本发明涉及一种穿虎祛痛颗粒质量检测方法，属于中药制剂分析领域。
背景技术：
1、穿虎祛痛制剂由穿山龙、忍冬藤、防风、威灵仙、虎杖、土茯苓、川芎、川牛膝、薏苡仁和甘草10味中药组成，用于痛风性关节炎的急性期。方中穿山龙、防风、威灵仙和川芎，舒筋活血、祛风止痛；虎杖、忍冬藤，清热解毒、祛风利湿、散瘀止痛；薏苡仁、土茯苓和川牛膝，利水渗湿、健脾和胃、祛湿除痹；甘草甘平，清热解毒，缓和药性，调和诸药；诸药配合，共奏祛风除湿、通络清热之功。目前应用于临床的剂型为合剂，现执行标准为“山东省食品药品监督管理局医疗机构制剂标准鲁zbz0112016”(简称“局颁标准”)。
2、穿虎祛痛合剂体积大，易变质，服用、携带、储藏都不方便。为了改善合剂剂型弊端，发明人针对性地开展了颗粒剂型的研究，开发出穿虎祛痛颗粒产品，既保留有合剂的药效作用，又便于携带、运输、贮存，兼具性质稳定，无须担心药物霉变。目前，只有山东省食品药品监督管理局提供局颁标准对穿虎祛痛合剂进行质量控制，针对穿虎祛痛颗粒没有任何机构或报道为其质量控制提供标准。为保证产品的质量和疗效，需要对穿虎祛痛颗粒的质量控制方法进行全面研究，并为其提供有效的质量检测方法。
3、本发明公开了一种穿虎祛痛颗粒质量检测方法，该检测方法采用tlc法对制剂中穿山龙、虎杖、忍冬藤和防风进行定性鉴别，同时采用hplc法对制剂中大黄素含量进行定量检测，可对穿虎祛痛颗粒的质量进行全面的评价和控制，从而保证临床用药的安全性与有效性。
技术实现思路
1、针对目前穿虎祛痛颗粒质量检测方法缺乏的情况，本发明的目的是提供一种穿虎祛痛颗粒质量检测方法。
2、在穿虎祛痛合剂质量标准(山东省食品药品监督管理局医疗机构制剂标准鲁zbz0112016)的基础上，结合穿虎祛痛颗粒的处方及制法工艺特点，利用tlc技术及hplc技术实现了对制剂中穿山龙、虎杖、忍冬藤和防风四味药材的定性鉴别，以及大黄素成分的定量检测，弥补了穿虎祛痛颗粒质量检测方法的空白，进而保证临床用药的安全性与有效性。
3、本发明的技术目的，是通过如下技术方案来实现的：
4、一种穿虎祛痛颗粒质量检测方法，其特征在于，该方法采用tlc法鉴别制剂中穿山龙、虎杖、忍冬藤和防风，同时采用hplc法测定制剂中大黄素的含量。
5、所述tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中穿山龙包括下列步骤：
6、取穿虎祛痛颗粒2g，研细，加甲醇25ml，超声处理30分钟，离心，取上清液蒸干，残渣加3mol/l盐酸溶液30ml使溶解，水浴加热水解60分钟，放冷，再加三氯甲烷30ml，加热回流30分钟，放冷，分取三氯甲烷液，用5％碳酸氢钠溶液洗涤2次，每次20ml，弃去碱液，三氯甲烷层蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取薯蓣皂苷元对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照tlc法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以沸点为60-90℃的石油醚：乙酸乙酯＝3:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
7、所述tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中虎杖包括下列步骤：
8、取穿虎祛痛颗粒1.6g，研细，加水10ml，超声使溶解，加2.5mol/l盐酸溶液5ml，水浴加热30分钟，放冷，用二氯甲烷振摇提取2次，每次15ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
9、另取虎杖对照药材0.1g，加水40ml煎煮30分钟，滤过，取滤液自“加2.5mol/l盐酸溶液5ml”起，同法制成对照药材溶液；再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
10、照tlc法试验，吸取上述供试品溶液和对照药材溶液各2μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以沸点为30-60℃石油醚：甲酸乙酯：甲酸＝15：5：1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色荧光斑点。
11、所述tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中忍冬藤包括下列步骤：
12、取穿虎祛痛颗粒2g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，过滤，取滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨试液10ml洗涤，再用正丁醇饱和的水10ml洗涤，正丁醇回收至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
13、另取马钱苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
14、照tlc法试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶g薄层板上，以乙酸乙酯：乙醇：甲酸＝10：2：0.2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
15、所述tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中防风包括下列步骤：
16、取穿虎祛痛颗粒5g，研细，加甲醇3ml使浸润，再加丙酮20ml，超声处理40分钟，离心，取上清液，蒸干，残渣加80％甲醇5ml使溶解，离心，取上清液2ml，上中性氧化铝柱，用二氯甲烷30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；
17、另取5-o-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照品溶液；
18、照tlc法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以三氯甲烷：甲醇＝8：3.5为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
19、本发明中，所述tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中穿山龙、虎杖、忍冬藤和防风时展开距离为8-12cm。
20、优选地，所述tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中穿山龙、虎杖、忍冬藤和防风时展开距离为10cm。
21、本发明中，所述高效液相色谱hplc法测定穿虎祛痛颗粒制剂中大黄素的含量，包括下列步骤：
22、1)供试品溶液制备：取穿虎祛痛颗粒，称定，加水，超声，放冷，加入三氯甲烷和盐酸溶液，水浴加热回流，称定，用三氯甲烷补足减失重量；分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，取续滤液，得供试品溶液；
23、2)对照品溶液制备：取大黄素对照品，加甲醇制成对照品溶液，即得；
24、3)hplc色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈a-0.1％磷酸溶液b为流动相进行洗脱；理论塔板数按大黄素计算应不低于3000；
25、4)测定方法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算。
26、优选地，所述hplc法测定穿虎祛痛颗粒制剂中大黄素的含量，包括下列步骤：
27、1)供试品溶液的制备：取穿虎祛痛颗粒适量，研细，取约1.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水10ml，超声30分钟，放冷，精密加入三氯甲烷25ml和2.5mol/l盐酸溶液10ml，称定重量，置80℃水浴中加热回流2小时，冷却至室温，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀；分取三氯甲烷液，精密量取10ml，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
28、2)对照品溶液的制备：取大黄素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；
29、3)hplc色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈：0.1％磷酸溶液＝80：20为流动相，等度洗脱，流速1ml/min，检测波长254nm；理论塔板数按柚皮苷峰计算应不低于3000；
30、4)测定方法：吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，按照步骤3)项下色谱条件测定，即得。
31、所述超声处理时功率100-250w，频率40-50khz。
32、本发明一种穿虎祛痛颗粒的质量控制方法操作简单，可靠准确，稳定性高、重现性好，专属性强，能更全面地对穿虎祛痛颗粒的质量进行评价控制，确保产品质量的稳定性和临床用药的安全性、有效性，从而更好地满足医疗和市场的需要。
33、与现有技术相比，本发明穿虎祛痛颗粒质量检测方法取得了以下有益效果：
34、1)本发明在现有穿虎祛痛合剂“局颁标准”质量检测方法的基础上，开发了一套适用于穿虎祛痛颗粒的质量控制方法，弥补了穿虎祛痛颗粒质量检测方法的空白；
35、2)为了实现对穿虎祛痛颗粒质量的全面控制，发明人通过对穿虎祛痛颗粒及穿虎祛痛合剂处方及制法进行对比分析，经反复摸索验证，优化了针对制剂中忍冬藤、防风及虎杖药味的薄层鉴别方法，并增加了针对穿山龙此味君药的薄层鉴别，完善了穿虎祛痛颗粒薄层鉴别体系，达到了更为全面的质量控制目的；
36、3)本发明通过高效液相法测定制剂中大黄素的含量，提供了一种穿虎祛痛颗粒的定量检测方法，可靠准确，重现性好，专属性强，能更加科学地对穿虎祛痛颗粒质量进行检测和评价
1.一种穿虎祛痛颗粒质量检测方法，其特征在于，该方法采用tlc法鉴别制剂中穿山龙、虎杖、忍冬藤和防风，同时采用hplc法测定制剂中大黄素的含量。
2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中穿山龙包括下列步骤：
3.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中虎杖包括下列步骤：
4.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中忍冬藤包括下列步骤：
5.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中防风包括下列步骤：
6.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中穿山龙、虎杖、忍冬藤和防风时展开距离为8-12cm。
7.根据权利要求6所述的质量检测方法，其特征在于，tlc法鉴别穿虎祛痛颗粒中穿山龙、虎杖、忍冬藤和防风时展开距离为10cm。
8.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱hplc法测定穿虎祛痛颗粒制剂中大黄素的含量，包括下列步骤：
9.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述hplc法测定穿虎祛痛颗粒制剂中大黄素的含量，包括下列步骤：
10.根据权利要求所述的质量检测方法，其特征在于，所述超声处理时功率100-250w，频率40-50khz。
