1.本发明涉及分子生物学和细胞生物学。本文所提供的包括用于重组蛋白产生的可选择标志物和相关使用方法。
背景技术：
0、2.背景技术
1、可选择标志物在重组蛋白产生中是常用的。当产生表达重组蛋白的克隆时，通常用编码目的蛋白和可选择标志物两者的dna载体转染宿主细胞。可选择标志物允许选择具有表达载体的细胞克隆以及高产克隆。谷氨酰胺合成酶(gs)已在真核细胞，如中国仓鼠卵巢(cho)细胞中的重组蛋白产生中广泛用作可选择标志物。目前在gs系统中所使用的几乎所有的可选择标志物是中国仓鼠(cricetulus griseus)-来源的gs，其具有相对低的选择效率和产率。更有效果和效率的生产方法是支持创新生物制品和生物类似物发展所必需的，其需要具有所期望的质量属性的高产细胞系。因此，对于在细胞系产生过程中，特别是在高产克隆细胞系的选择步骤中具有改善的效果与效率的表达系统的需求仍未满足且是急迫的。本文所提供的载体、细胞、表达系统解决了这种需求并且提供了相关优势。
2、3.
技术实现要素：
3、本文提供了编码谷氨酰胺合成酶(gs)的核苷酸序列作为可选择标志物的用途，其中gs是鸭嘴兽gs、龟gs、大鼠gs、负鼠gs、袋熊gs或者斑胸草雀gs。
4、在本文所提供的用途的一些实施方式中，gs是来源于鸭嘴兽科(ornithorhynchidae)的鸭嘴兽gs。在一些实施方式中，gs具有与seq idno：1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型鸭嘴兽gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq idno：1所示的氨基酸序列。
5、在本文所提供的用途的一些实施方式中，gs是来源于龟科(testudinidae)的龟gs。在一些实施方式中，gs具有与seq id no：2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型龟gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq id no：2所示的氨基酸序列。
6、在本文所提供的用途的一些实施方式中，gs是来源于鼠科真鼠分支(eumuroida)的大鼠gs。在一些实施方式中，gs具有与seq id no：3具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型大鼠gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq id no：3所示的氨基酸序列。
7、在本文所提供的用途的一些实施方式中，gs是来源于负鼠科(didelphidae)的负鼠gs。在一些实施方式中，gs具有与seq id no：13具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型负鼠gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq id no：13所示的氨基酸序列。
8、在本文所提供的用途的一些实施方式中，gs是来源于袋熊科(vombatidae)的袋熊gs。在一些实施方式中，gs具有与seq id no：14具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型袋熊gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq id no：14所示的氨基酸序列。
9、在本文所提供的用途的一些实施方式中，gs是来源于蜡嘴雀科(estrildidae)的斑胸草雀gs。在一些实施方式中，gs是斑胸草雀gs，其具有与seq id no：15具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型斑胸草雀gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq id no：15所示的氨基酸序列。
10、在本文所提供的用途的一些实施方式中，本文所提供的gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：a2、n10、g12、q15、m16、m18、s19、e24、v26、q27、a28、v33、g37、g39、c49、e50、c53、v54、e55、e56、f68、s72、s80、v82、m84、k91、e92、v97、f98、q106、k107、p108、t111、t116、k118、s125、n126、q127、h128、l140、d152、l160、r172、m176、v188、t191、y194、v197、k198、h199、a200、i206、r213、v220、a221、k230、v234、i235、a236、t237、s240、p244、t258、t260、n265、k268、h269、k271、e275、k276、r282、a297、h304、k305、n308、n310、d311、d318、s320、t328、q331、e332、a339、c341、f349、t352、i355、v356、n362、t364、d366、q367和q370。在一些实施方式中，本文所提供的gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seqid no：4：n10、g12、s19、v33、c49、c53、v54、e55、e56、f68、s72、s80、v82、m84、k91、e92、f98、q106、h128、l140、d152、l160、r172、m176、t191、y194、k198、h199、r213、v220、k230、a236、t237、s240、t260、k271、k276、r282、h304、k305、d311、d318、s320、t328、a339、c341、f349、i355、v356、q367和q370。
11、在本文所提供的用途的一些实施方式中，本文所提供的gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：s19、s72、s80、e92、q106、d152、l160、r172、m176、y194、k198、h199、k230、s240、t260、k271、r282、k305、d318、a339、c341和q367。在一些实施方式中，gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有至少3、至少5、至少10、至少15或至少20个氨基酸替换的seq id no：4：s19、s72、s80、e92、q106、d152、l160、r172、m176、y194、k198、h199、k230、s240、t260、k271、r282、k305、d318、a339、c341和q367。
12、本文还提供了编码gs的核苷酸序列作为可选择标志物的用途，其中gs包含来自鸭嘴兽gs、龟gs、大鼠gs、负鼠gs、袋熊gs或者斑胸草雀gs的催化结构域。
13、在一些实施方式中，gs包含来自鸭嘴兽gs的催化结构域，其具有与seq id no：1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：1的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
14、在一些实施方式中，gs包含来自龟gs的催化结构域，其具有与seq id no：2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：2的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
15、在一些实施方式中，gs包含来自大鼠gs的催化结构域，其具有与seq id no：3具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：3的氨基酸113-373具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
16、在一些实施方式中，gs包含来自负鼠gs的催化结构域，所述催化结构域具有与seqid no：13具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：13的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
17、在一些实施方式中，gs包含来自袋熊gs的催化结构域，其具有与seq id no：14具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：14的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
18、在一些实施方式中，gs包含来自斑胸草雀gs的催化结构域，所述催化结构域具有与seq id no：15具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：15的氨基酸163-412具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
19、在一些实施方式中，本文所提供的gs具有选自下列的氨基酸序列：seq id no：19、21、23、25、27、29和31-60。
20、在本文所提供的用途的一些实施方式中，将编码gs的核苷酸序列可操作地连接至mrna去稳定元件。在一些实施方式中，gs包含降解决定子。在一些实施方式中，降解决定子具有选自下列的氨基酸序列：seq idno：61-63。在一些实施方式中，本文所提供的gs具有选自下列的氨基酸序列：seq id no：64-84。
21、在一些实施方式中，本文所提供的用途用于鉴别具有高转录活性的基因组基因座。在一些实施方式中，本文所提供的用途用于鉴别能够产生目的蛋白(poi)的宿主细胞。在一些实施方式中，本文所提供的用途用于poi的重组产生。在一些实施方式中，本文所提供的用途用于哺乳动物细胞中重组蛋白的产生。在一些实施方式中，所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。在一些实施方式中，poi选自抗体、酶、可溶性蛋白、分泌蛋白、膜蛋白和融合蛋白。
22、本文还提供了适合于重组蛋白产生或基因组整合的脱氧核糖核酸(dna)载体，其包含编码gs的核苷酸序列(gs-编码序列)，其中所述gs是鸭嘴兽gs、龟gs、大鼠gs、负鼠gs、袋熊gs或斑胸草雀gs。
23、在本文所提供的载体的一些实施方式中，编码的gs是来源于鸭嘴兽科(ornithorhynchidae)的鸭嘴兽gs。在一些实施方式中，gs具有与seq id no：1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型鸭嘴兽gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq idno：1所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，gs编码序列与seq id no：5具有至少80％的同一性。
24、在本文所提供的载体的一些实施方式中，编码的gs是来源于龟科(testudinidae)的龟gs。在一些实施方式中，gs具有与seq id no：2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型龟gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq id no：2所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，gs编码序列与seq id no：6具有至少80％的同一性。
25、在本文所提供的载体的一些实施方式中，编码的gs是来源于鼠科真鼠分支(eumuroida)的大鼠gs。在一些实施方式中，gs具有与seq idno：3具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型大鼠gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq id no：3所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，gs编码序列与seq id no：7具有至少80％的同一性。
26、在本文所提供的载体的一些实施方式中，编码的gs是来源于负鼠科(didelphidae)的负鼠gs。在一些实施方式中，gs具有与seq id no：13具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型负鼠gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq id no：13所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，gs编码序列与seq id no：16具有至少80％的同一性。
27、在本文所提供的载体的一些实施方式中，编码的gs是来源于袋熊科(vombatidae)的袋熊gs。在一些实施方式中，gs具有与seq id no：14具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型袋熊gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq id no：14所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，gs编码序列与seq id no：17具有至少80％的同一性。
28、在本文所提供的载体的一些实施方式中，编码的gs是来源于蜡嘴雀科(estrildidae)的斑胸草雀gs。在一些实施方式中，gs具有与seq idno：15具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，与野生型斑胸草雀gs相比，gs具有降低的活性。在一些实施方式中，gs具有seq id no：15所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，gs编码序列与seq id no：18具有至少80％的同一性。
29、在本文所提供的载体的一些实施方式中，所编码的gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：a2、n10、g12、q15、m16、m18、s19、e24、v26、q27、a28、v33、g37、g39、c49、e50、c53、v54、e55、e56、f68、s72、s80、v82、m84、k91、e92、v97、f98、q106、k107、p108、t111、t116、k118、s125、n126、q127、h128、l140、d152、l160、r172、m176、v188、t191、y194、v197、k198、h199、a200、i206、r213、v220、a221、k230、v234、i235、a236、t237、s240、p244、t258、t260、n265、k268、h269、k271、e275、k276、r282、a297、h304、k305、n308、n310、d311、d318、s320、t328、q331、e332、a339、c341、f349、t352、i355、v356、n362、t364、d366、q367和q370。在一些实施方式中，gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：n10、g12、s19、v33、c49、c53、v54、e55、e56、f68、s72、s80、v82、m84、k91、e92、f98、q106、h128、l140、d152、l160、r172、m176、t191、y194、k198、h199、r213、v220、k230、a236、t237、s240、t260、k271、k276、r282、h304、k305、d311、d318、s320、t328、a339、c341、f349、i355、v356、q367和q370。
30、在本文所提供的载体的一些实施方式中，所编码的gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：s19、s72、s80、e92、q106、d152、l160、r172、m176、y194、k198、h199、k230、s240、t260、k271、r282、k305、d318、a339、c341和q367。在一些实施方式中，gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有至少3、至少5、至少10、至少15或至少20个氨基酸替换的seq id no：4：s19、s72、s80、e92、q106、d152、l160、r172、m176、y194、k198、h199、k230、s240、t260、k271、r282、k305、d318、a339、c341和q367。
31、本文还提供了适合于重组蛋白产生或基因组整合的dna载体，其包含编码gs的核苷酸序列(gs-编码序列)，其中所述gs包含来自鸭嘴兽gs、龟gs、大鼠gs、负鼠gs、袋熊gs或斑胸草雀gs的催化结构域。
32、在一些实施方式中，gs包含来自鸭嘴兽gs的催化结构域，其具有与seq id no：1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：1的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
33、在一些实施方式中，gs包含来自龟gs的催化结构域，其具有与seq id no：2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：2的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
34、在一些实施方式中，gs包含来自大鼠gs的催化结构域，其具有与seq id no：3具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：3的氨基酸113-373具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
35、在一些实施方式中，gs包含来自负鼠gs的催化结构域，所述催化结构域具有与seqid no：13具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：13的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
36、在一些实施方式中，gs包含来自袋熊gs的催化结构域，其具有与seq id no：14具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：14的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
37、在一些实施方式中，gs包含来自斑胸草雀gs的催化结构域，所述催化结构域具有与seq id no：15具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，催化结构域具有与seq id no：15的氨基酸163-412具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
38、在一些实施方式中，本文所提供的dna载体包含编码具有选自seq id no：19、21、23、25、27、29和31-60的氨基酸序列的gs的核苷酸序列。
39、在本文所提供的载体的一些实施方式中，将gs-编码序列可操作地连接至mrna去稳定元件。在本文所提供的载体的一些实施方式中，编码的gs包含降解决定子。在一些实施方式中，降解决定子具有选自下列的氨基酸序列：seq id no：61-63。在一些实施方式中，gs具有选自seq idno：64-84的氨基酸序列。
40、在本文所提供的载体的一些实施方式中，将gs-编码序列可操作地连接至猿猴空泡病毒40(sv40)启动子。在本文所提供的载体的一些实施方式中，将gs-编码序列可操作地连接至多聚(a)尾。
41、在一些实施方式中，本文所提供的载体适合于重组蛋白产生并且还包含表达盒。在一些实施方式中，本文所提供的载体包含两个或更多个表达盒。在一些实施方式中，所述表达盒包含编码poi的核苷酸序列(poi-编码序列)。在一些实施方式中，poi选自抗体、酶、可溶性蛋白、分泌蛋白、膜蛋白或融合蛋白。在一些实施方式中，poi是选自下列的抗体：igg1抗体、igg2抗体、igg3抗体、igg4抗体、iga抗体、igm抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv、scfv、(scfv)2、单域抗体(sdab)、单链抗体(scab)和重链抗体(hcab)。在一些实施方式中，poi是选自下列的抗体：单克隆抗体、双重特异性抗体、多重特异性抗体、二价抗体和多价抗体。在一些实施方式中，poi由相同多肽的一个或多个拷贝组成。在一些实施方式中，poi包含两种不同的多肽。在一些实施方式中，poi是包含轻链和重链的抗体，其分别由载体上分开的核苷酸序列编码。
42、在一些实施方式中，本文所提供的载体适合于基因组整合。
43、在一些实施方式中，本文提供了本文所提供的载体用于鉴别能够产生poi的宿主细胞的用途。
44、在一些实施方式中，本文提供了本文所提供的载体用于鉴别具有高转录活性的基因组基因座的用途。
45、在一些实施方式中，本文提供了用于鉴别能够产生poi的宿主细胞的方法，其包括将本文所描述的载体引入宿主细胞群体，在无谷氨酰胺的培养基中培养所述宿主细胞群体，其中能够在所述培养基中生长的宿主细胞被鉴别为能够产生poi的宿主细胞。
46、在一些实施方式中，本文提供了用于鉴别具有高转录活性的基因组基因座的方法，其包括将本文所描述的载体引入宿主细胞群体，在无谷氨酰胺的培养基中培养所述宿主细胞群体，其中能够在所述培养基中生长的宿主细胞被鉴别为具有在具有高转录活性的基因组基因座处插入的gs-编码序列的宿主细胞。在一些实施方式中，本文所提供的方法还包括对所鉴别的宿主细胞的基因组测序以定位具有高转录活性的基因组基因座。
47、在本文所提供的方法的一些实施方式中，在存在gs抑制剂的情况下培养所述宿主细胞群体。在一些实施方式中，gs抑制剂是蛋氨酸亚砜亚胺(methionine sulfoximine,msx)。
48、在一些实施方式中，本文提供了包含本文所公开的载体的宿主细胞。在一些实施方式中，所述宿主细胞具有野生型内源gs。在一些实施方式中，所述宿主细胞的内源gs具有降低的活性或者被敲除。在一些实施方式中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方式中，所述宿主细胞是cho细胞。
49、在一些实施方式中，本文提供了本文所公开的宿主细胞用于体外产生poi的用途。在一些实施方式中，本文提供了体外产生poi的方法，其包括在一定条件下培养本文所公开的宿主细胞并培养足够的时间以产生poi。
50、在一些实施方式中，本文提供了体外产生poi的方法，其包括在本文所描述的方法中鉴别的宿主细胞中用poi-编码序列替换gs-编码序列，并在一定条件下培养所述宿主细胞并培养足够的时间以产生poi。在一些实施方式中，所述方法还包括将poi与培养中的其它组分分离。在一些实施方式中，分离包括萃取、连续液-液萃取、渗透汽化、膜过滤、膜分离、反渗透、电渗析、蒸馏、结晶、离心、萃取过滤、离子交换色谱、吸附色谱或超滤。
51、在一些实施方式中，本文提供了用于体外产生poi的表达系统，其包含本文所公开的dna载体和宿主细胞。在一些实施方式中，所述宿主细胞是cho细胞。在一些实施方式中，本文所提供的表达系统还包括无谷氨酰胺的培养基。在一些实施方式中，本文所提供的表达系统还包括gs抑制剂。在一些实施方式中，本文所提供的表达系统还包括将所述载体引入宿主细胞的方式。在一些实施方式中，本文所提供的表达系统还包含在试剂盒中。
技术实现思路
1.编码谷氨酰胺合成酶(gs)的核苷酸序列作为可选择标志物的用途，其中所述gs是鸭嘴兽gs、龟gs、大鼠gs、负鼠gs、袋熊gs或斑胸草雀gs。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs是来源于鸭嘴兽科(ornithorhynchidae)的鸭嘴兽gs。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述gs具有与seq id no：1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求2或3所述的用途，其中与野生型鸭嘴兽gs相比，所述gs具有降低的活性。
5.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs具有seq id no：1所示的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs是来源于龟科(testudinidae)的龟gs。
7.根据权利要求1或6所述的用途，其中所述gs具有与seq id no：2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
8.根据权利要求6或7所述的用途，其中与野生型龟gs相比，所述gs具有降低的活性。
9.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs具有seq id no：2所示的氨基酸序列。
10.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs是来源于鼠科真鼠分支(eumuroida)的大鼠gs。
11.根据权利要求1或10所述的用途，其中所述gs具有与seq id no：3具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
12.根据权利要求10或11所述的用途，其中与野生型大鼠gs相比，所述gs具有降低的活性。
13.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs具有seq id no：3所示的氨基酸序列。
14.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs是来源于负鼠科(didelphidae)的负鼠gs。
15.根据权利要求1或14所述的用途，其中所述gs具有与seq id no：13具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
16.根据权利要求14或15所述的用途，其中与野生型负鼠gs相比，所述gs具有降低的活性。
17.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs具有seq id no：13所示的氨基酸序列。
18.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs是来源于袋熊科(vombatidae)的袋熊gs。
19.根据权利要求1或18所述的用途，其中所述gs具有与seq id no：14具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
20.根据权利要求18或19所述的用途，其中与野生型袋熊gs相比，所述gs具有降低的活性。
21.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs具有seq id no：14所示的氨基酸序列。
22.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs是来源于蜡嘴雀科(estrildidae)的斑胸草雀gs。
23.根据权利要求1或22所述的用途，其中所述gs是斑胸草雀gs，其具有与seq id no：15具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
24.根据权利要求22或23所述的用途，其中与野生型斑胸草雀gs相比，所述gs具有降低的活性。
25.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs具有seq id no：15所示的氨基酸序列。
26.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：a2、n10、g12、q15、m16、m18、s19、e24、v26、q27、a28、v33、g37、g39、c49、e50、c53、v54、e55、e56、f68、s72、s80、v82、m84、k91、e92、v97、f98、q106、k107、p108、t111、t116、k118、s125、n126、q127、h128、l140、d152、l160、r172、m176、v188、t191、y194、v197、k198、h199、a200、i206、r213、v220、a221、k230、v234、i235、a236、t237、s240、p244、t258、t260、n265、k268、h269、k271、e275、k276、r282、a297、h304、k305、n308、n310、d311、d318、s320、t328、q331、e332、a339、c341、f349、t352、i355、v356、n362、t364、d366、q367和q370。
27.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：n10、g12、s19、v33、c49、c53、v54、e55、e56、f68、s72、s80、v82、m84、k91、e92、f98、q106、h128、l140、d152、l160、r172、m176、t191、y194、k198、h199、r213、v220、k230、a236、t237、s240、t260、k271、k276、r282、h304、k305、d311、d318、s320、t328、a339、c341、f349、i355、v356、q367和q370。
28.根据权利要求1所述的用途，其中所述gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：s19、s72、s80、e92、q106、d152、l160、r172、m176、y194、k198、h199、k230、s240、t260、k271、r282、k305、d318、a339、c341和q367。
29.根据权利要求28所述的用途，其中所述gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有至少3、至少5、至少10、至少15或至少20个氨基酸替换的seq id no：4：s19、s72、s80、e92、q106、d152、l160、r172、m176、y194、k198、h199、k230、s240、t260、k271、r282、k305、d318、a339、c341和q367。
30.编码gs的核苷酸序列作为可选择标志物的用途，其中所述gs包含来自鸭嘴兽gs、龟gs、大鼠gs、负鼠gs、袋熊gs或斑胸草雀gs的催化结构域。
31.根据权利要求30所述的用途，其中所述gs包含来自鸭嘴兽gs的催化结构域，其具有与seq id no：1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
32.根据权利要求31所述的用途，其中所述催化结构域具有与seq id no：1的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
33.根据权利要求30所述的用途，其中所述gs包含来自龟gs的催化结构域，其具有与seq id no：2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
34.根据权利要求33所述的用途，其中所述催化结构域具有与seq id no：2的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
35.根据权利要求30所述的用途，其中所述gs包含来自大鼠gs的催化结构域，其具有与seq id no：3具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
36.根据权利要求35所述的用途，其中所述催化结构域具有与seq id no：3的氨基酸113-373具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
37.根据权利要求30所述的用途，其中所述gs包含来自负鼠gs的催化结构域，其具有与seq id no：13具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
38.根据权利要求37所述的用途，其中所述催化结构域具有与seq id no：13的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
39.根据权利要求30所述的用途，其中所述gs包含来自袋熊gs的催化结构域，其具有与seq id no：14具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
40.根据权利要求39所述的用途，其中所述催化结构域具有与seq id no：14的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
41.根据权利要求30所述的用途，其中所述gs包含来自斑胸草雀gs的催化结构域，其具有与seq id no：15具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
42.根据权利要求41所述的用途，其中所述催化结构域具有与seq id no：15的氨基酸163-412具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
43.根据权利要求30所述的用途，其中所述gs具有选自下列的氨基酸序列：seq id no：19、21、23、25、27、29和31-60。
44.根据权利要求1至43中任一项所述的用途，其中所述gs编码核苷酸序列可操作地连接至mrna去稳定元件。
45.根据权利要求1至43中任一项所述的用途，其中所述gs包含降解决定子。
46.根据权利要求45所述的用途，其中所述降解决定子具有选自seq id no：61-63的氨基酸序列。
47.根据权利要求46所述的用途，其中所述gs具有选自seq id no：64-84的氨基酸序列。
48.根据权利要求1至47中任一项所述的用途，其用于鉴别具有高转录活性的基因组基因座。
49.根据权利要求1至47中任一项所述的用途，其用于鉴别能够产生目的蛋白(poi)的宿主细胞。
50.根据权利要求1至47中任一项所述的用途，其用于poi的重组生产。
51.根据权利要求50所述的用途，其用于哺乳动物细胞中的重组蛋白质生产。
52.根据权利要求51所述的用途，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。
53.根据权利要求49至52中任一项所述的用途，其中所述poi选自抗体、酶、可溶性蛋白、分泌蛋白、膜蛋白和融合蛋白。
54.适合于重组蛋白生产或基因组整合的脱氧核糖核酸(dna)载体，其包含编码gs的核苷酸序列(gs-编码序列)，其中所述gs是鸭嘴兽gs、龟gs、大鼠gs、负鼠gs、袋熊gs或者斑胸草雀gs。
55.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs是来源于鸭嘴兽科(ornithorhynchidae)的鸭嘴兽gs。
56.根据权利要求54或55所述的载体，其中所述gs具有与seq id no：1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
57.根据权利要求55或56所述的载体，其中与野生型鸭嘴兽gs相比，所述gs具有降低的活性。
58.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs具有seq id no：1所示的氨基酸序列。
59.根据权利要求55至58中任一项所述的载体，其中所述gs-编码序列与seq id no：5具有至少80％的同一性。
60.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs是来源于龟科(testudinidae)的龟gs。
61.根据权利要求54或60所述的载体，其中所述gs具有与seq id no：2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
62.根据权利要求60或61所述的载体，其中与野生型龟gs相比，所述gs具有降低的活性。
63.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs具有seq id no：2所示的氨基酸序列。
64.根据权利要求60至63中任一项所述的载体，其中所述gs-编码序列与seq id no：6具有至少80％的同一性。
65.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs是来源于鼠科真鼠分支(eumuroida)的大鼠gs。
66.根据权利要求54或65所述的载体，其中所述gs具有与seq id no：3具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
67.根据权利要求65或66所述的载体，其中与野生型大鼠gs相比，所述gs具有降低的活性。
68.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs具有seq id no：3所示的氨基酸序列。
69.根据权利要求65至68中任一项所述的载体，其中所述gs-编码序列与seq id no：7具有至少80％的同一性。
70.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs是来源于负鼠科(didelphidae)的负鼠gs。
71.根据权利要求54或70所述的载体，其中所述gs具有与seq id no：13具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
72.根据权利要求70或71所述的载体，其中与野生型负鼠gs相比，所述gs具有降低的活性。
73.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs具有seq id no：13所示的氨基酸序列。
74.根据权利要求70至73中任一项所述的载体，其中所述gs-编码序列与seq id no：16具有至少80％的同一性。
75.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs是来源于袋熊科(vombatidae)的袋熊gs。
76.根据权利要求54或75所述的载体，其中所述gs具有与seq id no：14具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
77.根据权利要求75或76所述的载体，其中与野生型袋熊gs相比，所述gs具有降低的活性。
78.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs具有seq id no：14所示的氨基酸序列。
79.根据权利要求75至78中任一项所述的载体，其中所述gs-编码序列与seq id no：17具有至少80％的同一性。
80.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs是来源于蜡嘴雀科(estrildidae)的斑胸草雀gs。
81.根据权利要求54或80所述的载体，其中所述gs具有与seq id no：15具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
82.根据权利要求80或81所述的载体，其中与野生型斑胸草雀gs相比，所述gs具有降低的活性。
83.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs具有seq id no：15所示的氨基酸序列。
84.根据权利要求80至83中任一项所述的载体，其中所述gs-编码序列与seq id no：18具有至少80％的同一性。
85.根据权利要求54所述的载体，其中所述gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：a2、n10、g12、q15、m16、m18、s19、e24、v26、q27、a28、v33、g37、g39、c49、e50、c53、v54、e55、e56、f68、s72、s80、v82、m84、k91、e92、v97、f98、q106、k107、p108、t111、t116、k118、s125、n126、q127、h128、l140、d152、l160、r172、m176、v188、t191、y194、v197、k198、h199、a200、i206、r213、v220、a221、k230、v234、i235、a236、t237、s240、p244、t258、t260、n265、k268、h269、k271、e275、k276、r282、a297、h304、k305、n308、n310、d311、d318、s320、t328、q331、e332、a339、c341、f349、t352、i355、v356、n362、t364、d366、q367和q370。
86.根据权利要求85所述的载体，其中所述gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：n10、g12、s19、v33、c49、c53、v54、e55、e56、f68、s72、s80、v82、m84、k91、e92、f98、q106、h128、l140、d152、l160、r172、m176、t191、y194、k198、h199、r213、v220、k230、a236、t237、s240、t260、k271、k276、r282、h304、k305、d311、d318、s320、t328、a339、c341、f349、i355、v356、q367和q370。
87.根据权利要求85所述的载体，其中所述gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有氨基酸替换的seq id no：4：s19、s72、s80、e92、q106、d152、l160、r172、m176、y194、k198、h199、k230、s240、t260、k271、r282、k305、d318、a339、c341和q367。
88.根据权利要求87所述的载体，其中所述gs的氨基酸序列包含在选自下列的位置具有至少3、至少5、至少10、至少15或至少20个氨基酸替换的seq id no：4：s19、s72、s80、e92、q106、d152、l160、r172、m176、y194、k198、h199、k230、s240、t260、k271、r282、k305、d318、a339、c341和q367。
89.适合于重组蛋白生产或基因组整合的dna载体，其包含编码gs的核苷酸序列(gs-编码序列)，其中所述gs包含来自鸭嘴兽gs、龟gs、大鼠gs、负鼠gs、袋熊gs或斑胸草雀gs的催化结构域。
90.根据权利要求89所述的载体，其中所述gs包含来自鸭嘴兽gs的催化结构域，其具有与seq id no：1具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
91.根据权利要求90所述的载体，其中所述催化结构域具有与seq id no：1的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
92.根据权利要求89所述的载体，其中所述gs包含来自龟gs的催化结构域，其具有与seq id no：2具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
93.根据权利要求92所述的载体，其中所述催化结构域具有与seq idno：2的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
94.根据权利要求89所述的载体，其中所述gs包含来自大鼠gs的催化结构域，其具有与seq id no：3具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
95.根据权利要求94所述的载体，其中所述催化结构域具有与seq id no：3的氨基酸113-373具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
96.根据权利要求89所述的载体，其中所述gs包含来自负鼠gs的催化结构域，其具有与seq id no：13具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
97.根据权利要求96所述的载体，其中所述催化结构域具有与seq id no：13的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
98.根据权利要求89所述的载体，其中所述gs包含来自袋熊gs的催化结构域，其具有与seq id no：14具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
99.根据权利要求98所述的载体，其中所述催化结构域具有与seq id no：14的氨基酸110-359具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
100.根据权利要求89所述的载体，其中所述gs包含来自斑胸草雀gs的催化结构域，其具有与seq id no：15具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
101.根据权利要求100所述的载体，其中所述催化结构域具有与seq id no：15的氨基酸163-412具有至少90％、至少92％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的同一性的氨基酸序列。
102.根据权利要求89所述的载体，其中所述gs具有选自下列的氨基酸序列：seq idno：19、21、23、25、27、29和31-60。
103.根据权利要求54至102中任一项所述的载体，其中所述gs-编码序列可操作地连接至mrna去稳定元件。
104.根据权利要求54至102中任一项所述的载体，其中所述gs包含降解决定子。
105.根据权利要求104所述的载体，其中所述降解决定子具有选自seq id no：61-63的氨基酸序列。
106.根据权利要求105所述的载体，其中所述gs具有选自seq id no：64-84的氨基酸序列。
107.根据权利要求54至106中任一项所述的载体，其中所述载体适合于重组蛋白生产并且还包含表达盒。
108.根据权利要求107所述的载体，其中所述gs-编码序列可操作地连接至猿猴空泡病毒40(sv40)启动子。
109.根据权利要求107或108所述的载体，其中所述gs-编码序列可操作地连接至多聚(a)尾。
110.根据权利要求107至109中任一项所述的载体，其包含两个或更多个表达盒。
111.根据权利要求107至110中任一项所述的载体，其中所述表达盒包含编码poi的核苷酸序列(poi编码序列)。
112.根据权利要求111所述的载体，其中所述poi是抗体、酶、可溶性蛋白、分泌蛋白、膜蛋白或融合蛋白。
113.根据权利要求112所述的载体，其中所述poi是选自igg1抗体、igg2抗体、igg3抗体、igg4抗体、iga抗体、igm抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv、scfv、(scfv)2、单域抗体(sdab)、单链抗体(scab)和重链抗体(hcab)的抗体。
114.根据权利要求112所述的载体，其中所述poi是选自下列的抗体：单克隆抗体、双重特异性抗体、多重特异性抗体、二价抗体和多价抗体。
115.根据权利要求111至114中任一项所述的载体，其中所述poi由相同多肽的一个或多个拷贝组成。
116.根据权利要求111至114中任一项所述的载体，其中所述poi包含两种不同的多肽。
117.根据权利要求116中任一项所述的载体，其中所述poi是包含轻链和重链的抗体，其分别由所述载体上分开的核苷酸序列编码。
118.根据权利要求54至106中任一项所述的载体，其中所述载体适合于基因组整合。
119.根据权利要求111至117中任一项所述的载体用于鉴别能够产生poi的宿主细胞的用途。
120.根据权利要求118所述的载体用于鉴别具有高转录活性的基因组基因座的用途。
121.用于鉴别能够产生poi的宿主细胞的方法，其包括将根据权利要求111至117中任一项所述的载体引入宿主细胞群体，在无谷氨酰胺的培养基中培养所述宿主细胞群体，其中将能够在所述培养基中生长的宿主细胞鉴别为能够产生poi的宿主细胞。
122.用于鉴别具有高转录活性的基因组基因座的方法，其包括将根据权利要求118所述的载体引入宿主细胞群体，在无谷氨酰胺的培养基中培养宿主细胞群体，其中将能够在所述培养基中生长的宿主细胞鉴别为具有在具有高转录活性的基因组基因座处插入的gs-编码序列的宿主细胞。
123.根据权利要求122所述的方法，还包括对所鉴别的宿主细胞的基因组测序以定位具有高转录活性的基因组基因座。
124.根据权利要求121至123中任一项所述的方法，其中在存在gs抑制剂的情况下培养所述宿主细胞群体。
125.根据权利要求124所述的方法，其中所述gs抑制剂是蛋氨酸亚砜亚胺(msx)。
126.宿主细胞，其包含根据权利要求111至117中任一项所述的载体。
127.根据权利要求126所述的宿主细胞，其具有野生型内源gs。
128.根据权利要求126所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞的内源gs具有降低的活性或者被敲除。
129.根据权利要求126至128中任一项所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是哺乳动物细胞。
130.根据权利要求129所述的宿主细胞，其为cho细胞。
131.根据权利要求126至130中任一项所述的宿主细胞用于poi的体外生产的用途。
132.体外生产poi的方法，其包括在一定条件下培养根据权利要求126至130中任一项所述的宿主细胞并培养足够的时间以产生所述poi。
133.体外生产poi的方法，其包括在根据权利要求122所述的方法中鉴别的宿主细胞中用poi-编码序列替换所述gs-编码序列，并在一定条件下培养所述宿主细胞并培养足够的时间以产生所述poi。
134.根据权利要求132或133所述的方法，还包括将所述poi与培养中的其它组分分离。
135.根据权利要求134所述的方法，其中所述分离包括萃取、连续液-液萃取、渗透汽化、膜过滤、膜分离、反渗透、电渗析、蒸馏、结晶、离心、萃取过滤、离子交换色谱、吸附色谱或超滤。
136.用于体外生产poi的表达系统，其包含根据权利要求54至118中任一项所述的dna载体和宿主细胞。
137.根据权利要求136所述的表达系统，其中所述宿主细胞是cho细胞。
138.根据权利要求136或137所述的表达系统，还包括无谷氨酰胺的培养基。
139.根据权利要求136至138中任一项所述的表达系统，还包含gs抑制剂。
140.根据权利要求136至139中任一项所述的表达系统，还包括将所述载体引入所述宿主细胞的方式。
141.根据权利要求136至140中任一项所述的表达系统，其包含在试剂盒中。
