一种鉴别尖刺信使蝎的特征多肽及其应用的制作方法

专利检索2025-11-25  15


本发明属于生物,具体涉及一种鉴别尖刺信使蝎的特征多肽及其应用。


背景技术:

1、尖刺信使蝎( lychas mucronatus),隶属于钳蝎科,是一种展现着别具一格的形态与生理机能的蝎子。其身躯构造独特,由坚固的头胸部与柔韧的腹部紧密相连。尤为引人注目的是,头胸部前端装备有一对强健有力的钳状螯肢,这不仅是捕捉和牢牢固定猎物的得力工具,更内置了毒腺,赋予了它在防御与捕食中的双重优势。尖刺信使蝎的识别标志在于其尾部醒目的双针构造,尾部与钳子显得特别饱满,身躯上未有明显的线条纹理,尾节的色泽随着生长逐渐加深,唇部则保持着统一的色调。这种蝎子主要栖息于中国的海南岛以及东南亚的某些特定地域,这些地方的气候与环境条件恰到好处地满足了其生存需求。在野生状态下,尖刺信使蝎主要以昆虫及其他小型节肢动物为食,凭借灵敏的螯肢与尾部的毒刺,它能够高效地捕获并消化猎物。

2、尖刺信使蝎往往被不法商贩或个别人员作为正品东亚钳蝎的替代品,悄然流入全蝎药材市场。这主要归因于它们在外观和形态上与正品存在着一定的相似性,使得掺杂使假的行为在利益的诱惑下难以根除。更为严峻的是,由于许多中成药在生产过程中全蝎药材已经失去了原有的外观特征,这进一步加剧了掺伪掺假的隐蔽性,使得检测工作更加困难重重。


技术实现思路

1、针对现有技术中存在的问题,本发明提供了一种鉴别尖刺信使蝎的特征多肽。

2、本发明的另一目的为提供了一种上述特征多肽在鉴别东亚钳蝎药材及其制剂是否掺伪中的应用。

3、本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为:

4、本发明提供了一种鉴别尖刺信使蝎的特征多肽,所述特征多肽的序列为:

5、。

6、本发明还提供了一种上述特征多肽在鉴别东亚钳蝎药材及其制剂是否掺伪尖刺信使蝎中的应用,包括以下步骤:

7、(1)待检测样品预处理:将待检测样品粉碎得粉末,称取粉末,加入变性缓冲液,摇匀,升温处理,处理结束后取出放冷至室温,离心;取上清液,将上清液进行脱盐和酶解,酶解结束后取出放冷至室温,离心取上清液,得待检测溶液;

8、(2)使用hplc-三重四级杆质谱法进行检测,分析对比待检测溶液中的质谱结果,若待检测溶液中在肽段1、肽段2、肽段3、肽段4的出峰处出峰,则认为样品中含有尖刺信使蝎。

9、进一步的,步骤(1)中,待检测样品预处理的具体步骤为:将待检测样品粉碎得粉末,称取粉末50mg,加入10ml变性缓冲液摇匀,置90℃处理4小时,取出放冷至室温,离心;取上清液500μl,将上清液进行脱盐和酶解,酶解结束后取出放冷至室温,离心取上清液,得待检测溶液。

10、上述变性缓冲液为6m盐酸胍,1m tris,2.5mm乙二胺四乙酸,加浓盐酸调ph至8.0。

11、进一步的,所述脱盐和酶解为将上清液加入到分子量为3kda的超滤离心管,12000转/分钟离心10分钟,弃去下层溶液,加入500μl水,12000转/分钟离心10分钟,弃去下层溶液,加入500μl水,12000转/分钟离心10分钟,弃去下层溶液,加入500μl质量浓度为1%的nh4hco3溶液和10μl浓度为10mg/ml的牛胰蛋白酶溶液,37℃酶解1小时,取出放冷至室温,于100℃终止酶解反应。

12、进一步的,步骤(2)中,所述hplc的参数为: 色谱柱为 c18:2.1 mm × 100 mm,1.7 μm,柱温 43℃,流速0.3ml/分钟,流动相:a为含0.1%甲酸的水溶液,b为乙腈,梯度洗脱,进样体积5μl,溶剂延迟为0-4分钟和26-30分钟。

13、上述梯度洗脱的具体程序为:0–12分钟,10% b→20% b;12–21分钟,20% b→97%b;21–25分钟,97% b;25–25.5分钟,97% b→10% b;25.5–30分钟,10% b。

14、进一步的,步骤(2)中,所述三重四级杆质谱法的参数为:质谱检测器,电喷雾电离,正离子模式用于多反应监测,鞘气流量46l/h,辅助气体流量850l/h,喷雾电压3.5kv,离子源温度150℃,辅助气体温度400℃,锥孔电压50v,碰撞电压35v。

15、本发明提供的特征多肽中,所述肽段1、肽段2、肽段3、肽段4的检测离子对为:

16、。

17、本发明的有益效果为:

18、(1)本发明筛选得到的尖刺信使蝎的特征多肽,具有优异的专属性和稳定性,特异性强,能够有效的鉴别东亚钳蝎药材及相关制剂中是否掺伪有尖刺信使蝎,具有良好的应用前景;

19、(2)本发明提供的特征多肽,其应用有助于保证全蝎药材、饮片以及含全蝎相关药品的质量,打击不法企业违规掺伪行为,保障人民群众用药安全,具有良好的社会效益和经济效益。



技术特征:

1.一种鉴别尖刺信使蝎的特征多肽,其特征在于,所述特征多肽的序列为:

2.一种如权利要求1所述的特征多肽在鉴别东亚钳蝎药材及其制剂是否掺伪尖刺信使蝎中的应用,其特征在于,包括以下步骤:

3.根据权利要求2所述的特征多肽在鉴别东亚钳蝎药材及其制剂是否掺伪尖刺信使蝎中的应用,其特征在于,步骤(1)中,待检测样品预处理的具体步骤为:将待检测样品粉碎得粉末,称取粉末50mg,加入10ml变性缓冲液摇匀,置90℃处理4小时,取出放冷至室温,离心;取上清液500μl,将上清液进行脱盐和酶解,酶解结束后取出放冷至室温,离心取上清液,得待检测溶液。

4.根据权利要求3所述的特征多肽在鉴别东亚钳蝎药材及其制剂是否掺伪尖刺信使蝎中的应用,其特征在于,所述变性缓冲液为6m盐酸胍,1m tris,2.5mm乙二胺四乙酸,加浓盐酸调ph至8.0。

5.根据权利要求3所述的特征多肽在鉴别东亚钳蝎药材及其制剂是否掺伪尖刺信使蝎中的应用,其特征在于,所述脱盐和酶解为将上清液加入到分子量为3kda的超滤离心管,12000转/分钟离心10分钟,弃去下层溶液,加入500μl水,12000转/分钟离心10分钟,弃去下层溶液,加入500μl水,12000转/分钟离心10分钟,弃去下层溶液,加入500μl质量浓度为1%的nh4hco3溶液和10μl浓度为10mg/ml的牛胰蛋白酶溶液,37℃酶解1小时,取出放冷至室温,于100℃终止酶解反应。

6.根据权利要求2所述的特征多肽在鉴别东亚钳蝎药材及其制剂是否掺伪尖刺信使蝎中的应用,其特征在于,步骤(2)中,所述hplc的参数为: 色谱柱为 c18:2.1 mm × 100mm,1.7 μm,柱温 43℃,流速0.3ml/分钟,流动相:a为含0.1%甲酸的水溶液,b为乙腈,梯度洗脱,进样体积5μl,溶剂延迟为0-4分钟和26-30分钟。

7.根据权利要求6所述的特征多肽在鉴别东亚钳蝎药材及其制剂是否掺伪尖刺信使蝎中的应用,其特征在于,所述梯度洗脱的具体程序为:0–12分钟,10% b→20% b;12–21分钟,20% b→97% b;21–25分钟,97% b;25–25.5分钟,97% b→10% b;25.5–30分钟,10% b。

8.根据权利要求2所述的特征多肽在鉴别东亚钳蝎药材及其制剂是否掺伪尖刺信使蝎中的应用,其特征在于,步骤(2)中,所述三重四级杆质谱法的参数为:质谱检测器,电喷雾电离,正离子模式用于多反应监测,鞘气流量46l/h,辅助气体流量850l/h,喷雾电压3.5kv,离子源温度150℃,辅助气体温度400℃,锥孔电压50v,碰撞电压35v。

9.根据权利要求2-8任一项所述的特征多肽在鉴别东亚钳蝎药材及其制剂是否掺伪尖刺信使蝎中的应用,其特征在于,肽段1、肽段2、肽段3、肽段4的检测离子对为:


技术总结
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种鉴别尖刺信使蝎的特征多肽及其应用。本发明筛选得到的尖刺信使蝎的特征多肽,具有优异的专属性和稳定性,特异性强,能够有效的鉴别东亚钳蝎药材及相关制剂中是否掺伪有尖刺信使蝎,具有良好的应用前景;本发明提供的特征多肽,其应用有助于保证全蝎药材、饮片以及含全蝎相关药品的质量,打击不法企业违规掺伪行为,保障人民群众用药安全,具有良好的社会效益和经济效益。

技术研发人员:汪冰,林永强,林晓,薛菲,周广涛,牛艳,焦阳,于凤蕊,林林
受保护的技术使用者:山东省食品药品检验研究院
技术研发日:
技术公布日:2024/5/29
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