本发明涉及系统性红斑狼疮诊断，更具体地，涉及一种检测ifn-i诱导表达的基因试剂盒及其应用。
背景技术：
1、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，sle)是一种多器官受累的自身免疫性疾病，是一系列免疫系统内的相互作用关系的紊乱导致的结果。在sle的发病过程中，不仅有t细胞参与，还伴有b细胞的高度活化，患者血清中可以出现多种自身抗体，并由此导致组织和器官的损伤。
2、i型干扰素(ifn-i)作为维持免疫系统稳定的重要因素，在sle的发生和发展中扮演着重要的角色，并与sledai评分及严重程度有一定相关性。现有技术中已经存在使用elisa技术检测sle患者外周血的ifn-i表达水平，发现50％患者外周血的ifn-i表达水平明显增高。但基因芯片法则发现96％的患者有ⅰ型干扰素诱导基因表达水平明显增高。究其原因，可能是由于sle患者本身存在抗ifn-i抗体，可干扰elisa检测的结果。此外，elisa试剂盒中的抗ifn-i抗体未能包含ifn-i的所有亚型，也会影响到elisa检测的结果。
3、因此，迫切需要寻找能真实反应ifn-i表达水平的更有效，更客观的检测指标。近年来通过微点阵及聚合酶链反应发现sle患者的外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,pbmcs)中多个干扰素诱导基因(oas2，oasl，ifit1，ifit4，stat1，isg15，mx1，mx2，plscr1，xiapaf1及irf7)出现上调现象。但是并未出现构建多重rt-pcr(real-time pcr)方法用于检测干扰素诱导基因实现系统性红斑狼疮早期诊断现有技术。
技术实现思路
1、针对现有技术所存在的技术问题，本发明提供了一种检测ifn-i诱导表达的基因试剂盒及其应用。该试剂盒是依托于多重rt-pcr(real-time pcr)方法构建了可以同时实现ifit3,ifit1,mx1和ifi44检测的引物和探针，经验证分析，所述检测试剂盒具备良好的诊断价值，可适用于系统性红斑狼疮的辅助诊断。
2、具体而言，本发明首先是提供了一种检测ifn-i诱导表达的基因试剂盒，所述试剂盒中包括用于检测ifit3,ifit1,mx1和ifi44四重rt-pcr引物和探针。
3、优选地，所述检测ifit3的引物和探针序列依次为seq id no.1-3所示；
4、优选地，所述检测ifit1的引物和探针序列依次为seq id no.4-6所示；
5、优选地，所述检测mx1的引物和探针序列依次为seq id no.7-9所示；
6、优选地，所述检测ifi44的引物和探针序列依次为seq id no.10-12所示；
7、进一步优选地，所述用于检测ifit3,ifit1,mx1和ifi44的探针分别采用不同的荧光基团进行标记；
8、优选地，所述荧光基团是选自fam、hex、joe、rox、tet、vic、cy3、cy5、ned等；
9、进一步地，所述用于检测ifit3,ifit1,mx1和ifi44的探针还标记有淬灭基团；
10、优选地，所述淬灭基团是选自bhq1、bhq2、bhq3、dabcyl、mgb等；
11、进一步地，所述四重rt-pcr的反应体系为25μl反应体系，包括2×taq dnamastermix 12μl，引物上下游各1μl(25μmol/l)，探针各1μl(25μmol/l)，质粒模板各1μl，剩余采用ddh2o补足25μl；
12、进一步地，所述四重rt-pcr的反应条件为：95℃5min，94℃1min，57℃30s，72℃30s，35个循环，72℃延伸10min；
13、本发明的另一目的在于提供了一组用于检测ifn-i诱导表达的基因的引物和探针。
14、优选地，所述检测ifit3的引物和探针序列依次为seq id no.1-3所示；
15、优选地，所述检测ifit1的引物和探针序列依次为seq id no.4-6所示；
16、优选地，所述检测mx1的引物和探针序列依次为seq id no.7-9所示；
17、优选地，所述检测ifi44的引物和探针序列依次为seq id no.10-12所示；
18、本发明的另一目的在于提供了上述引物和探针在制备用于检测ifn-i诱导表达的基因试剂盒中的用途；
19、进一步地，上述引物和探针在制备用于系统性红斑狼疮早期诊断的试剂盒中的用途；
20、进一步地，上述试剂盒在制备用于辅助检测系统性红斑狼疮产品中的用途；
21、本发明的优点如下：本发明首次建立了用于检测ifit3,ifit1,mx1和ifi44的ifn-i诱导表达的基因的四种rt-pcr反应体系。且所述各基因的引物探针之间具备良好的特异性、灵敏度，且能早常温环境下实现多次重复检测，有效提高了本发明所述试剂盒的诊断价值，可适用于系统性红斑狼疮的辅助诊断。
1.一种检测ifn-i诱导表达的基因试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括用于检测ifit3,ifit1,mx1和ifi44四重rt-pcr引物和探针。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，检测ifit3的引物和探针序列依次为seqid no.1-3所示；检测ifit1的引物和探针序列依次为seq id no.4-6所示；检测mx1的引物和探针序列依次为seq id no.7-9所示；检测ifi44的引物和探针序列依次为seq idno.10-12所示。
3.如权利要求2所示的试剂盒，其特征在于，用于检测ifit3,ifit1,mx1和ifi44的探针分别采用不同的荧光基团进行标记。
4.如权利要求3所示的试剂盒，其特征在于，所述荧光基团是选自fam、hex、joe、rox、tet、vic、cy3、cy5、ned。
5.如权利要求2所示的试剂盒，其特征在于，用于检测ifit3,ifit1,mx1和ifi44的探针还标记有淬灭基团。
6.如权利要求5所示的试剂盒，其特征在于，所述淬灭基团是选自bhq1、bhq2、bhq3、dabcyl、mgb。
7.如权利要求1所示的试剂盒，其特征在于，四重rt-pcr的反应体系为25μl反应体系，包括2×taq dna mastermix 12μl，引物上下游各1μl 25μmol/l，探针各1μl 25μmol/l，质粒模板各1μl，剩余采用ddh2o补足25μl。
8.如权利要求1所示的试剂盒，其特征在于，四重rt-pcr的反应条件为：95℃5min，94℃1min，57℃30s，72℃30s，35个循环，72℃延伸10min。
9.一组用于检测ifn-i诱导表达的基因的引物和探针，其特征在于，其包括检测ifit3的引物和探针序列依次为seq id no.1-3所示；检测ifit1的引物和探针序列依次为seq idno.4-6所示；检测mx1的引物和探针序列依次为seq id no.7-9所示；检测ifi44的引物和探针序列依次为seq id no.10-12所示。
10.权利要求1-8任一项所述的试剂盒或如权利要求9所述的引物和探针在制备用于辅助检测系统性红斑狼疮产品中的用途。
