本公开总体上涉及能够诱导肿瘤细胞的t细胞细胞毒性的双特异性蛋白质，及其用于治疗癌症的用途。
背景技术：
1、ror1是一种细胞表面酪氨酸激酶，主要在胚胎发育过程中表达。ror1在血液肿瘤细胞(包括慢性淋巴细胞白血病(cll)细胞和套细胞白血病(mcl)细胞)和包括卵巢、肺、胃、胰腺、子宫、乳腺和前列腺的实体瘤上表达。ror1在正常成人组织(例如，脂肪组织、前b细胞、胰岛)上表现出有限的表达，因此被认为是相对肿瘤特异性的肿瘤相关抗原(“taa”)。ror1特异性抗体药物偶联物(adc)在早期临床试验中已显示出有希望的疗效和可控的不良事件(ae)概况。然而，实体瘤中细胞表面ror1表达的低密度和异质性对许多免疫治疗模式(包括介导抗体依赖性细胞毒性的单特异性抗体和adc)提出了挑战。
2、adc的功效依赖于adc内化的程度。ror1 adc在治疗ror1+血液恶性肿瘤(包括cll和mcl)的早期临床试验中似乎非常有效，但这可能至少部分归因于：(1)与需要adc穿透的实体瘤相比，adc更容易接触到血液肿瘤，以及(2)与实体瘤相比，血液肿瘤中ror1的表达频率更高且更均质。
3、cd3双特异性抗体(bsab)需要最小的受体占用来介导有效的功能活性。当taa-cd3bsab在t细胞上的cd3和肿瘤细胞上的靶taa表位之间桥接时，taa-cd3 bsab会激活所有cd3+淋巴细胞，包括αβt细胞、γδt细胞、nk-t细胞、调节性t细胞(treg)、粘膜相关不变t(mait)细胞及其表型亚群。在实体瘤中，cd3+淋巴细胞(包括cd8+细胞毒性t细胞)相对于肿瘤细胞的相对频率较低(每个cd8+t细胞的肿瘤细胞通常>10)，即使在高度免疫原性和发炎的肿瘤(例如黑色素瘤)中也是如此。因此，cd3 bsab的功效取决于单个cd8+t细胞杀死超过一个肿瘤细胞的能力，这一过程称为连续杀伤。
4、tcr/cd3复合物经由该bsab桥的交联优先激活细胞毒性t细胞亚群以介导表达taa的细胞(其中大部分被推测为肿瘤细胞)的杀伤并释放能够将肿瘤微环境(tme)从免疫抑制转变到免疫受纳的促炎细胞因子。在treg的背景下，cd3 bsab可以激活treg以分泌免疫抑制细胞因子，例如tgfβ。这一机制是影响贝林妥欧单抗(blinatumomab)，一种靶向cd19的cd3 bsab，用于治疗血液恶性肿瘤)疗效的重要因素。
5、然而，cd3 bsab与潜在致命的ae相关，包括细胞因子释放综合征(crs)和神经毒性。因此，某些bsab治疗性候选药物旨在将肿瘤细胞毒活性与促炎细胞因子(例如ifnγ、tnfα、il-2)释放解偶联(参见，例如zuch de zafra等(2019)clin cancer res.；25(13):3921-3933.；trinklein等(2019)mabs.；11(4):639-652.；和hernandez-hoyos等(2016)molcancerther.；15(9):2155-65)。
6、迫切需要具有有效的肿瘤细胞靶向杀伤活性、最小的脱靶毒性、扩大的实体瘤和/或血液肿瘤的治疗窗口以及可控的ae概况的新疗法。
技术实现思路
1、本公开总体上涉及能够诱导针对肿瘤细胞的强烈t细胞细胞毒性的双特异性蛋白质，及其用于治疗癌症的用途。
2、在一方面，本公开总体上提供了诱导和/或能够诱导针对某些表达taa的细胞的强烈t细胞细胞毒性的双特异性蛋白质，及其用于治疗癌症的用途。在一些实施方式中，本公开提供了诱导和/或能够诱导针对ror1+肿瘤细胞的强烈t细胞细胞毒性的双特异性蛋白质，及其用于治疗癌症的用途。
3、在一些实施方式中，本公开的双特异性蛋白质不诱导显著量的细胞因子释放。在一些实施方式中，本公开的双特异性蛋白质诱导针对某些表达taa细胞的强烈t细胞细胞毒性，但不诱导显著量的细胞因子释放。
4、在一些实施方式中，本公开的双特异性蛋白质诱导针对表达taa细胞的强烈t细胞细胞毒性，但不诱导显著量的细胞因子释放，所述双特异性蛋白质包括两个臂，第一臂和第二臂，第一臂包含位于其n端的第一组分和位于其c端的第二组分，所述第一组分特异性结合taa，所述第二组分特异性结合相同的taa，第二臂包含位于其n端的组分，所述组分特异性结合cd3。
5、在一些实施方式中，本公开的双特异性蛋白质诱导针对某些表达taa细胞的强烈t细胞细胞毒性，但不诱导显著量的细胞因子释放，其包含：(i)第一臂，从n端到c端包含：第一组分，其包含特异性结合taa的多肽或两种或更多种多肽的复合物，第一铰链多肽，seed形式免疫球蛋白fc结构域的第一多肽，和第二组分，所述第二组分包含特异性结合taa的多肽或两种或更多种多肽的复合物；和(ii)第二臂，其从n端到c端包含特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，第二铰链多肽和seed形式免疫球蛋白fc结构域的第二多肽，其中seed形式免疫球蛋白fc结构域的第一和第二多肽二聚化。
6、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含：特异性结合rorl的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其连接至桥接部分末端；以及特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其连接至桥接部分的相反端。
7、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至桥接部分的c端，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至桥接部分的n端。
8、在一些实施方式中，所述蛋白质还包含连接至桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物。
9、在一些实施方式中，所述桥接部分包含两个多肽臂，其中特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物以及特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物分别连接至同一多肽臂的c端和n端，并且其中特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至第二多肽臂的n端。
10、在一些实施方式中，本公开的双特异性蛋白质诱导针对某些表达taa的肿瘤细胞的强烈t细胞细胞毒性，但不诱导显著量的细胞因子释放，其包含：(i)第一臂，从n端到c端包含：第一组分，其包含特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物，第一铰链多肽，seed形式免疫球蛋白fc结构域的第一多肽，和第二组分，所述第二组分包含特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物；和(ii)第二臂，其从n端到c端包含特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，第二铰链多肽和seed形式免疫球蛋白fc结构域的第二多肽，其中seed形式免疫球蛋白fc结构域的第一和第二多肽二聚化。
11、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至桥接部分的n端，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至桥接部分的c端。
12、在一些实施方式中，所述蛋白质还包含连接至桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物。
13、在一些实施方式中，所述桥接部分包含两个多肽臂，其中特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物以及特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物分别连接至样品多肽臂的n端和c端，并且其中特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物连接至第二多肽臂的n端。
14、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物选自下组：单链可变片段(scfv)、fab、fab’、f(ab’)2、微型抗体(minibody)和纳米抗体(vhh)。在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物是scfv。
15、在一些实施方式中，特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物选自下组：scfv、fab、fab’、f(ab’)2、微型抗体(minibody)和vhh。在一些实施方式中，特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物是scfv。
16、在一些实施方式中，特异性结合rorl的多肽或两种或更多种多肽的复合物，或者特异性结合rorl的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：(i)重链互补决定区1(vhcdr1)，其包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)或氨基酸序列gfsittsgvs(seq idno:23)；(ii)重链互补决定区2(vhcdr2)，其包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)或氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)；(iii)重链互补决定区3(vhcdr3)，其包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)或氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)；(iv)轻链互补决定区1(vlcdr1)，其包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)或氨基酸序列qsvssn(seq idno:26)；(v)轻链互补决定区2(vlcdr2)，其包含氨基酸序列das或gas；和(vi)轻链互补决定区3(vlcdr3)，其包含氨基酸序列qqrsnwppxt(seq id no:13)，其中x是f、s、c、r、q、i、l、y或v，或氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)。
17、在一些实施方式中，特异性结合rorl的多肽或两种或更多种多肽的复合物，或者特异性结合rorl的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)的vhcdr1；包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)的vhcdr2；包含氨基酸序列aqgssifdy(seqid no:10)的vhcdr3；包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)的vlcdr1；包含氨基酸序列das的vlcdr2；和包含氨基酸序列qqrsnwppft(seq id no:14)的vlcdr3。
18、在一些实施方式中，特异性结合rorl的多肽或两种或更多种多肽的复合物，或者特异性结合rorl的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)的vhcdr1；包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)的vhcdr2；包含氨基酸序列aqgssifdy(seqid no:10)的vhcdr3；包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)的vlcdr1；包含氨基酸序列das的vlcdr2；和包含氨基酸序列qqrsnwppst(seq id no:15)的vlcdr3。
19、在一些实施方式中，特异性结合rorl的多肽或两种或更多种多肽的复合物，或者特异性结合rorl的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：包含氨基酸序列gfsittsgvs(seq id no:23)的vhcdr1；包含氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)的vhcdr2；包含氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)的vhcdr3；包含氨基酸序列qsvssn(seqid no:26)的vlcdr1；包含氨基酸序列gas的vlcdr2；和包含氨基酸序列qqyknwppa(seq idno:28)的vlcdr3。
20、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含(根据imgt独特编号方案)vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3，其各自包含对应于本公开所列的重链可变结构域和轻链可变结构域的vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3序列的氨基酸序列。
21、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：与seq id no:29或seq idno:39具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列，和与seq id no:30、seq idno:31、seq idno:32、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36、seq idno:37、seq id no:38或seq id no:40具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
22、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：与seq id no:29具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列，和与seq id no:30具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
23、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：与seq id no:29具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列，和与seq id no:31具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
24、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：与seq id no:39具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列，和与seq id no:40具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
25、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其各自包含对应于本技术中公开的重链可变结构域和轻链可变结构域的重链可变结构域和轻链可变结构域序列的氨基酸序列。
26、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含接头多肽，其包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
27、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：与seq id no:41、seq idno:42、seq id no:43、seq id no:44、seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47、seq idno:49或seq id no:59具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
28、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：与seq id no:41具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
29、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：与seq id no:42具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
30、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：与seq id no:59具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
31、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物或特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含scfv，所述scfv包含对应于本公开中所列scfv的氨基酸序列。
32、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物选自下组：fab、fab’、f(ab’)2、scfv、微型抗体(minibody)和vhh。在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物是fab。
33、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：(i)重链互补决定区1(vhcdr1)，其包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:61)；(ii)重链互补决定区2(vhcdr2)，其包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:62)；(iii)重链互补决定区3(vhcdr3)，其包含氨基酸序列vrhgnfgx1x2yvswfay(seq id no:67)，其中x1是n、a或e，且x2是s或a；(iv)轻链互补决定区1(vlcdr1)，其包含氨基酸序列tgavttsn(seq id no:64)；(v)轻链互补决定区2(vlcdr2)，其包含氨基酸序列gt；和(vi)轻链互补决定区3(vlcdr3)，其包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:66)。
34、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:61)的vhcdr1；包含氨基酸序列irskynnyat(seq idno:62)的vhcdr2；包含氨基酸序列vrhgnfgnsyvswfay(seq id no:63)的vhcdr3；包含氨基酸序列tgavttsn(seq id no:64)的vlcdr1；包含氨基酸序列gt的vlcdr2；和包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:66)的vlcdr3。
35、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:61)的vhcdr1；包含氨基酸序列irskynnyat(seq idno:62)的vhcdr2；包含氨基酸序列vrhgnfgasyvswfay(seq id no:68)的vhcdr3；包含氨基酸序列tgavttsn(seq id no:64)的vlcdr1；包含氨基酸序列gt的vlcdr2；和包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:66)的vlcdr3。
36、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含(根据imgt独特编号方案)：vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3，其各自分别包含对应于本公开所列的重链可变结构域和轻链可变结构域的vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3序列的氨基酸序列。
37、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：与seq id no:71、seq id no:72、seq id no:73、seq id no:74、seq id no:75或seq id no:80具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列，和与seq id no:76、seq id no:77、seq idno:78、seq id no:79或seq id no:81具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
38、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：与seq id no:72具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列，和与seq id no:81具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
39、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：与seq id no:71具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列，和与seq id no:76具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
40、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，根据imgt独特编号方案，其包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域和轻链可变结构域各自包含分别对应于本发明所列出的重链可变结构域和轻链可变结构域的重链可变结构域和轻链可变结构域序列的氨基酸序列。
41、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：与seq id no:82或seq id no:83具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列，和与seq id no:84或seq id no:85具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列。
42、在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，根据imgt独特编号方案，其包含重链和轻链，所述重链和轻链各自包含分别对应于本发明所列出的重链和轻链的重链和轻链序列的氨基酸序列。
43、在一些实施方式中，桥接部分是功能性的或非功能性的。
44、在一些实施方式中，桥接部分包括链交换工程改造的结构域(seed)形式fc结构域或其功能性片段、免疫球蛋白fc结构域或其功能性片段、多肽接头或多肽铰链。
45、在一些实施方式中，seed形式fc结构域包含一种或多于一种效应子功能沉默突变。
46、在一些实施方式中，seed形式fc结构域包含：包含与seq id no:86、seq id no:117或seq id no:88具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列的多肽，和包含与seq id no:87、seq id no:118或seq id no:89具有至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)序列相同性的序列的多肽。
47、在一些实施方式中，桥接部分包含免疫球蛋白fc结构域。在一些实施方式中，免疫球蛋白fc结构域包含两个多肽臂，每个多肽臂包含一个或多于一个促进异二聚化的突变。
48、在一些实施方式中，免疫球蛋白fc结构域包含第一多肽臂和第二多肽臂，各自包含分别对应于本公开中列出的第一多肽臂和第二多肽臂的第一多肽臂和第二多肽臂序列的氨基酸序列。
49、在一些实施方式中，桥接部分在其n端还包含铰链。
50、在一些实施方式中，铰链包含多肽臂，所述多肽臂包含含有seq id no:92的氨基酸序列。
51、在一些实施方式中，铰链还包含第二多肽臂，所述第二多肽臂包含含有seq idno:90或seq id no:92的氨基酸序列。
52、在一些实施方式中，铰链包含多肽臂，所述多肽臂包含本公开所列出的氨基酸序列。在一些实施方式中，铰链还包含第二多肽臂，所述第二多肽臂包含本公开所列出的氨基酸序列。
53、在一些实施方式中，特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物通过接头多肽连接至桥接部分的c端。在一些实施方式中，特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物通过接头多肽连接至桥接部分的c端。在一些实施方式中，接头多肽包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
54、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含：(i)特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含：重链互补决定区1(vhcdr1)，其包含氨基酸序列gftftsya(seqid no:8)或氨基酸序列gfsittsgvs(seqid no:23)，重链互补决定区2(vhcdr2)，其包含氨基酸序列isgsgggt(seqid no:9)或氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)，重链互补决定区3(vhcdr3)，其包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)或氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)，轻链互补决定区1(vlcdr1)，其包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)或氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)，轻链互补决定区2(vlcdr2)，其包含氨基酸序列das或gas，和轻链互补决定区3(vlcdr3)，其包含氨基酸序列qqrsnwppxt(seq id no:13)，其中x是f、s、c、r、q、i、l、y或v，或氨基酸序列qqyknwppa(seqid no:28)；(ii)特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含：包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:61)的vhcdr1，包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:62)的vhcdr2，包含氨基酸序列vrhgnfgx1x2yvswfay(seq id no:67)的vhcdr3，其中x1是n、a或e，且x2是s或a，包含氨基酸序列tgavttsn(seq id no:64)的vlcdr1，包含氨基酸序列gt的vlcdr2和包含氨基酸序列alwysnlwv(seq idno:66)的vlcdr3；以及(iii)连接特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物和特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物的桥接部分，其中所述桥接部分包含：(a)包含氨基酸序列seq id no:90和seq idno:86或seq id no:92和seq id no:86的多肽臂，和(b)包含氨基酸序列seq id no:90和seq id no:87，或seq idno:92和seq id no:87的第二多肽臂。
55、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含连接至桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物。在一些实施方式中，特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：vhcdr1，其包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)或氨基酸序列gfsittsgvs(seq id no:23)，vhcdr2，其包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)或氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)，vhcdr3，其包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)或氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)，vlcdr1，其包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)或氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)，vlcdr2，其包含氨基酸序列das或gas，和vlcdr3，其包含氨基酸序列qqrsnwppxt(seq id no:13)，其中x是f、s、c、r、q、i、l、y或v，或氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)。
56、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含：(i)特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含：包含氨基酸序列gftftsya(seq idno:8)的vhcdr1、包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)的vhcdr2、包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)的vhcdr3、包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)的vlcdr1、包含氨基酸序列das的vlcdr2和包含氨基酸序列qqrsnwppst(seq id no:15)的vlcdr3；(ii)特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含：包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:61)的vhcdr1、包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:62)的vhcdr2、包含氨基酸序列vrhgnfgnsyvswfay(seqid no:63)的vhcdr3、包含氨基酸序列tgavttsn(seq id no:64)的vlcdr1、包含氨基酸序列gt的vlcdr2和包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:66)的vlcdr3；(iii)将特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物的n端与特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物的c端连接的桥接部分，其中所述桥接部分包含：(a)包含氨基酸序列seqidno:90和seq id no:86的多肽臂，和(b)包含氨基酸序列seq id no:92和seq id no:87的第二多肽臂；以及(iv)连接至桥接部分n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物，其包含：包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)的vhcdr1、包含氨基酸序列isgsgggt(seqid no:9)的vhcdr2、包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)的vhcdr3、包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)的vlcdr1、包含氨基酸序列das的vlcdr2和包含氨基酸序列qqrsnwppst(seq id no:15)的vlcdr3。
57、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含：(i)特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含：包含氨基酸序列gftftsya(seq idno:8)的vhcdr1、包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)的vhcdr2、包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)的vhcdr3、包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)的vlcdr1、包含氨基酸序列das的vlcdr2和包含氨基酸序列qqrsnwppft(seq id no:14)的vlcdr3；(ii)特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含：包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:61)的vhcdr1、包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:62)的vhcdr2、包含氨基酸序列vrhgnfgnsyvswfay(seqid no:63)的vhcdr3、包含氨基酸序列tgavttsn(seq id no:64)的vlcdr1、包含氨基酸序列gt的vlcdr2和包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:66)的vlcdr3；(iii)将特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物的n端与特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物的c端连接的桥接部分，其中所述桥接部分包含：(a)包含氨基酸序列seqidno:90和seq id no:86的多肽臂，和(b)包含氨基酸序列seq id no:92和seq id no:87的第二多肽臂；以及(iv)连接至桥接部分n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物，其包含：包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)的vhcdr1、包含氨基酸序列isgsgggt(seqid no:9)的vhcdr2、包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)的vhcdr3、包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)的vlcdr1、包含氨基酸序列das的vlcdr2和包含氨基酸序列qqrsnwppft(seq id no:14)的vlcdr3。
58、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含：(i)特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含：包含氨基酸序列gfsittsgvs(seqid no:23)的vhcdr1、包含氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)的vhcdr2、包含氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)的vhcdr3、包含氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)的vlcdr1、包含氨基酸序列gas的vlcdr2和包含氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)的vlcdr3；(ii)特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含：包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:61)的vhcdr1、包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:62)的vhcdr2、包含氨基酸序列vrhgnfgnsyvswfay(seq id no:63)的vhcdr3、包含氨基酸序列tgavttsn(seq id no:64)的vlcdr1、包含氨基酸序列gt的vlcdr2和包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:66)的vlcdr3；(iii)将特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物的c端与特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物的n端连接的桥接部分，其中所述桥接部分包含：(a)包含氨基酸序列seq id no:90和seq id no:86的多肽臂，和(b)包含氨基酸序列seq idno:92和seq id no:87的第二多肽臂；以及(iv)特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物，其包含：包含氨基酸序列gfsittsgvs(seq id no:23)的vhcdr1、包含氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)的vhcdr2、包含氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq idno:25)的vhcdr3、包含氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)的vlcdr1、包含氨基酸序列gas的vlcdr2和包含氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)的vlcdr3。
59、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含：(i)特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含：包含氨基酸序列gfsittsgvs(seqid no:23)的vhcdr1、包含氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)的vhcdr2、包含氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)的vhcdr3、包含氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)的vlcdr1、包含氨基酸序列gas的vlcdr2和包含氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)的vlcdr3；(ii)特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含：包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:61)的vhcdr1、包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:62)的vhcdr2、包含氨基酸序列vrhgnfgnsyvswfay(seq id no:63)的vhcdr3、包含氨基酸序列tgavttsn(seq id no:64)的vlcdr1、包含氨基酸序列gt的vlcdr2和包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:66)的vlcdr3；(iii)将特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物的c端与特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物的n端连接的桥接部分，其中所述桥接部分包含：(a)包含氨基酸序列seq id no:92和seq id no:86的多肽臂，和(b)包含氨基酸序列seq idno:92和seq id no:87的第二多肽臂；以及(iv)连接至桥接部分n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物，其包含：包含氨基酸序列gfsittsgvs(seq idno:23)的vhcdr1、包含氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)的vhcdr2、包含氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)的vhcdr3、包含氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)的vlcdr1、包含氨基酸序列gas的vlcdr2和包含氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)的vlcdr3。
60、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含：(i)特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)，所述重链可变结构域(vh)包含氨基酸序列seq id no:29或seq id no:39，所述轻链可变结构域(vl)包含氨基酸序列seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33；seq id no:34、seqid no:35、seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38或seq id no:40；(ii)特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含vh和vl，所述vh包含氨基酸序列seq idno:71、seq id no:72、seq id no:73、seq id no:74、seqid no:75或seq id no:80，所述vl包含氨基酸序列seq id no:76、seq idno:77、seq id no:78、seq id no:79或seq id no:81；以及(iii)将特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物与特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接的桥接部分，其中所述桥接部分包含：(a)多肽臂，其包含氨基酸序列seq id no:90和seq id no:86或seq id no:92和seq id no:86，以及(b)第二多肽臂，其包含氨基酸序列seq id no:90和seq id no:87或seq id no:92和seqid no:87。
61、在一些实施方式中，特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)，所述重链可变结构域(vh)包含氨基酸序列seq id no:29或seq id no:39，所述轻链可变结构域(vl)包含氨基酸序列seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33；seq id no:34、seq id no:35、seq idno:36、seq id no:37、seq id no:38或seq id no:40。
62、在一些实施方式中，本发明的蛋白质包含：(i)特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含含有氨基酸序列seq id no:29的vh，和含有氨基酸序列seq idno:31的vl；(ii)特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含含有氨基酸序列seq id no:71的vh，和含有氨基酸序列seq id no:76的vl；(iii)将特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物的n端与特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物c端连接的桥接部分，其中所述桥接部分包含：(a)包含氨基酸序列seq id no:92的位于其n端的两个多肽，和(b)包含氨基酸序列seq id no:86的多肽和包含氨基酸序列seqid no:87的多肽，其中所述桥接部分包含：(1)多肽臂，其包含氨基酸序列seq id no:90和seq id no:86，和(2)第二多肽臂，其包含氨基酸序列seq id no:92和seq id no:87；以及(iv)连接至桥接部分n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物，其包含含有氨基酸序列seq id no:29的vh和含有氨基酸序列seqid no:31的vl。
63、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含：(i)特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含含有氨基酸序列seq id no:29的vh，和含有氨基酸序列seq idno:30的vl；(ii)特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物，其包含含有氨基酸序列seq id no:71的vh，和含有氨基酸序列seq id no:76的vl；(iii)将特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物的n端与特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物c端连接的桥接部分，其中所述桥接部分包含：(a)多肽臂，其包含氨基酸序列seq idno:90和seq id no:86，和(b)第二多肽臂，其包含氨基酸序列seq id no:92和seq id no:87；和(iv)连接至桥接部分n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物，其包含含有氨基酸序列seq id no:29的vh和含有氨基酸序列seq id no:30的vl。
64、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含：(i)特异性结合ror1的scfv，其包含氨基酸序列seq id no:42；(ii)特异性结合cd3的fab，其包含含有氨基酸序列seq id no:83的重链和含有氨基酸序列seq id no:85的轻链；(iii)将特异性结合ror1的scfv的n端与特异性结合cd3的fab的c端连接的桥接部分，其中所述桥接部分包含：(a)包含氨基酸序列seqid no:90和seq id no:86的多肽臂，和(b)包含氨基酸序列seq id no:92和seq idno:87的第二多肽臂；以及连接至桥接部分n端的特异性结合ror1的第二scfv，其包含氨基酸序列seq id no:42。
65、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含：(i)特异性结合ror1的scfv，其包含氨基酸序列seq id no:41；(ii)特异性结合cd3的fab，其包含含有氨基酸序列seq id no:83的重链和含有氨基酸序列seq id no:85的轻链；(iii)将特异性结合ror1的scfv的n端与特异性结合cd3的fab的c端连接的桥接部分，其中所述桥接部分包含：(a)包含氨基酸序列seqid no:90和seq id no:86的多肽臂，和(b)包含氨基酸序列seq id no:92和seq idno:87的第二多肽臂；以及(iv)连接至桥接部分n端的特异性结合ror1的第二scfv，其包含氨基酸序列seq id no:41。
66、在一些实施方式中，本公开的蛋白质包含第一重链、第二重链和轻链，其各自包含分别对应于本公开列出的第一重链的序列、第二重链的序列和轻链的序列的氨基酸序列。
67、在一些实施方式中，本公开的蛋白质对于cd3结合的kd为10nm至50nm，或15nm至20nm，如在生物层干涉试验中测得的。
68、在一些实施方式中，在使用活化的t细胞的cd3结合试验中，本公开的蛋白质的ec50为20nm至50nm、或25nm至35nm。在一些实施方式中，本公开的蛋白质结合ror1的ig样结构域。在一些实施方式中，本公开的蛋白质不结合ror1的卷曲(frizzled)和/或kringle结构域。
69、在一些实施方式中，本公开的蛋白质对于结合taa的kd为80nm至120nm、95nm至105nm、1nm至10nm或3nm至5nm，如在生物层干涉试验中测得的。在一些实施方式中，本公开的蛋白质对于ror1结合的kd为80nm至120nm、95nm至105nm、1nm至10nm或3nm至5nm，如在生物层干涉试验中测得的。
70、在一些实施方式中，在使用表达约3.5x 104taa分子/细胞的细胞的taa结合试验中，本公开的蛋白质的ec50为80nm至120nm、90nm至110nm、1nm至10nm或2nm至5nm。在一些实施方式中，在使用表达约3.5x 104ror1分子/细胞的细胞的ror1结合试验中，本公开的蛋白质的ec50为80nm至120nm、90nm至110nm、1nm至10nm或2nm至5nm。
71、在一些实施方式中，本公开的蛋白质用于治疗实体瘤。在一些实施方式中，本公开的蛋白质用于治疗血液肿瘤。
72、在一些实施方式中，本公开的蛋白质诱导t细胞裂解性颗粒脱颗粒。在一些实施方式中，对于在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的t细胞介导的表达taa的细胞的细胞毒性，本公开的蛋白质的ec50为160pm至200pm、165pm至190pm、25pm至50pm或30pm至40pm。
73、在一些实施方式中，对于在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的t细胞介导的表达ror1的细胞的细胞毒性，本公开的蛋白质的ec50为160pm至200pm、165pm至190pm、25pm至50pm或30pm至40pm。在一些实施方式中，当以足以诱导t细胞介导的细胞毒性的浓度给予培养物时，本公开的蛋白质不诱导t细胞促炎细胞因子的产生和/或释放的显著增加。
74、在一些实施方式中，如在t细胞/肿瘤细胞共培养ifnγ产生试验中所测量的，本公开的蛋白质的ec50为1000pm至2000pm、1400pm至1800pm、200pm至600pm或300pm至500pm。
75、在一些实施方式中，如在t细胞/肿瘤细胞共培养ifnγ产生试验中所测量的，与参考t细胞结合物(binder)相比，本公开的蛋白质具有20％至60％、35％至45％、或45％至55％的c最大。
76、在一些实施方式中，当给予新鲜分离的外周单核细胞(pbmc)培养物或以高密度预培养48小时的pbmc时，本公开的蛋白质不诱导显著水平的tnfα或il2释放。
77、在一些实施方式中，如在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验和ifnγ产生试验中所测量的，用参考t细胞结合物标准化，本公开的蛋白质细胞因子释放与杀伤解偶联比率为1:2至1:4、1:2.2或1:2.9。
78、在一些实施方式中，如在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中测量的，本公开的蛋白质诱导的肿瘤连续杀伤指数为3至5、3.4至3.6或3.8至4.2。在一些实施方式中，本公开的蛋白质与食蟹猴cd3交叉反应但不与小鼠cd3交叉反应。在一些实施方式中，本公开的蛋白质与食蟹猴taa和小鼠taa交叉反应。在一些实施方式中，本公开的蛋白质与食蟹猴ror1和小鼠ror1交叉反应。
79、本公开还提供了包含本发明的蛋白质和药学上可接受的运载体的制剂。
80、本公开还提供了编码本发明蛋白质的核酸。
81、本公开提供了包含一种或多种编码本发明的蛋白质的核酸的细胞。
82、本公开提供了治疗患者的癌症的方法，包括向患者给予本发明的蛋白质或制剂。在一些实施方式中，癌症是血液癌症或实体瘤癌症。在一些实施方式中，癌症选自下组：慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、肺癌、支气管癌、结肠癌、直肠癌、黑素瘤、肾癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、口腔癌、咽癌、毛细胞白血病、肝癌、肝内胆管癌和甲状腺癌。
83、在本公开的一些实施方式中，抗体或其功能性片段，按照imgt独特编号方案，其包含：重链可变互补决定区1(vhcdr1)，其包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)，重链可变互补决定区2(vhcdr2)，其包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)，重链可变互补决定区3(vhcdr3)，其包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)，轻链可变互补决定区1(vlcdr1)，其包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)，轻链可变互补决定区2(vlcdr2)，其包含氨基酸序列das，以及轻链可变互补决定区3(vlcdr3)，其包含氨基酸序列qqrsnwppft(seq id no:14)。
84、在一些实施方式中，抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与seq id no:29至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)相同的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含与seq id no:30至少90％相同(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的氨基酸序列。
85、在一些实施方式中，按照imgt独特编号方案，本公开的抗体包含：重链可变互补决定区1(vhcdr1)，其包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)，重链可变互补决定区2(vhcdr2)，其包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)，重链可变互补决定区3(vhcdr3)，其包含氨基酸序列aqgssifdy(seqid no:10)，轻链可变互补决定区1(vlcdr1)，其包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)，轻链可变互补决定区2(vlcdr2)，其包含氨基酸序列das，以及轻链可变互补决定区3(vlcdr3)，其包含氨基酸序列qqrsnwppst(seq id no:15)。在一些实施方式中，抗体包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含与seqid no:39至少90％(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)相同的氨基酸序列，所述轻链可变结构域包含与seq id no:40至少90％相同(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％)的氨基酸序列。在一些实施方式中，抗体是人igg1抗体。
86、本公开的其他实施方式和详细内容可见后文。
1.一种蛋白质，其包含：
2.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的c端，并且所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的n端。
3.如权利要求2所述的蛋白质，其还包含连接至所述桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物。
4.如权利要求3所述的蛋白质，其中所述桥接部分包含两个多肽臂，且其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物以及特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物分别连接至同一多肽臂的c端和n端，并且所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至第二多肽臂的n端。
5.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的n端，并且所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的c端。
6.如权利要求5所述的蛋白质，其还包含连接至所述桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物。
7.如权利要求6所述的蛋白质，其中所述桥接部分包含两个多肽臂，且其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物以及特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物分别连接至样品多肽臂的n端和c端，并且所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物连接至第二多肽臂的n端。
8.如权利要求1-7中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物选自下组：单链可变片段(scfv)、fab、fab’、f(ab’)2、微型抗体和纳米抗体(vhh)。
9.如权利要求8所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物是scfv。
10.如权利要求3、4、6或7中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物选自下组：scfv、fab、fab’、f(ab’)2、微型抗体和vhh。
11.如权利要求10所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物是scfv。
12.如权利要求1-11中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：
13.如权利要求3、4、6、7或10-12中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：
14.如权利要求1-13中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)的vhcdr1；包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)的vhcdr2；包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)的vhcdr3；包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)的vlcdr1；包含氨基酸序列das的vlcdr2；和包含氨基酸序列qqrsnwppft(seq id no:14)的vlcdr3。
15.如权利要求3、4、6、7或10-14中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)的vhcdr1；包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)的vhcdr2；包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)的vhcdr3；包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)的vlcdr1；包含氨基酸序列das的vlcdr2；和包含氨基酸序列qqrsnwppft(seq id no:14)的vlcdr3。
16.如权利要求1-13中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)的vhcdr1；包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)的vhcdr2；包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)的vhcdr3；包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)的vlcdr1；包含氨基酸序列das的vlcdr2；和包含氨基酸序列qqrsnwppst(seq id no:15)的vlcdr3。
17.如权利要求3、4、6、7、10-13或16中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：包含氨基酸序列gftftsya(seq idno:8)的vhcdr1；包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)的vhcdr2；包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)的vhcdr3；包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)的vlcdr1；包含氨基酸序列das的vlcdr2；和包含氨基酸序列qqrsnwppst(seq id no:15)的vlcdr3。
18.如权利要求1-13中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：包含氨基酸序列gfsittsgvs(seq id no:23)的vhcdr1；包含氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)的vhcdr2；包含氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq idno:25)的vhcdr3；包含氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)的vlcdr1；包含氨基酸序列gas的vlcdr2；和包含氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)的vlcdr3。
19.如权利要求3、4、6、7、10-13或18中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：包含氨基酸序列gfsittsgvs(seq idno:23)的vhcdr1；包含氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)的vhcdr2；包含氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)的vhcdr3；包含氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)的vlcdr1；包含氨基酸序列gas的vlcdr2；和包含氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)的vlcdr3。
20.如权利要求1-11中任一项所述的蛋白质，根据imgt独特编号方案，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3，其各自分别包含对应于表1中所列的重链可变结构域和轻链可变结构域的vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3序列的氨基酸序列。
21.如权利要求3、4、6、7、10、11或20中任一项所述的蛋白质，根据imgt独特编号方案，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3，其各自分别包含对应于表1中所列的重链可变结构域和轻链可变结构域的vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3序列的氨基酸序列。
22.如权利要求1-13中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:29或seq id no:39具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seqid no:35、seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38或seq id no:40具有至少90％序列相同性的序列。
23.如权利要求3、4、6、7、10-13或22中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含与seq id no:29或seq id no:39具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33、seq id no:34、seq id no:35、seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38或seq idno:40具有至少90％序列相同性的序列。
24.如权利要求1-15、22或23中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:29具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:30具有至少90％序列相同性的序列。
25.如权利要求3、4、6、7、10-15或22-24中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含与seq id no:29具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:30具有至少90％序列相同性的序列。
26.如权利要求1-13、16、17、22或23中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:29具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:31具有至少90％序列相同性的序列。
27.如权利要求3、4、6、7、10-13、16、17、22、23或26中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含与seq id no:29具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:31具有至少90％序列相同性的序列。
28.如权利要求1-13、18、19、22或23中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:39具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:40具有至少90％序列相同性的序列。
29.如权利要求3、4、6、7、10-13、18、19、22、23或28中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含与seq id no:39具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:40具有至少90％序列相同性的序列。
30.如权利要求1-11、20或21中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其各自包含分别对应于表2中列出的重链可变结构域和轻链可变结构域的重链可变结构域和轻链可变结构域序列的氨基酸序列。
31.如权利要求3、4、6、7、10、11、20、21或30中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其各自包含分别对应于表2中列出的重链可变结构域和轻链可变结构域的重链可变结构域和轻链可变结构域序列的氨基酸序列。
32.如权利要求1-31中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含接头多肽，所述接头多肽包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
33.如权利要求3、4、6、7或10-32中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含接头多肽，所述接头多肽包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
34.如权利要求1-13、22、23、32或33中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43、seq id no:44、seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47、seq id no:49或seq id no:59具有至少90％序列相同性的序列。
35.如权利要求3、4、6、7、10-13、22、23或32-34中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含与seq id no:41、seq idno:42、seq id no:43、seq id no:44、seq id no:45、seq id no:46、seq id no:47、seq idno:49或seq id no:59具有至少90％序列相同性的序列。
36.如权利要求1-15、22-25或32-35中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:41具有至少90％序列相同性的序列。
37.如权利要求3、4、6、7、10-15、22-25或32-36中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含与seq id no:41具有至少90％序列相同性的序列。
38.如权利要求1-13、16、17、22、23、26、27或32-35中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:42具有至少90％序列相同性的序列。
39.如权利要求3、4、6、7、10-13、16、17、22、23、26、27、32-35或38中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含与seq idno:42具有至少90％序列相同性的序列。
40.如权利要求1-13、18、19、22、23、28、29或32-35中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:59具有至少90％序列相同性的序列。
41.如权利要求3、4、6、7、10-13、18、19、22、23、28、29、32-35或40中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含与seq idno:59具有至少90％序列相同性的序列。
42.如权利要求1-11、20、21、30或31中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含scfv，所述scfv包含与表3中所列出的scfv对应的氨基酸序列。
43.如权利要求3、4、6、7、10、11、20、21、30、31或42中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含scfv，所述scfv包含与表3中所列出的scfv对应的氨基酸序列。
44.如权利要求1-43中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物选自下组：fab、fab’、f(ab’)2、scfv、微型抗体和vhh。
45.如权利要求44所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物是fab。
46.如权利要求1-45中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：
47.如权利要求1-46中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:61)的vhcdr1；包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:62)的vhcdr2；包含氨基酸序列vrhgnfgnsyvswfay(seq idno:63)的vhcdr3；包含氨基酸序列tgavttsn(seq id no:64)的vlcdr1；包含氨基酸序列gt的vlcdr2；和包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:66)的vlcdr3。
48.如权利要求1-46中任一项所述的蛋白质，其中特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：包含氨基酸序列gftfntya(seq id no:61)的vhcdr1；包含氨基酸序列irskynnyat(seq id no:62)的vhcdr2；包含氨基酸序列vrhgnfgasyvswfay(seq id no:68)的vhcdr3；包含氨基酸序列tgavttsn(seq id no:64)的vlcdr1；包含氨基酸序列gt的vlcdr2；和包含氨基酸序列alwysnlwv(seq id no:66)的vlcdr3。
49.如权利要求1-45中任一项所述的蛋白质，根据imgt独特编号方案，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含：vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3，其各自分别包含对应于表4中所列的重链可变结构域和轻链可变结构域的vhcdr1、vhcdr2、vhcdr3、vlcdr1、vlcdr2和vlcdr3序列的氨基酸序列。
50.如权利要求1-48中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:71、seq id no:72、seq id no:73、seq id no:74、seq id no:75或seq id no:80具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:76、seq idno:77、seq id no:78、seq id no:79或seq id no:81具有至少90％序列相同性的序列。
51.如权利要求1-48或50中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:72具有至少90％序列相同性的序列和与seqid no:81具有至少90％序列相同性的序列。
52.如权利要求1-48或50中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:71具有至少90％序列相同性的序列和与seqid no:76具有至少90％序列相同性的序列。
53.如权利要求1-45或49中任一项所述的蛋白质，根据imgt独特编号方案，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含重链可变结构域和轻链可变结构域，其各自包含分别对应于表5中列出的重链可变结构域和轻链可变结构域的重链可变结构域和轻链可变结构域序列的氨基酸序列。
54.如权利要求1-48或50中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:82或seq id no:83具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:84或seq id no:85具有至少90％序列相同性的序列。
55.如权利要求1-48、50或54中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:82具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:84具有至少90％序列相同性的序列。
56.如权利要求1-48、50或54中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含与seq id no:83具有至少90％序列相同性的序列和与seq id no:85具有至少90％序列相同性的序列。
57.如权利要求1-45、49或53中任一项所述的蛋白质，根据imgt独特编号方案，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物包含重链和轻链，其各自包含分别对应于表6中列出的重链和轻链的重链和轻链序列的氨基酸序列。
58.如权利要求1-57中任一项所述的蛋白质，其中所述桥接部分是功能性的或非功能性的。
59.如权利要求1-58中任一项所述的蛋白质，其中桥接部分包括链交换工程改造的结构域(seed)形式fc结构域或其功能性片段、免疫球蛋白fc结构域或其功能性片段、多肽接头或多肽铰链。
60.如权利要求59所述的蛋白质，其中所述桥接部分包含seed形式fc结构域。
61.如权利要求59或60所述的蛋白质，其中所述seed形式fc结构域包含一种或多于一种效应子功能沉默突变。
62.如权利要求59-61中任一项所述的蛋白质，其中所述seed形式fc结构域包含包含与seq id no:86、seq id no:117或seq id no:88具有至少90％序列相同性的序列的多肽，和包含与seq id no:87、seq id no:118或seq id no:89具有至少90％序列相同性的序列的多肽。
63.如权利要求59-62中任一项所述的蛋白质，其中所述seed形式fc结构域包含包含seq id no:86或由seq id no:86组成的多肽，和包含seq id no:87或由seq id no:87组成的多肽。
64.如权利要求59所述的蛋白质，其中所述桥接部分包含免疫球蛋白fc结构域。
65.如权利要求59或64所述的蛋白质，其中免疫球蛋白fc结构域包含两个多肽臂，每个多肽臂包含一个或多于一个促进异二聚化的突变。
66.如权利要求59、64或65所述的蛋白质，其中所述免疫球蛋白fc结构域包含第一多肽臂和第二多肽臂，其各自包含分别对应于表8中列出的第一多肽臂和第二多肽臂的第一多肽臂和第二多肽臂序列的氨基酸序列。
67.如权利要求60-66中任一项所述的蛋白质，其中所述桥接部分还包含位于其n端的铰链。
68.如权利要求67所述的蛋白质，其中所述铰链包含多肽臂，所述多肽臂包含含有seqid no:92的氨基酸序列。
69.如权利要求68所述的蛋白质，其中所述铰链还包含第二多肽臂，所述第二多肽臂包含含有seq id no:90或seq id no:92的氨基酸序列。
70.如权利要求67所述的蛋白质，其中所述铰链包含多肽臂，所述多肽臂包含表9所列出的氨基酸序列。
71.如权利要求68所述的蛋白质，其中所述铰链还包含第二多肽臂，所述第二多肽臂包含表9所列出的氨基酸序列。
72.如权利要求1-4或8-71中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物通过接头多肽连接至所述桥接部分的c端。
73.如权利要求1或5-71中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物通过接头多肽连接至所述桥接部分的c端。
74.如权利要求72或73所述的蛋白质，其中所述接头多肽包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
75.一种蛋白质，其包含：
76.如权利要求75所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的c端，并且所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的n端。
77.如权利要求76所述的蛋白质，其还包含连接至所述桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物。
78.如权利要求77所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：vhcdr1，其包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)或氨基酸序列gfsittsgvs(seq id no:23)，vhcdr2，其包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)或氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)，vhcdr3，其包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)或氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)，vlcdr1，其包含氨基酸序列qsvssy(seq idno:11)或氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)，vlcdr2，其包含氨基酸序列das或gas，和vlcdr3，其包含氨基酸序列qqrsnwppxt(seq id no:13)，其中x是f、s、c、r、q、i、l、y或v，或氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)。
79.如权利要求76-78中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物通过接头多肽连接至所述桥接部分的c端。
80.如权利要求79所述的蛋白质，其中所述接头多肽包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
81.如权利要求75所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的n端，并且所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的c端。
82.如权利要求81所述的蛋白质，其还包含连接至所述桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物。
83.如权利要求82所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含：vhcdr1，其包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)或氨基酸序列gfsittsgvs(seq id no:23)，vhcdr2，其包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)或氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)，vhcdr3，其包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)或氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)，vlcdr1，其包含氨基酸序列qsvssy(seq idno:11)或氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)，vlcdr2，其包含氨基酸序列das或gas，和vlcdr3，其包含氨基酸序列qqrsnwppxt(seq id no:13)，其中x是f、s、c、r、q、i、l、y或v，或氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)。
84.如权利要求81-83中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物通过接头多肽连接至所述桥接部分的c端。
85.如权利要求84所述的蛋白质，其中所述接头多肽包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
86.如权利要求75-80中任一项所述的蛋白质，其包含：
87.如权利要求75-80中任一项所述的蛋白质，其包含：
88.如权利要求75-80中任一项所述的蛋白质，其包含：
89.如权利要求75-80中任一项所述的蛋白质，其包含：
90.如权利要求75-80中任一项所述的蛋白质，其包含：
91.如权利要求81-85中任一项所述的蛋白质，其包含：
92.如权利要求81-85中任一项所述的蛋白质，其包含：
93.一种蛋白质，其包含：
94.如权利要求93所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的c端，并且特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的n端。
95.如权利要求94所述的蛋白质，其还包含连接至所述桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物。
96.如权利要求95所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)，所述重链可变结构域(vh)包含氨基酸序列seq id no:29或seq id no:39，所述轻链可变结构域(vl)包含氨基酸序列seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33；seq id no:34、seq idno:35、seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38或seq id no:40。
97.如权利要求94-96中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物通过接头多肽连接至所述桥接部分的c端。
98.如权利要求97所述的蛋白质，其中所述接头多肽包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
99.如权利要求93所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的n端，并且特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物连接至所述桥接部分的c端。
100.如权利要求99所述的蛋白质，其还包含连接至所述桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物。
101.如权利要求100所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二多肽或两种或更多种多肽的第二复合物包含重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)，所述重链可变结构域(vh)包含氨基酸序列seq id no:29或seq id no:39，所述轻链可变结构域(vl)包含氨基酸序列seq id no:30、seq id no:31、seq id no:32、seq id no:33；seq id no:34、seqid no:35、seq id no:36、seq id no:37、seq id no:38或seq id no:40。
102.如权利要求99-101中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的多肽或两种或更多种多肽的复合物通过接头多肽连接至所述桥接部分的c端。
103.如权利要求102所述的蛋白质，其中所述接头多肽包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
104.如权利要求93-98中任一项所述的蛋白质，其包含：
105.如权利要求93-98中任一项所述的蛋白质，其包含：
106.如权利要求93-98中任一项所述的蛋白质，其包含：
107.如权利要求93-98中任一项所述的蛋白质，其包含：
108.如权利要求93-98中任一项所述的蛋白质，其包含：
109.如权利要求99-103中任一项所述的蛋白质，其包含：
110.如权利要求99-103中任一项所述的蛋白质，其包含：
111.一种蛋白质，其包含：
112.如权利要求111所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的scfv被连接至所述桥接部分的c端，并且特异性结合cd3的fab连接至所述桥接部分的n端。
113.如权利要求112所述的蛋白质，其还包含连接至所述桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二scfv。
114.如权利要求113所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二scfv包含氨基酸序列seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43、seq id no:44、seq id no:45、seq idno:46、seq id no:47、seq id no:48、seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq idno:52、seq id no:53、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56、seq id no:57、seq idno:58、seq id no:59或seq id no:60。
115.如权利要求112-114中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的scfv通过接头多肽连接至所述桥接部分的c端。
116.如权利要求115所述的蛋白质，其中所述接头多肽包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
117.如权利要求111所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的scfv被连接至所述桥接部分的n端，并且特异性结合cd3的fab连接至所述桥接部分的c端。
118.如权利要求117所述的蛋白质，其还包含连接至所述桥接部分的n端的特异性结合ror1的第二scfv。
119.如权利要求118所述的蛋白质，其中所述特异性结合ror1的第二scfv包含氨基酸序列seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43、seq id no:44、seq id no:45、seq idno:46、seq id no:47、seq id no:48、seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq idno:52、seq id no:53、seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56、seq id no:57、seq idno:58、seq id no:59或seq id no:60。
120.如权利要求117-119中任一项所述的蛋白质，其中所述特异性结合cd3的fab通过接头多肽连接至所述桥接部分的c端。
121.如权利要求120所述的蛋白质，其中所述接头多肽包含(ggggs)n(seq id no:1)序列，其中n是1-12。
122.如权利要求112-116中任一项所述的蛋白质，其包含：
123.如权利要求112-116中任一项所述的蛋白质，其包含：
124.如权利要求112-116中任一项所述的蛋白质，其包含：
125.如权利要求112-116中任一项所述的蛋白质，其包含：
126.如权利要求112-116中任一项所述的蛋白质，其包含：
127.如权利要求117-121中任一项所述的蛋白质，其包含：
128.如权利要求117-121中任一项所述的蛋白质，其包含：
129.一种蛋白质，其包含与选自下组的氨基酸序列具有至少90％序列相同性的多肽：seq id no:95、seq id no:98、seq id no:101、seq id no:104、seq id no:219、seq idno:109和seq id no:220。
130.一种蛋白质，其包含与选自下组的氨基酸序列具有至少90％序列相同性的多肽：
131.一种蛋白质，其包含含有氨基酸序列seq id no:94的多肽、含有氨基酸序列seqid no:95的多肽和含有氨基酸序列seq id no:84的多肽。
132.一种蛋白质，其包含含有氨基酸序列seq id no:97的多肽、含有氨基酸序列seqid no:98的多肽和含有氨基酸序列seq id no:85的多肽。
133.一种蛋白质，其包含含有氨基酸序列seq id no:100的多肽、含有氨基酸序列seqid no:101的多肽和含有氨基酸序列seq id no:84的多肽。
134.一种蛋白质，其包含含有氨基酸序列seq id no:103的多肽、含有氨基酸序列seqid no:104的多肽和含有氨基酸序列seq id no:85的多肽。
135.一种蛋白质，其包含含有氨基酸序列seq id no:218的多肽、含有氨基酸序列seqid no:219的多肽和含有氨基酸序列seq id no:85的多肽。
136.一种蛋白质，其包含含有氨基酸序列seq id no:109的多肽、含有氨基酸序列seqid no:110的多肽和含有氨基酸序列seq id no:84的多肽。
137.一种蛋白质，其包含含有氨基酸序列seq id no:220的多肽、含有氨基酸序列seqid no:221的多肽和含有氨基酸序列seq id no:84的多肽。
138.一种蛋白质，其包含第一重链、第二重链和轻链，其各自包含分别对应于表11列出的第一重链的序列、第二重链的序列和轻链的序列的氨基酸序列。
139.如权利要求1-138中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质结合cd3的kd为10nm至50nm，如在生物层干涉试验中测得的。
140.如权利要求1-139中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质结合cd3的kd为15nm至20nm，如在生物层干涉试验中测得的。
141.如权利要求1-140中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质在使用活化的t细胞的cd3结合试验中具有20nm至50nm的ec50。
142.如权利要求1-141中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质在使用活化的t细胞的cd3结合试验中具有25nm至35nm的ec50。
143.如权利要求1-142中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质结合ror1的ig样结构域。
144.如权利要求1-143中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质不结合ror1的卷曲和/或kringle结构域。
145.如权利要求1-144中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质结合ror1的kd为80nm至120nm，如在生物层干涉试验中测得的。
146.如权利要求1-145中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质结合ror1的kd为95nm至105nm，如在生物层干涉试验中测得的。
147.如权利要求1-144中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质结合ror1的kd为1nm至10nm，如在生物层干涉试验中测得的。
148.如权利要求1-144中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质结合ror1的kd为3nm至5nm，如在生物层干涉试验中测得的。
149.如权利要求1-148中任一项所述的蛋白质，其中在使用表达约3.5x104ror1分子/细胞的细胞的ror1结合试验中，所述蛋白质具有80nm至120nm的ec50。
150.如权利要求149所述的蛋白质，其中在使用表达约3.5x104ror1分子/细胞的细胞的ror1结合试验中，所述蛋白质具有90nm至110nm的ec50。
151.如权利要求1-148中任一项所述的蛋白质，其中在使用表达约3.5x104ror1分子/细胞的细胞的ror1结合试验中，所述蛋白质具有1nm至10nm的ec50。
152.如权利要求1-148中任一项所述的蛋白质，其中在使用表达约3.5x104ror1分子/细胞的细胞的ror1结合试验中，所述蛋白质具有2nm至5nm的ec50。
153.如权利要求145、146、149或150中任一项所述的蛋白质用于治疗实体瘤的用途。
154.如权利要求147、148、151或152中任一项所述的蛋白质用于治疗血液肿瘤的用途。
155.如权利要求1-154中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质诱导t细胞裂解性颗粒脱颗粒。
156.如权利要求1-155中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的t细胞介导的对表达ror1的肿瘤细胞的细胞毒性，所述蛋白质具有160pm至200pm的ec50。
157.如权利要求156所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的t细胞介导的对表达ror1的肿瘤细胞的细胞毒性，所述蛋白质具有165pm至190pm的ec50。
158.如权利要求1-155中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的t细胞介导的对表达ror1的肿瘤细胞的细胞毒性，所述蛋白质具有25pm至50pm的ec50。
159.如权利要求158所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的t细胞介导的对表达ror1的肿瘤细胞的细胞毒性，所述蛋白质具有30pm至40pm的ec50。
160.如权利要求1-159中任一项所述的蛋白质，其中当以足以诱导t细胞介导的细胞毒性的浓度给予培养物时，所述蛋白质不诱导t细胞促炎细胞因子的产生和/或释放的显著增加。
161.如权利要求1-159中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养ifnγ产生试验中所测量的所述蛋白质具有1000pm至2000pm的ec50。
162.如权利要求161中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养ifnγ产生试验中所测量的所述蛋白质具有1400pm至1800pm的ec50。
163.如权利要求1-159中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养ifnγ产生试验中所测量的所述蛋白质具有200pm至600pm的ec50。
164.如权利要求163中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养ifnγ产生试验中所测量的所述蛋白质具有300pm至500pm的ec50。
165.如权利要求1-159中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养ifnγ产生试验中所测量的所述蛋白质相较于参考t细胞结合物具有20％至60％的c最大。
166.如权利要求165所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养ifnγ产生试验中所测量的所述蛋白质相较于参考t细胞结合物具有35％至45％的c最大。
167.如权利要求165所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养ifnγ产生试验中所测量的所述蛋白质相较于参考t细胞结合物具有45％至55％的c最大。
168.如权利要求1-167中任一项所述的蛋白质，其中当给予新鲜分离的外周单核细胞(pbmc)培养物时，所述蛋白质不诱导显著水平的tnfα释放。
169.如权利要求1-168中任一项所述的蛋白质，其中当给予以高密度预培养48小时的pbmc时，所述蛋白质不诱导显著水平的tnfα释放。
170.如利要求1-169中任一项所述的蛋白质，其中当给予新鲜分离的pbmc培养物时，所述蛋白质不诱导显著水平的il2释放。
171.如权利要求1-169中任一项所述的蛋白质，其中当给予以高密度预培养48小时的pbmc时，所述蛋白质不诱导显著水平的il2释放。
172.如权利要求1-171中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的，用参考t细胞结合物标准化，所述蛋白质具有1:2至1:4的细胞因子释放与杀伤解偶联比率。
173.如权利要求1-172中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的，用参考t细胞结合物标准化，所述蛋白质具有1:2.2的细胞因子释放与杀伤解偶联比率。
174.如权利要求1-172中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的，用参考t细胞结合物标准化，所述蛋白质具有1:2.9的细胞因子释放与杀伤解偶联比率。
175.如权利要求1-174中任一项所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的，所述蛋白质诱导3至5的肿瘤连续杀伤指数。
176.如权利要求175所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的，所述蛋白质诱导3.4至3.6的肿瘤连续杀伤指数。
177.如权利要求175所述的蛋白质，其中在t细胞/肿瘤细胞共培养杀伤试验中所测量的，所述蛋白质诱导3.8至4.2的肿瘤连续杀伤指数。
178.如权利要求1-177中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质与食蟹猴cd3交叉反应而不与小鼠cd3交叉反应。
179.如权利要求1-178中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质与食蟹猴ror1和小鼠ror1交叉反应。
180.一种制剂，其包含权利要求1-179中任一项所述的蛋白质和药学上可接受的运载体。
181.一种编码权利要求1至179中任一项所述蛋白质的核酸。
182.一种细胞，其包含一种或多种编码权利要求1-179中任一项所述蛋白质的核酸。
183.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包括给予所述患者如权利要求1-179中任一项所述的蛋白质或如权利要求180所述制剂。
184.如权利要求183所述的方法，其中所述癌症是血液癌症或实体瘤癌症。
185.如权利要求184所述的方法，其中所述癌症选自下组：慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、肺癌、支气管癌、结肠癌、直肠癌、黑素瘤、肾癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、子宫癌、乳腺癌、口腔癌、咽癌、毛细胞白血病、肝癌、肝内胆管癌和甲状腺癌。
186.如权利要求129所述蛋白质或其功能性片段在制备权利要求130所述的蛋白质中的用途。
187.编码权利要求129所述蛋白质或其功能性片段的核酸在制备权利要求130所述蛋白质中的用途。
188.一种抗体或其功能性片段，按照imgt独特编号方案，其包含：重链可变互补决定区1(vhcdr1)，其包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)，重链可变互补决定区2(vhcdr2)，其包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)，重链可变互补决定区3(vhcdr3)，其包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)，轻链可变互补决定区1(vlcdr1)，其包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)，轻链可变互补决定区2(vlcdr2)，其包含氨基酸序列das，以及轻链可变互补决定区3(vlcdr3)，其包含氨基酸序列qqrsnwppft(seq id no:14)。
189.如权利要求188所述的抗体，其中所述重链可变结构域包含与seq id no:29至少90％相同的氨基酸序列，和所述轻链包含与seq id no:30至少90％相同的氨基酸序列。
190.一种抗体或其功能性片段，按照imgt独特编号方案，其包含：重链可变互补决定区1(vhcdr1)，其包含氨基酸序列gftftsya(seq id no:8)，重链可变互补决定区2(vhcdr2)，其包含氨基酸序列isgsgggt(seq id no:9)，重链可变互补决定区3(vhcdr3)，其包含氨基酸序列aqgssifdy(seq id no:10)，轻链可变互补决定区1(vlcdr1)，其包含氨基酸序列qsvssy(seq id no:11)，轻链可变互补决定区2(vlcdr2)，其包含氨基酸序列das，以及轻链可变互补决定区3(vlcdr3)，其包含氨基酸序列qqrsnwppst(seq id no:15)。
191.如权利要求190所述的抗体，其中所述重链可变结构域包含与seq id no:29至少90％相同的氨基酸序列，和所述轻链可变结构域包含与seq id no:31至少90％相同的氨基酸序列。
192.一种抗体或其功能性片段，按照imgt独特编号方案，其包含：重链可变互补决定区1(vhcdr1)，其包含氨基酸序列gfsittsgvs(seq id no:23)，重链可变互补决定区2(vhcdr2)，其包含氨基酸序列iywdddk(seq id no:24)，重链可变互补决定区3(vhcdr3)，其包含氨基酸序列ahaprytpggyfdy(seq id no:25)，轻链可变互补决定区1(vlcdr1)，其包含氨基酸序列qsvssn(seq id no:26)，轻链可变互补决定区2(vlcdr2)，其包含氨基酸序列gas，以及轻链可变互补决定区3(vlcdr3)，其包含氨基酸序列qqyknwppa(seq id no:28)。
193.如权利要求192所述的抗体，其中所述重链可变结构域包含与seq id no:39至少90％相同的氨基酸序列，和所述轻链可变结构域包含与seq id no:40至少90％相同的氨基酸序列。
194.如权利要求188至193中任一项所述的抗体或其功能性片段，其中所述抗体是人igg1抗体。
