本技术涉及酶联免疫检测，尤其是涉及一种用于elisa检测试剂盒的酶标抗体稀释液及其制备方法。
背景技术：
1、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay)简称elisa，其中elisa抗体检测试剂盒主要原理为将可溶性抗原吸附到聚苯乙烯等固相载体上，样品中的抗体与载体上吸附的抗原发生特异性反应，形成抗原抗体免疫复合物，加入酶标记的抗体，通过反应结合在固相载体上，加入底物进行显色反应，测定光吸收度，通过计算达到抗体测定的目的。elisa检测方法操作步骤虽简单，但影响因素较多，其中酶标抗体稀释液是最重要的影响因素之一。elisa方法至今已在体外诊断领域普遍应用，而对于使用者来说稳定性是其筛选试剂盒的重要因素之一，众所周知，elisa试剂盒是由多种组分组成，若要保证试剂盒在有效期内拥有较好的稳定性，那么每一组分的稳定性也是及其重要的。
2、酶标抗体在检测中有两种作用：一方面参与免疫反应，与相应的抗原发生特异性反应，另一方面可发挥酶的催化作用，催化底物发生化学反应。这里的酶标抗体是指辣根过氧化物酶(hrp)与抗体的偶联物。选择合适的酶标抗体稀释液可以使试剂盒中的酶标抗体维持稳定的效价，并且保持辣根过氧化物酶的活性，保证elisa试剂盒的准确性和稳定性。
3、酶标抗体一般保存于-20℃，保存期可达一年甚至更长，但是作为elisa试剂盒中的组分保存条件为2-8℃更为方便，之前人们用pbst作为稀释液稀释高浓度的酶标抗体，但是稀释后的酶标抗体不能长期保存，必需现配现用，使用极其不便捷。
技术实现思路
1、为了解决现有技术的不足，本技术提供一种用于elisa检测试剂盒的酶标抗体稀释液，采用该酶标抗体稀释液，能够明显的提高elisa检测试试剂盒的准确性和稳定性。
2、为此，本技术第一方面提供了一种用于elisa检测试剂盒的酶标抗体稀释液，以质量浓度(w/v)计，所述酶标抗体稀释液包括以下组分：0.1～1.0％的牛血清白蛋白，0.1～1.0％的聚乙烯吡咯烷酮，1～8mm的feso4，0.02～0.2％的硫氧还蛋白和0.01～0.1％的防腐剂。
3、本技术中，所述酶标抗体稀释液中的牛血清白蛋白(bsa)具有减少非特异性反应的作用，进而提高试剂盒的准确性，且bsa还可以作为蛋白保护剂，对酶标抗体中的酶起到保护作用，降低环境因素所引起的酶变性，提高试剂盒的稳定性；聚乙烯吡咯烷酮和feso4均具有稳定抗体蛋白和辣根过氧化物酶的作用，通过二者的协同作用，能够保护抗体效价和稳定酶的活性，进而提高试剂盒的稳定性；硫氧还蛋白为抗氧化剂，具有很好的抗氧化作用，能够清除自由基，大大降低抗体和酶被氧化破坏受损的几率，保持蛋白的稳定性。本技术所述酶标抗体稀释液通过各成分之间的相互作用，显著提升了酶标抗体的稳定性，该酶标抗体稀释液可于产品出厂前将酶标抗体稀释至工作浓度，与elisa试剂盒一同保存于2～8℃，无需现配现用，使用更为方便，且有效延长了试剂盒的保存期。
4、本技术中，所述酶标抗体是指辣根过氧化物酶(hrp)与抗体的偶联物。
5、在一些实施方式中，所述聚乙烯吡咯烷酮为聚乙烯吡咯烷酮40，且所述聚乙烯吡咯烷酮的质量浓度为0.4～0.6％。
6、本技术的发明人通过研究发现，当酶标抗体稀释液中添加的聚乙烯吡咯烷酮具体为聚乙烯吡咯烷酮40，且质量浓度为0.4～0.6％、尤其为0.5％时，能使采用该稀释液稀释后的酶标抗体的稳定性更好。
7、本技术中，所述酶标抗体稀释液中添加的feso4具体可以为feso4·7h2o，所述酶标抗体稀释液中feso4的浓度例如可以为1mm、2mm、3mm、4mm、5mm、6mm、7mm或8mm等。
8、在一些优选的实施方式中，所述feso4的浓度为3～5mm。在一些更为优选的实施方式中，所述feso4的浓度为4mm。
9、本技术通过将酶标抗体稀释液中feso4的浓度控制在上述范围内，有助于进一步提升elisa检测试剂盒的稳定性。
10、在一些实施方式中，所述硫氧还蛋白的质量浓度为0.08～0.12％。在一些优选的实施方式中，所述硫氧还蛋白的质量浓度为0.1％。
11、本技术通过将酶标抗体稀释液中硫氧还蛋白的质量浓度控制在上述范围内，有助于进一步提升elisa检测试剂盒的稳定性。
12、在一些实施方式中，所述酶标抗体稀释液中还包括赖氨酸，所述赖氨酸的质量浓度为1～3％。
13、在一些优选的实施方式中，所述赖氨酸的质量浓度为2％。
14、本技术中，赖氨酸为蛋白保护剂，通过在酶标抗体稀释液中添加赖氨酸，能够对酶标抗体中的酶和抗体起到更好的保护作用，进而保护抗体效价和稳定酶的活性，进一步提升elisa检测试剂盒的稳定性。
15、在一些实施方式中，所述赖氨酸与牛血清白蛋白的质量比为(3～5):1。
16、在一些具体实施例中，所述赖氨酸与牛血清白蛋白的质量比可以为3:1、4:1或5:1等。在一些优选的实施方式中，所述赖氨酸与牛血清白蛋白的质量比为4:1。
17、本技术通过调整赖氨酸与牛血清白蛋白的质量比，有助于二者发挥协同增效作用，提升对酶标抗体中酶和抗体的保护效果。
18、在一些实施方式中，所述酶标抗体稀释液中还包括组氨酸，所述组氨酸与硫氧还蛋白的质量比为(0.1～1):1。
19、在一些优选的实施方式中，所述组氨酸与硫氧还蛋白的质量比为0.5:1。
20、本技术中，组氨酸为抗氧剂，可有效减轻酶的氧化作用，进而保护抗体效价和稳定酶的活性。同时，本技术通过将组氨酸与硫氧还蛋白的质量比控制在上述范围内，有助于二者发挥协同增效作用，进一步提升elisa检测试剂盒的稳定性。
21、在一些实施方式中，所述防腐剂选自proclin150、proclin300和proclin950中的至少一种。
22、本技术中选用的上述防腐剂具有广谱抗菌活性，可有效抑制细菌、真菌等微生物的生长，且不会对酶标抗体上的辣根过氧化物酶带来负面影响、不会抑制抗原与抗体的结合，具有优异的防腐效果。在一些具体实施方式中，所述防腐剂例如可以为proclin300，proclin300在酶标抗体稀释液中的质量浓度可以为0.05％。
23、本技术第二方面提供了一种如本技术第一方面所述的酶标抗体稀释液的制备方法，所述方法包括：将所述酶标抗体稀释液中的各组分与水混合后，过滤除菌，制得所述酶标抗体稀释液。
24、本技术中，酶标抗体稀释液制备时各组分的添加量可通过所需酶标抗体稀释液的体积及上述组分的浓度计算获得；制备过程中采用的水为纯化水，过滤除菌可以采用0.22μm的水系滤膜。
25、本技术第三方面一种elisa检测试剂盒，其包括如本技术第一方面所述的酶标抗体稀释液，或者包括采用如本技术第一方面所述的酶标抗体稀释液进行稀释后的酶标抗体溶液。
26、本技术所提供的酶标抗体稀释液显著提升了酶标抗体的稳定性，含有该酶标抗体稀释液的elisa检测试剂盒具有更好的准确性和稳定性，同时elisa检测试剂盒中的酶标抗体稀释液可以单独提供，也可以直接对酶标抗体进行稀释后以稀释后的酶标抗体溶液进行提供。由于酶标抗体需保存于-20℃下才能具有较长的保存期，而elisa试剂盒中的组分保存条件为2～8℃，因此稀释后的酶标抗体不能长期保存，必需现配现用，使用极其不便捷，而本技术提供的酶标抗体稀释液由于对酶标抗体具有很好的稳定性，因此采用该稀释液稀释后的酶标抗体也可与elisa试剂盒一同保存于2～8℃，无需现配现用，使用更为方便，且有效延长了试剂盒的保存期。
27、本技术的有益技术效果为：本技术提供的酶标抗体稀释液中各组分之间相互协同配合，显著提高了酶标抗体的稳定性，使得含有该酶标抗体稀释液的elisa检测试剂盒具有更好的准确性和稳定性。同时该酶标抗体稀释液可于产品出厂前将酶标抗体稀释至工作浓度，与elisa试剂盒一同保存于2～8℃，无需现配现用，使用更为方便，且有效延长了试剂盒的保存期，应用前景良好。
1.一种用于elisa检测试剂盒的酶标抗体稀释液，其特征在于，以质量浓度计，所述酶标抗体稀释液包括以下组分：0.1~1.0%的牛血清白蛋白，0.1~1.0%的聚乙烯吡咯烷酮，1~8mm的feso4，0.02~0.2%的硫氧还蛋白和0.01~0.1%的防腐剂。
2.根据权利要求1所述的酶标抗体稀释液，其特征在于，所述聚乙烯吡咯烷酮为聚乙烯吡咯烷酮40，且所述聚乙烯吡咯烷酮的质量浓度为0.4~0.6%。
3.根据权利要求1或2所述的酶标抗体稀释液，其特征在于，所述feso4的浓度为3~5mm。
4.根据权利要求1或2所述的酶标抗体稀释液，其特征在于，所述硫氧还蛋白的质量浓度为0.08~0.12%。
5.根据权利要求1或2所述的酶标抗体稀释液，其特征在于，所述酶标抗体稀释液中还包括赖氨酸，所述赖氨酸的质量浓度为1~3%。
6.根据权利要求5所述的酶标抗体稀释液，其特征在于，所述赖氨酸与牛血清白蛋白的质量比为（3~5）:1。
7.根据权利要求1或2所述的酶标抗体稀释液，其特征在于，所述酶标抗体稀释液中还包括组氨酸，所述组氨酸与硫氧还蛋白的质量比为（0.1~1）:1。
8.根据权利要求1或2所述的酶标抗体稀释液，其特征在于，所述防腐剂选自proclin150、proclin300和proclin950中的至少一种。
9.一种如权利要求1-8中任意一项所述的酶标抗体稀释液的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将所述酶标抗体稀释液中的各组分与水混合后，过滤除菌，制得所述酶标抗体稀释液。
10.一种elisa检测试剂盒，其包括如权利要求1-8中任意一项所述的酶标抗体稀释液，或者包括采用如权利要求1-8中任意一项所述的酶标抗体稀释液进行稀释后的酶标抗体溶液。
