要求2-4任一项所述的特异性探针。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括所述特异性引物组和所述特异性探针。
7.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括rox染料和pcr扩增预混液。
8.一种同步检测青鱼和团头鲂的方法,其特征在于,所述方法包括:
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述试剂盒中特异性引物组和特异性探针的体积比为1~3。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述扩增产物的ct值≤30。
