本申请提供了治疗克拉伯病(krabbe disease)的方法，其通过免疫抑制患者，提供脐带血移植(umbilical cord blood transplant，ucbt)和增加患者中半乳糖脑苷脂酶(galactocerebrosidase，galc)的表达(例如，通过使用病毒载体来表达galc)。还提供了用于治疗其他遗传病的类似方法。
背景技术：
1、克拉伯病是由半乳糖脑苷脂酶(galc)的缺乏或缺失引起的罕见的遗传性溶酶体贮积症，半乳糖脑苷脂酶是一种对神经系统中正常髓鞘形成的发育和维持至关重要的酶。患有最严重形式的这种病症(称为早期婴儿克拉伯病)的儿童，在6个月大时出现症状并经历快速进行性神经变性(neurodegeneration)，通常导致到2岁时死亡。患有晚发形式的该疾病的患者也可能发生严重残疾和过早死亡，包括婴儿后期发病和青少年发病。
2、采用脐带血移植(umbilical cord blood transplantation，ucbt)的治疗在患有早期婴儿和婴儿后期形式的克拉伯病的个体中可以有效地保留认知并延长寿命。尽管ucbt在神经系统症状发作之前阻止了脑退化的进程，但它对治疗导致患者出现严重运动障碍的周围神经病变的症状无效。
技术实现思路
1、本文提供了治疗克拉伯病的新方法。在一些实施例中，这样的方法包括免疫抑制受试者，给受试者施用治疗有效量的脐带血(例如，进行ucbt)，和给受试者施用治疗有效量的编码半乳糖脑苷脂酶(galc)的核酸分子(例如，以增加galc表达)。经治疗的受试者可以患有任何形式的克拉伯病，如早期婴儿克拉伯病、婴儿后期克拉伯病或青少年克拉伯病。在一些实施例中，所述受试者患有早期婴儿克拉伯病，并且是不到6个月大的人类婴儿。在一些实施例中，所述受试者是哺乳动物，如人、猫或犬。
2、在一些实施例中，在施用编码galc的核酸分子之前，例如在施用编码galc的核酸分子之前至少12小时、至少24小时、至少48小时、至少72小时或至少96小时施用所述脐带血。在一些实施例中，所述脐带血对所述受试者而言是同种异体的。在这些例子中，hla-匹配的供体(hla-matched donor)与被治疗的受试者在6个hla标记物中至少匹配4个。在一些实施例中，给所述受试者施用至少3x107/kg校正理想体重(aibw)的总有核细胞剂量。
3、所述编码galc的核酸可与所述被治疗的受试者相匹配。因此，例如，如果待治疗的受试者是猫，可以使用猫galc编码序列，并且如果待治疗的受试者是人，可以使用人galc编码序列。在一些实施例中，所述编码galc的核酸分子与seq id no：1具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。在一些实施例中，所述核酸分子编码galc蛋白，所述galc蛋白包含与seq id no：2至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。所述编码galc的核酸分子可以与启动子可操作地连接。所述编码galc的核酸分子可以直接施用，例如，作为裸dna，或者可以作为载体的部分施用，如质粒或病毒载体，例如可以通过血脑屏障的载体，如腺相关载体(aav)，例如aav血清型rh.10。在一些实施例中，静脉内施用所述编码galc的核酸分子。在一些实施例中，所述编码galc的核酸分子(当为病毒载体的部分时)以每受试者至少2×1014gc的剂量施用。在一些实施例中，所述编码galc的核酸分子(当为病毒载体的部分时)以至少1×1011gc/kg、至少1×1012gc/kg、至少1×1013gc/kg或至少1×1014gc/kg的剂量施用。
4、所述受试者在接受所述ubct和所述编码galc的核酸分子之前可以进行免疫抑制。在一些实施例中，这样的步骤包括施用治疗有效量的阿仑单抗、羟基脲、氟达拉滨和白消安。在一些实施例中，这样的步骤包括施用试剂以降低gvhd，如治疗有效量的他克莫司和霉酚酸酯(mmf)。
5、除了治疗克拉伯病的方法，本公开提供了治疗受试者，例如哺乳动物受试者中遗传病的方法。所述方法减少基因治疗中所用试剂(例如，病毒载体蛋白或在施用所述基因治疗时才由所述受试者产生的新蛋白质)的不希望的免疫应答(例如，抗体产生)。这些方法可以用来治疗任何遗传疾病。在一些实施例中，该基因治疗增加蛋白质的表达、降低蛋白质的表达、校正基因组序列错误或其组合。这些方法可包括在所述受试者中清除骨髓(例如使用化学疗法、照射或两者)，和随后给所述受试者施用治疗有效量的造血干细胞(hsc)以便为所述受试者提供新的免疫系统。在一些实施例中，在施用所述hsc之后，给所述受试者施用治疗有效量的免疫抑制剂。在施用所述hsc之后(其可以在所述受试者的免疫系统恢复之前)，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的治疗性核酸分子，其中所述核酸分子校正所述遗传病(例如，通过表达缺失蛋白)。
6、通过参考附图进行的以下详细描述，本公开的前述和其他目的以及特征将变得更加显而易见。
1.治疗有效量的脐带血和治疗有效量的编码半乳糖脑苷脂酶(galc)的核酸分子的组合在制备药物中的用途，所述药物用于治疗受试者中的克拉伯病，其中所述受试者已被免疫抑制。
2.权利要求1的用途，其中所述编码galc的核酸分子包含与seq id no：1至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
3.权利要求1或2的用途，其中所述核酸分子编码galc蛋白，所述galc蛋白包含与seqid no：2至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％的序列同一性。
4.权利要求1至3中任一项的用途，其中所述编码galc的核酸分子与启动子可操作连接。
5.权利要求1至4中任一项的用途，其中静脉内施用所述编码galc的核酸分子。
6.权利要求1至5中任一项的用途，其中所述编码galc的核酸分子是载体的部分。
7.权利要求6的用途，其中所述载体是病毒载体。
8.权利要求7的用途，其中所述病毒载体是腺相关载体(aav)。
9.权利要求8的用途，其中所述腺相关载体是aav血清型rh.10。
10.权利要求7至9中任一项的用途，其中以每受试者至少2×1013gc或每受试者至少2×1014gc的剂量施用所述病毒载体。
11.权利要求1至10中任一项的用途，其中在施用所述编码galc的核酸分子之前施用所述脐带血。
12.权利要求1至11中任一项的用途，其中在施用所述编码galc的核酸分子之前1天施用所述脐带血。
13.权利要求1至12中任一项的用途，其中所述脐带血对所述受试者而言是同种异体的。
14.权利要求1至13中任一项的用途，其中施用治疗有效量的脐带血包括给所述受试者施用至少3x 107/kg的总有核细胞剂量。
15.权利要求1至14中任一项的用途，其中通过施用治疗有效量的阿仑单抗、羟基脲、氟达拉滨和白消安，所述受试者已被免疫抑制。
16.权利要求1至15中任一项的用途，其中通过进一步施用治疗有效量的他克莫司和霉酚酸酯(mmf)，所述受试者已被免疫抑制。
17.权利要求1至16中任一项的用途，其中所述克拉伯病是婴儿克拉伯病。
18.有效量的造血干细胞(hsc)和有效量的治疗性核酸分子的组合在制备药物的用途，所述药物用于治疗受试者中的遗传病，其中所述受试者的骨髓已经被部分或完全清除；其中所述核酸分子校正所述遗传病。
19.权利要求18的用途，其中通过给所述受试者施用治疗量的化学疗法、照射或两者，所述受试者的骨髓已经被部分或完全清除。
20.权利要求18或19的用途，其中所述组合进一步包括治疗有效量的免疫抑制剂，所述免疫抑制剂在施用所述hsc后，施用于所述受试者。
