本发明属于微生物诱变育种,具体涉及一种灵芝高产β-葡聚糖的优良菌株培育方法及灵芝菌株和应用。
背景技术:
1、灵芝[ganoderma lucidum]是名贵中药材,迄今已有3000多年的应用历史。近来,国家卫生健康委员会和国家市场监督管理总局将灵芝等9种物质纳入按照传统既是食品又是中药材的物质目录。这将推进灵芝产业的进一步发展。未来,市场对灵芝的需求将继续增加。
2、多糖是灵芝中的最主要有效成分之一,目前已经分离获得大约200个多糖组分,其中大部分是以葡萄糖为组成单元的葡聚糖(α-葡聚糖和β-葡聚糖),还有以葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖和阿拉伯糖等组成的杂β-葡聚糖。β-葡聚糖是灵芝中主要的活性多糖种类,在调节免疫和抑制肿瘤方面发挥着重要作用。但目前各灵芝品种的子实体中β-葡聚糖的含量普遍较低,无法满足市场对高产β-葡聚糖的灵芝品种需求。因此,选育高产β-葡聚糖的灵芝新品种就成为灵芝行业的重要育种目标。
技术实现思路
1、本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊,而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
2、本发明的目的首先是提供一种灵芝菌株,该菌株的保藏号为:cctcc no:m20232323,命名为灵芝ganoderma lucidum。
3、保藏编号:lz2-uv276。
4、保藏日期:2023年11月24日。
5、保藏地址:湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山,中国典型培养物保藏中心(cctcc)。
6、本发明还提供了上述灵芝菌株的选育方法,该方法包括如下步骤:
7、原生质体的制备与再生:将出发灵芝菌株接种于灭过菌的ymg(酵母提取物4g,麦芽提取物10g,无水葡萄糖10g,100ml蒸馏水,ph自然)液体培养基中,于26℃、180rpm/min摇床中培养3~4d后,静置培养获得松散菌丝体;将该松散菌丝体同溶壁酶液混合,酶液终浓度达到1.5%于30~32℃、45rpm/min恒温摇床振荡温浴2.5h,再经过滤、清洗、离心得到的原生质体用0.6mol/l甘露醇稀释至106个/ml,涂布于再生培养基平板上,置于紫外交联仪中,进行紫外照射处理;后于26~26℃避光培养7~10d。挑接再生的单菌落于新的pda平板上培养。取菌落边缘圆整的近边缘菌丝体,接种于新的pda平板上,获得纯化的单菌落。
8、突变菌株的鉴定:通过显微镜检和体细胞不亲和性测试等手段,对上述纯化的单菌落进行鉴定,其中具有锁状联合结构且与出发菌株拮抗的菌株即为突变株。
9、作为本发明所述的灵芝高产β-葡聚糖优良菌株的选育方法一种优选方案:突变菌株初筛方法为:通过srap、issr及rapd等分子标记将这些突变株进行遗传相似性分组,并结合其菌丝体生物学特性,从每组中挑选出具有代表性的突变株进行后续出芝品比试验。
10、作为本发明所述的灵芝高产β-葡聚糖优良菌株的选育方法一种优选方案:液体菌种培养基配方为:葡萄糖20.5g,黄豆粉3.3g,酵母膏1.6g,无水硫酸镁0.65g,磷酸二氢钾0.65g,消泡剂0.14ml,用蒸馏水定容至1l。
11、作为本发明所述的灵芝高产β-葡聚糖优良菌株的选育方法一种优选方案:还包括,子实体栽培:
12、栽培基质配方为:木屑74%,麸皮12%,玉米粉8%,玉米芯4%,食用菌专用石膏粉2%;含水量约63~67%;
13、栽培出芝:菌包被放置于出芝场所,前4~5天,湿度维持在65~70%,温度控制在26℃左右,避光培养,菌丝体在袋口处快速生长并纠结在一起形成坚硬的隆起;第6~10天,原基开始形成,湿度调整到70~75%,温度继续维持在26℃左右,光强调整到100lux;第10-17天,灵芝菌柄形成并生长芝6~7cm,湿度调整到70~75%,温度继续维持在26℃左右,光强调整到100lux;约第18天开始,菌盖开始形成并水平扩张,湿度逐渐调整到75~85%,温度继续维持在26℃左右,光强调整到500lux左右,二氧化碳浓度控制在600ppm左右;但菌盖边缘的颜色同菌盖中部的颜色一致时,即采收子实体。
14、本发明的有益效果:本发明的诱变育种获得突变株lz-uv276,其子实体β-葡聚糖含量达到1.20%。本发明优化了灵芝新菌株的初筛方法,大幅度减少了工作量,提高了筛选效率。
1.一种灵芝(ganoderma lucidum)菌株,其特征在于:所述灵芝(ganoderma lucidum)菌株的保藏编号为:cctcc no:m 20232323。
2.权利要求1所述的灵芝(ganoderma lucidum)菌株在生产β-葡聚糖中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:所述灵芝(ganoderma lucidum)菌株具有抗逆性,所述抗逆性包括抗土壤杂菌。
4.根据权利要求2或3所述的应用,其特征在于:所述灵芝(ganoderma lucidum)菌株能够抗霉菌。
5.权利要求1所述的灵芝高产β-葡聚糖的优良菌株培育方法,其特征在于:包括以下步骤,
6.根据权利要求5所述的灵芝高产β-葡聚糖的优良菌株培育方法,其特征在于:所述整光强度是将光强度调整到780~820lux。
7.根据权利要求5或6所述的灵芝高产β-葡聚糖的优良菌株培育方法,其特征在于:所述调整二氧化碳浓度是将二氧化碳浓度调整为550~650ppm。
8.根据权利要求5或6所述的灵芝高产β-葡聚糖的优良菌株培育方法,其特征在于:所述栽培基质的配方包括木屑70~75%,麸皮10~14%,玉米粉6~10%,玉米芯2~6%,石膏粉1~3%,余下为水。
9.根据权利要求5或6所述的灵芝高产β-葡聚糖的优良菌株培育方法,其特征在于:栽培基质配方为:木屑74%,麸皮12%,玉米粉8%,玉米芯4%,石膏粉2%,余下为水。
10.根据权利要求5或6所述的灵芝高产β-葡聚糖的优良菌株培育方法,其特征在于:还包括,将所述栽培基质在121℃灭菌1.5~2h。
