本发明属于分子生物学领域，具体涉及能够识别柯萨奇病毒a组6型(cva6)空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性的单克隆抗体及其应用。
背景技术：
1、引起手足口病(hfmd)的病毒属于小rna病毒科(picornavirus)肠道病毒属(enteroviruse)，包括柯萨奇病毒a组的2、4、5、6、7、9、10、16型等和b组的1、2、3、4、5、6、13型等以及肠道病毒71型(human enterovirus71,ev71)、埃可病毒(echoviruses)等。
2、近几年的流行病学资料显示，cva6和cva10引起的hfmd发病率正逐年持续升高，特别是2012年后，cva6在我国北京、广东、福建等多个城市或地区成为引起hfmd暴发的主要病原体。因此，cva6已成为继ev71和cva16后，最值得人们关注的引起hfmd的肠道病毒病原体。
3、构象中和抗体更能反应病毒的含量和功能，因此开发靶向构象表位、特异性识别cva6的中和活性单克隆抗体对疫苗研发的质控、临床样本的检测和实验室病毒鉴别、cva6基础功能的研究具有重要意义。
技术实现思路
1、基于此，有必要提供可同时识别cva6空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性的单克隆抗体及其应用。
2、本发明提供能够识别cva6空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性的单克隆抗体，所述单克隆抗体具有如seq id no.1～3所示的重链互补决定区cdr1～cdr3，以及如seq idno.4～6所示的轻链互补决定区cdr1～cdr3。
3、本发明单克隆抗体能够靶向构象表位、能够识别cva6空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性，可用于cva6病毒定量，且反应病毒的含量和功能，与免疫原性相关，对疫苗研发的质控至关重要。
4、优选的，所述单克隆抗体重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示；和/或，所述单克隆抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.8所示。
5、进一步，所述单克隆抗体为igg2a型抗体。
6、本发明提供一种编码单克隆抗体的核酸分子。
7、进一步，编码所述重链可变区的核酸分子为以下几种中的任一种：
8、a、具有如seq id no:8所示的核苷酸序列；
9、b、与seq id no:8所示的核苷酸序列互补核苷酸序列；
10、c、与a和b的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与其不同的核苷酸序列；
11、和/或
12、编码所述轻链可变区的核酸分子为以下几种中的任一种：
13、e、具有如seq id no:10所示的核苷酸序列；
14、f、与seq id no:10所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列；
15、g、与e和f的核苷酸序列编码相同的蛋白质，但因遗传密码的简并性而与其不同的核苷酸序列。
16、本发明提供一种表达载体，该表达载体含有编码单克隆抗体的核酸分子。
17、本发明提供一种宿主细胞，该宿主细胞含有上述的核酸分子，或含有上述的表达载体。
18、本发明提供一种抗体偶联物，该抗体偶联物包含上述的单克隆抗体或其抗原结合片段及标记物，所述标记物选自酶标记、生物素标记、化学发光染料标记中的一种或多种。
19、本发明提供单克隆抗体在制备检测cva6试剂或试剂盒中的应用。
20、本发明提供一种检测cva6试剂或试剂盒，包含上述单克隆抗体。
21、本发明提供上述单克隆抗体在制备抑制、预防和治疗cva6药物中的应用。
22、本发明所提供的单克隆抗体是以纯化后的柯萨奇病毒a组6型(cva6)病毒免疫小鼠，制备筛选杂交瘤细胞，从而制备得到的，其为igg2a亚型非中和抗体，可以特异性识别cva6，不识别其他的肠道病毒。
23、本发明开发的单克隆抗体可与偶联物(辣根过氧化酶或异硫氰酸荧光素等)结合用于直接或间接检测、快速诊断，如可用于开发检测由cva6感染引起的临床样品的检测试剂或试剂盒，也可用于临床病毒分离株实验室鉴定抗体，同时还可用于制备预防性疫苗生产中间品及产品含cva6抗原的定量检测试剂。
1.识别cva6空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体重链互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3所示，轻链互补决定区cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分别如seq id no:4、seq id no:5和seq id no:6所示。
2.根据权利要求1所述的识别cva6空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体重链可变区氨基酸序列如seq id no:7所示。
3.根据权利要求1所述的识别cva6空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体轻链可变区氨基酸序列如seq id no:9所示。
4.根据权利要求2或3所述的识别cva6空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体为igg2a型抗体。
5.编码权利要求1至4任一项所述的识别cva6空心颗粒和实心颗粒且具有中和活性的单克隆抗体的核酸分子。
6.根据权利要求5所述的核酸分子，其特征在于，编码所述重链可变区的核酸分子为以下几种中的任一种：
7.一种表达载体，其特征在于，含有编码权利要求1～4任一项所述的单克隆抗体的核酸分子。
8.一种宿主细胞，其特征在于，含有权利要求5或6所述的核酸分子，或含有权利要求7所述的表达载体。
9.权利要求1至4任一项所述的单克隆抗体在制备检测cva6试剂或试剂盒中的应用。
10.权利要求1至4任一项所述的单克隆抗体在制备抑制、预防和治疗cva6药物中的应用。
