本公开涉及可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)及其制备和使用方法。
背景技术：
1、肿瘤抗原特异性t细胞的产生和激活参与免疫介导的发育控制和肿瘤消退的介导。这需要多个t细胞共刺激受体和t细胞负调控因子或共抑制受体协同作用，以控制t细胞激活、增殖以及效应功能的获得或丧失。然而，由于肿瘤细胞的多种免疫逃逸机制，所以肿瘤特异性t细胞反应在癌症患者中难以建立和维持。然而，人们已经尝试利用t细胞进行癌症治疗。此类方法包括使用t细胞接合双特异性抗体，所述抗体结合癌细胞上的表面靶抗原并且还结合t细胞上的t细胞表面多肽(如cd3)。一般来说，通过结合每个靶标，t细胞接合双特异性抗体(bispecifics)使t细胞与癌细胞紧密物理接近，并允许细胞毒性t细胞蛋白和酶攻击肿瘤细胞并引起细胞凋亡，从而杀死癌细胞。
2、虽然这是一类潜在有希望的用于治疗癌症的治疗剂，但仍有一些障碍需要克服，诸如中靶脱肿瘤(on-target off-tumor)毒性以及制造挑战。因此，需要具有改进的安全性特征以及改进的可制造性的免疫治疗选择。
技术实现思路
1、本文提供了一种可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)，其包含：(a)第一多肽，所述第一多肽包含(i)单链可变片段(scfv)，所述单链可变片段包含第一重链可变结构域(vh1)和第一轻链可变结构域(vl1)，其中所述vh1和所述vl1一起形成特异性结合第一靶标的第一靶向结构域，(ii)第一掩蔽部分(mm1)，(iii)第一可裂解部分(cm1)，(iv)第二重链可变结构域(vh2)，和(v)第一单体fc结构域(fc1)；(b)第二多肽，所述第二多肽包含(i)第二轻链可变结构域(vl2)，其中所述vh2和所述vl2一起形成特异性结合第二靶标的第二靶向结构域，(ii)第二掩蔽部分(mm2)，和(iii)第二可裂解部分(cm2)；以及(c)第三多肽，所述第三多肽(i)包含第二单体fc结构域(fc2)，并且(ii)不包含免疫球蛋白可变结构域。在一些方面，第一靶标是t细胞抗原多肽，并且第二靶标是癌细胞表面抗原。在一些方面，第一靶标是癌细胞表面抗原，并且第二靶标是t细胞抗原多肽。在一些方面，t细胞抗原多肽是cd3的ε链。
2、在一些方面，第一多肽还包含在抗原靶向结构域vh2与单体fc结构域之间的重链ch1结构域。
3、在一些方面，第一多肽还包含在ch1结构域与第一单体fc结构域之间的免疫球蛋白铰链区(hr1)。
4、在一些方面，第一多肽从氨基末端至羧基末端包含以下结构排列：mm1-cm1-scfv-vh2-ch1-hr1-fc1，其中每个“-”独立地为直接或间接键联。
5、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，第二多肽还包含轻链恒定结构域cl1。在一些方面，第二多肽从氨基末端至羧基末端包含以下结构排列：mm2-cm2-vl2-cl1，其中每个“-”独立地为直接或间接键联。
6、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，第三多肽还包含免疫球蛋白铰链区(hr2)。在一些方面，第三多肽从氨基末端至羧基末端包含以下结构排列：hr2-fc2，其中“-”为直接或间接键联。
7、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，第一多肽hr1和第二多肽hr2包含相同的氨基酸序列。在一些方面，第一多肽hr1和第二多肽hr2包含不同的氨基酸序列。
8、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，第一多肽、第二多肽和/或第三多肽包含一个或多个接头。
9、在一些方面，可激活hbpc包含在以下位置中的一个或多个中的接头：(a)在mml与cml之间；(b)在mm2与cm2之间；(b)在scfv的重可变结构域与轻可变结构域之间；(c)在重链可变结构域与ch1结构域之间；(d)在ch1结构域与铰链区之间；(e)在铰链区与fc结构域之间；(g)在cm2与轻链可变结构域之间；(h)在轻链可变结构域与cl之间；(i)在ch1结构域与第二fc结构域之间；(j)在ch1结构域与铰链区之间；和/或(k)在铰链区与第二fc结构域之间。在一些方面，接头包含约1至约20个氨基酸。
10、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，mm1经由接头l1连接至cm1。在一些方面，mm2经由接头l2连接至cm2。在一些方面，可激活双特异性多肽复合物包含l1和l2两者。在一些方面，mm2经由接头l3连接至cm2，并且cm2经由接头l4连接至scfv。在一些方面，
11、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，l1、l2、l3和/或l4的氨基酸序列相同。在一些方面，l1、l2、l3和/或l4中的至少一个的氨基酸序列不同。
12、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，cm1的氨基酸序列和cm2的氨基酸序列相同。在一些方面，cm1的氨基酸序列和cm2的氨基酸序列不同。
13、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，cm1和cm2各自包含存在于肿瘤微环境中的蛋白酶的底物。在一些方面，cm1和cm2各自独立地包含相同蛋白酶的底物。在一些实施方案中，cm1和cm2包含不同蛋白酶的底物。在一些方面，cm1和cm2各自独立地包含选自表3中所示的蛋白酶的组的蛋白酶的底物。在一些方面，cm1和cm2中的至少一个包含选自由以下组成的组的蛋白酶的底物：丝氨酸蛋白酶和基质金属肽酶(mmp)。在一些方面，cm1和/或cm2包含seq id no:2、seq id no:14、seq id no:73-111或seq id no:156-159的氨基酸序列。
14、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，mm1和/或mm2包含约5个氨基酸至约40个氨基酸。
15、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，每个接头独立地选自由以下组成的组：(i)选自由以下组成的组的基于甘氨酸-丝氨酸的接头：(gs)n，其中n是至少1的整数并且在一些方面，其中n是介于1与10之间的整数，(ggs)n，其中n是至少1的整数并且在一些方面，其中n是介于1与10之间的整数，(gggs)n(seq id no:40)，其中n是至少1的整数并且在一些方面，其中n是介于1与10之间的整数，(ggggs)n(seq id no:126)，其中n是至少1的整数，(gsggs)n(seq id no:41)，其中n是至少1的整数并且在一些方面，其中n是介于1与10之间的整数，gssggsggsg(seq id no:12)，ggsg(seq id no:42)，ggsgg(seq id no:43)，gsgsg(seq id no:44)，gsggg(seq id no:45)，gggsg(seq id no:46)和gsssg(seq id no:47)，ggggsggggsggggsgs(seq id no:48)，ggggsgs(seq id no:49)，ggggsggggsggggs(seq idno:50)，ggggsggggsggggsggggs(seq id no:51)，ggggs(seq id no:52)，ggggsggggs(seqid no:53)，gggs(seq id no:54)，gggsgggs(seq id no:55)，gggsgggsgggs(seq id no:56)，gssggsggsgg(seq id no:57)，gggsggggsggggsgggg sggggs(seq id no:58)，gggssggs(seq id no:127)和gs；以及(ii)包含甘氨酸和丝氨酸以及赖氨酸、苏氨酸或脯氨酸中的至少一者的接头，诸如例如选自由以下组成的组的接头：gstsgsgkpgssegst(seq idno:59)、skygppcppcpapeflg(seq id no:60)、ggsldpkggggs(seq id no:61)、pkscdkthtcppcpapellg(seq id no:62)、gkssgsgsesks(seq id no:63)、gstsgsgkssegkg(seq idno:64)、gstsgsgkssegsgstkg(seq id no:65)和gstsgsgkpgsgegstkg(seq id no:66)。
16、在本文所述的可激活hbpc的一些方面，第一多肽包含具有seq id no:34的氨基酸序列的铰链(hr)(铰链1)。在本文所述的可激活hbpc的一些方面，第二多肽包含具有seq idno:35的氨基酸序列的铰链(hr)(铰链2)。
17、本文还提供了组合物，所述组合物包含本文所述的可激活hbpc和药学上可接受的载体。在一些方面，组合物包含水和可激活hbpc。在一些方面，组合物包含5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或至多99％的水。
18、本文还提供了药盒，所述药盒包含本文所述的药物组合物。
19、本文还公开了核酸，所述核酸包含编码本文所述的可激活hbpc的第一多肽、第二多肽和/或第三多肽的核苷酸序列。在一些方面，提供了核酸，所述核酸包含编码可激活hbpc的第一多肽的核苷酸序列。在一些方面，提供了核酸，所述核酸包含编码可激活hbpc的第二多肽的核苷酸序列。在一些方面，提供了核酸，所述核酸包含编码可激活hbpc的第三多肽的核苷酸序列。本文还提供了载体，所述载体包含本文所述的核酸。本文还提供了宿主细胞，所述宿主细胞包含本文所述的载体。
20、本文还提供了产生可激活双特异性多肽复合物的方法，所述方法包括：(a)在足以产生所述可激活hbpc的条件下在液体培养基中培养宿主细胞；和(b)回收所述可激活hbpc。
21、本文还提供了治疗受试者的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)或其药物组合物。在一些方面，受试者是人。在一些方面，疾病是癌症。
22、本文还提供了用于抑制有需要的受试者中的肿瘤生长的可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)及其药物组合物。
23、本文还提供了用于制造用于治疗癌症的药物的可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)及其药物组合物。
24、本文还提供了一种可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)，其包含：(a)第一多肽，所述第一多肽包含(i)单链可变片段(scfv)，其中所述scfv包含第一重链可变结构域(vh1)和第一轻链可变结构域(vl1)，其中vh1和vl1一起形成特异性结合t细胞抗原多肽的t细胞抗原靶向结构域，(ii)第一掩蔽部分(mm1)，和(iii)第一可裂解部分(cm1)；(iii)当与轻链可变结构域(vl2)配对时特异性结合癌细胞表面抗原的重链可变结构域(vh2)，(iv)第一单体fc结构域(fc1)，(v)重链ch1结构域，和(vi)在所述ch1结构域与所述fc1之间的免疫球蛋白铰链区；(b)第二多肽，所述第二多肽包含(i)当与vh2配对时特异性结合癌细胞表面抗原的轻链可变结构域(vl2)，(ii)第二掩蔽部分(mm2)，(iii)第二可裂解部分(cm2)和(iv)轻链恒定结构域cl1；以及(c)第三多肽，所述第三多肽包含第二单体fc结构域(fc2)和免疫球蛋白铰链区(hr2)，其中所述第三多肽不包含免疫球蛋白可变结构域，并且；其中所述第一多肽从氨基末端至羧基末端包含以下结构排列：mm1-cm1-scfv1-vh2-ch1-hr1-fc1，所述第二多肽从氨基末端至羧基末端包含以下结构排列：mm2-cm2-vl2-cl1，并且所述第三多肽从氨基末端至羧基末端具有以下结构排列：hr2-fc2，其中每个“-”独立地为直接或间接键联。
25、本文还提供了一种可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)，其包含：(a)第一多肽，所述第一多肽包含(i)特异性结合癌细胞表面抗原的单链可变片段(scfv)，(ii)第一掩蔽部分(mm1)，(iii)第一可裂解部分(cm1)；和(iv)当与第二多肽轻链可变结构域(vl2)配对时结合t细胞抗原多肽的重链可变结构域(vh2)，(v)第一单体fc结构域(fc1)，(vi)重链ch1结构域，和(vii)在所述ch1结构域与所述第一单体fc结构域之间的免疫球蛋白铰链区(hr1)；(b)第二多肽，所述第二多肽包含(i)当与所述第一多肽vh2配对时特异性结t细胞抗原多肽的轻链可变结构域(vl2)，(ii)第二掩蔽部分(mm2)，(iii)第二可裂解部分(cm2)和(iv)轻链恒定结构域cl1；以及(c)第三多肽，所述第三多肽包含第二单体fc结构域(fc2)和免疫球蛋白铰链区(hr2)；其中所述第一多肽从氨基末端至羧基末端包含以下结构排列：mm1-cm1-scfv1-vh2-ch1-hr1-fc1，所述第二多肽从氨基末端至羧基末端包含以下结构排列：mm2-cm2-vl2-cl1，并且所述第三多肽从氨基末端至羧基末端具有以下结构排列：hr2-fc2，其中每个“-”表示直接或间接键联，并且其中所述第三多肽不包含免疫球蛋白可变结构域。
26、本文还提供了一种可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)，其包含：(a)第一多肽，所述第一多肽包含(i)特异性结合癌细胞表面抗原的单链可变片段(scfv)，(ii)第一掩蔽部分(mm1)，和(iii)第一可裂解部分(cm1)；和重链可变结构域(vh2)，(iii)第一单体fc结构域(fc1)，重链ch1结构域，和在所述ch1结构域与所述第一单体fc结构域之间的免疫球蛋白铰链区；(b)第二多肽，所述第二多肽包含(i)当与所述第一多肽vh2配对时特异性结t细胞抗原多肽的轻链可变结构域(vl2)，(ii)第二掩蔽部分(mm2)，(iii)第二可裂解部分(cm2)和轻链恒定结构域cl1；以及(c)第三多肽，所述第三多肽包含第二单体fc结构域(fc2)和免疫球蛋白铰链区；其中所述第一多肽从氨基末端至羧基末端具有以下结构排列：mm1-cm1-scfv1-vh2-ch1-hr1-fc1；所述第二多肽从氨基末端至羧基末端具有以下结构排列：mm2-cm2-vl2-cl1，并且所述第三多肽从氨基末端至羧基末端具有以下结构排列：hr2-fc2，其中每个“-”独立地为直接或间接键联，并且其中所述第三多肽不包含免疫球蛋白可变结构域。
27、本文还提供了一种异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)，其包含：(a)第一多肽，所述第一多肽包含(i)单链可变片段(scfv)，所述单链可变片段包含第一重链可变结构域(vh1)和第一轻链可变结构域(vl1)，其中所述vh1和所述vl1一起形成特异性结合第一靶标的第一靶向结构域，(ii)第二重链可变结构域(vh2)，和(iii)第一单体fc结构域(fc1)；(b)第二多肽，所述第二多肽包含第二轻链可变结构域(vl2)，其中所述vh2和所述vl2一起形成特异性结合第二靶标的第二靶向结构域；以及(c)第三多肽，所述第三多肽包含第二单体fc结构域(fc2)并且不包含免疫球蛋白可变结构域。
1.一种可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)，其包含：
2.如权利要求1所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第一靶标是t细胞抗原多肽，并且所述第二靶标是癌细胞表面抗原。
3.如权利要求1所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第一靶标是癌细胞表面抗原，所述第二靶标是t细胞抗原多肽。
4.如权利要求1-3中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述t细胞抗原多肽是cd3的ε链。
5.如权利要求1-4中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第一多肽还包含在所述癌细胞表面抗原靶向结构域vh2与所述单体fc结构域之间的重链ch1结构域。
6.如权利要求1-5中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第一多肽还包含在所述ch1结构域与所述第一单体fc结构域之间的免疫球蛋白铰链区(hr1)。
7.如权利要求6所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第一多肽从氨基末端至羧基末端包含以下结构排列：
8.如权利要求1-7中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第二多肽还包含轻链恒定结构域cl1。
9.如权利要求8所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第二多肽从氨基末端至羧基末端包含以下结构排列：mm2-cm2-vl2-cl1。
10.如权利要求1-9中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第三多肽还包含免疫球蛋白铰链区(hr2)。
11.如权利要求1-10中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第三多肽从氨基末端至羧基末端包含以下结构排列：hr2-fc2。
12.如权利要求6或权利要求10所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第一多肽hr1和所述第二多肽hr2包含相同的氨基酸序列。
13.如权利要求6或权利要求10所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第一多肽hr1和所述第二多肽hr2包含不同的氨基酸序列。
14.如权利要求1-13中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第一多肽、所述第二多肽和/或所述第三多肽包含一个或多个接头。
15.如权利要求14所述的可激活双特异性多肽复合物，其包含在以下位置中的一个或多个中的接头：
16.如权利要求14或15所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述一个或多个接头包含约1至约20个氨基酸。
17.如权利要求1-16中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中mm1经由接头l1连接至cm1。
18.如权利要求1-16中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中mm2经由接头l2连接至cm2。
19.如权利要求17或18中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述可激活双特异性多肽复合物包含l1和l2两者。
20.如权利要求19所述的可激活双特异性多肽复合物，其中mm2经由接头l3连接至cm2，并且cm2经由接头l4连接至scfv。
21.如权利要求14-20中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中l1、l2、l3和/或l4的氨基酸序列相同。
22.如权利要求14-20中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中l1、l2、l3和/或l4中的至少一个的氨基酸序列不同。
23.如权利要求1-22中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中cm1的氨基酸序列和cm2的氨基酸序列相同。
24.如权利要求1-22中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中cm1的氨基酸序列和cm2的氨基酸序列不同。
25.如权利要求1-25中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中cm1和cm2各自包含存在于肿瘤微环境中的蛋白酶的底物。
26.如权利要求1-25中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中cm1和cm2各自独立地包含相同蛋白酶的底物。
27.如权利要求1-25中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中cm1和cm2包含不同蛋白酶的底物。
28.如权利要求23-27中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中cm1和cm2各自独立地包含选自表3中所示的蛋白酶的组的蛋白酶的底物。
29.如权利要求23-27中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中cm1和cm1中的至少一个包含选自由以下组成的组的蛋白酶的底物：丝氨酸蛋白酶和基质金属肽酶(mmp)。
30.如权利要求1-29中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中cm1和/或cm2包含seq id no:2、seq id no:14、seq id no:73-111或seq id no:156-159的氨基酸序列。
31.如权利要求1-30中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述mm1和/或所述mm2包含约5个氨基酸至约40个氨基酸。
32.如权利要求15-31中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中每个接头独立地选自由以下组成的组：
33.如权利要求1-32中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第一多肽包含具有seq id no:34的氨基酸序列的铰链(铰链1)。
34.如权利要求1-33中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物，其中所述第二多肽包含具有seq id no:35的氨基酸序列的铰链(铰链2)。
35.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1-34中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物和药学上可接受的载体。
36.一种组合物，所述组合物包含水和如权利要求1-34中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物。
37.如权利要求36所述的组合物，所述组合物包含5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或至多99％的水。
38.一种药盒，所述药盒包含如权利要求35所述的药物组合物或如权利要求36所述的组合物。
39.一种核酸，所述核酸包含编码如权利要求1-34中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物的所述第一多肽、所述第二多肽和/或所述第三多肽的核苷酸序列。
40.一种核酸，所述核酸包含编码如权利要求1-34中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物的所述第一多肽的核苷酸序列。
41.一种核酸，所述核酸包含编码如权利要求1-34中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物的所述第二多肽的核苷酸序列。
42.一种核酸，所述核酸包含编码如权利要求1-34中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物的所述第三多肽的核苷酸序列。
43.一种载体，所述载体包含如权利要求39-42中任一项所述的核酸。
44.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求43所述的载体。
45.一种产生可激活双特异性多肽复合物的方法，所述方法包括：
46.一种治疗受试者的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的如权利要求1-34中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物或如权利要求35或36所述的药物组合物。
47.如权利要求46所述的方法，其中所述受试者是人。
48.如权利要求46或47所述的方法，其中所述疾病是癌症。
49.如权利要求1-34中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物或如权利要求35所述的药物组合物或如权利要求36所述的组合物，其用于抑制有需要的受试者中的肿瘤生长。
50.根据权利要求1-34中任一项所述的可激活双特异性多肽复合物或如权利要求35所述的药物组合物或如权利要求36所述的组合物在制造用于治疗癌症的药物中的用途。
51.一种可激活双特异性多肽复合物，其包含：
52.一种可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)，其包含：
53.一种可激活异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)，其包含：
54.一种异源多聚体双特异性多肽复合物(hbpc)，其包含：
