本发明属于维生素测量领域，尤其涉及一种检测生物样本中脂溶性维生素的方法。
背景技术：
1、纸喷雾质谱法是常见的常压电离平台之一，基于纸喷雾质谱直接快速采样电离的优势，可以对原始生物和化学样品直接分析。目前，纸喷雾质谱在食品安全、药物分析、生物样品检测、环境分析等方面都得到了广泛的应用。虽然纸喷雾质谱具有分析成本低、操作简便的优势，但也存在一些不足。比如，对于一些基质中含量较低、质子亲和力低、不稳定的生物分子，比如维生素a、维生素d、胆固醇、甲醛、脂肪族和芳香族醛等，通常不太适合直接用纸喷雾电离方法，可能会由于离子化效率不理想等导致较差的灵敏度，从而无法满足这类分析物的检测需求，使得纸喷雾质谱的应用受到限制。也就是说，纸喷雾电离源的灵敏度也依赖于分析物。
2、脂溶性维生素是一类溶于有机溶剂而不溶于水的维生素，主要以维生素a、维生素d、维生素e、维生素k为主。它们能溶解于脂肪，不易被排泄，可储存于体内，故不需每日供给。人体对维生素的需求很小，但不可缺乏，一旦缺乏就会引发相应的维生素缺乏症。比如缺乏维生素a容易引起夜盲症、干眼症、皮肤病、免疫功能低下和感染增多，缺乏维生素d可引起与骨骼肌肉相关的疾病，因此，临床上脂溶性维生素的定量检测具有重要的意义。脂溶性维生素都含有环结构和长的脂肪族烃链，缺乏易带电基团，在质谱中的电离效果并不是很好，且维生素a对光、氧和氧化剂敏感，因此，亟需一种灵敏、稳定的方法来检测生物样品中的脂溶性维生素。
技术实现思路
1、有鉴于此，为了至少部分地解决上述提及的技术问题中的至少之一，本发明提供了一种检测生物样本中脂溶性维生素的方法，包括：将衍生试剂的有机溶液加入到待测生物样本中孵育，得到衍生产物，其中衍生试剂为与待测生物样本中脂溶性维生素发生狄尔斯-阿尔德（diels-alder）反应的库克森（cookson）型试剂；将衍生产物通过纸喷雾质谱法进行检测，得到衍生产物的质谱信号；根据衍生产物的质谱信号标准曲线与衍生产物的质谱信号，得到待测生物样本中的脂溶性维生素含量。
2、根据本发明的实施例，本发明所提供的基于diels-alder衍生的纸喷雾质谱方法，通过将待测脂溶性维生素与亲二烯体cookson型试剂发生反应，增加了分析物的电离效率，提高了纸喷雾质谱法的灵敏度，无需冗长复杂的前处理，实现了快速、灵敏、稳定的分析血清中的脂溶性维生素，拓宽了纸喷雾质谱的应用范围，采用纸喷雾质谱直接检测，无需色谱分离，减少了分析检测的时间。
1.一种检测生物样本中脂溶性维生素的方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生试剂为4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮或4-(4’-二甲基氨基苯基)-1，2，4-三唑啉-3，5-二酮；
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述衍生试剂为4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮，所述衍生试剂的浓度为500~1000 mg/l，所述有机溶剂为乙酸乙酯；
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测生物样本包括血清、血液、细胞、尿液中的至少一种；所述脂溶性维生素为维生素a或维生素d。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述孵育的时间为0.5~5分钟，孵育温度为20~25℃。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将衍生试剂的有机溶液加入到待测生物样本中孵育，得到衍生产物包括：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将所述衍生产物通过纸喷雾质谱法进行检测，得到衍生产物的质谱信号包括：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述喷雾溶剂为甲醇和水的混合物，其中甲醇和水的体积比为（1~3）：（3~1）。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生产物的质谱信号标准曲线的建立方法包括如下步骤：
