本发明属于生物，具体涉及一种高表达重组slc38a6表达载体及其构建方法和应用。
背景技术：
1、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，hcc)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，我国是hcc的高发地区，约占全球hcc总发病率的55％。随着精准医学时代的来临，肝癌个体化治疗不断进步，但我国肝癌的5年生存率仍未见明显改善，仅为14.1％。肝癌精准治疗之路困难重重，主要原因在于肝癌本身的基因组不稳定及高度异质性。因此对肝细胞癌发生发展机制的探索一直是科研工作者研究的焦点，对于提高肿瘤的诊断和治疗水平具有重要意义。
2、跨膜转运体slcs通过调节亲水性营养物质和代谢废物在细胞质膜上的交换来维持细胞内的动态平衡。目前，多个slc家族成员已被证明在促进肿瘤中mtorc1激活和细胞增殖方面发挥关键作用。slc38a6是slc38家族的第六个成员，在人体多种器官如胎盘、脾、肌肉、脑、肝和肺中被检测到表达。由于slc38a6被描述为未知底物分布的孤儿转运蛋白，因此我们对slc38a6的功能知之甚少。现有研究发现，在大脑兴奋性神经元中slc38a6对谷氨酰胺和谷氨酸具有高度的特异性，能够形成slc38a6-caveolin复合物，该复合物有助于slc38a6在质膜上循环。此外，在大脑神经元中ctp合成酶2、磷酸激活的谷氨酰胺酶和谷氨酸代谢型受体2也是slc38a6的潜在相互作用蛋白。
3、slc38a6为穿膜蛋白，蛋白稳定性差，单纯高表达slc38a6无法在细胞中稳定表达。肝癌组织中普遍存在氨基酸代谢异常，因此构建slc38a6载体并在肝癌细胞中表达对研究肝癌发生发展机制有重要意义。
技术实现思路
1、本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种高表达重组slc38a6表达载体及其构建方法和应用。
2、为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
3、一种高表达重组slc38a6表达载体，将带有egfp的融合片段和slc38a6的cdna同源重组于pcdh-cmv-mcs-ef1-puro质粒骨架上。
4、所述slc38a6的cdna核酸序列如seq id no:1所示；所述带有egfp的融合片段序列如seq id no:2所示。
5、一种所述表达载体的构建方法：
6、步骤1：构建获得slc38a6的cdna序列，该序列如seq id no:1所示；
7、步骤2：设计引物，对所述cdna序列进行扩增，经鉴定后回收slc38a6的cds序列片段；
8、步骤3：合成egfp片段，设计引物通过pcr获得egfp-slc38a6片段；
9、步骤4：将步骤3所得片段与pcdh-cmv-mcs-ef1-puro质粒进行同源重组中，得到重组slc38a6表达载体。
10、所述步骤4具体为：利用第一、第二限制性内切酶消化pcdh-cmv-mcs-ef1-puro质粒，然后37度处理120分钟；将限制性内切酶消化后的pcdh-cmv-mcs-ef1-puro质粒以及目的片段同源重组，得高表达重组slc38a6表达载体。
11、一种表达载体在表达egfp-slc38a6融合蛋白中的应用。
12、一种表达载体在表达egfp-slc38a6融合蛋白用于治疗肝癌中的应用。
13、一种稳定高表达slc38a6的细胞系，细胞系中含所述的高表达重组slc38a6表达载体。
14、所述细胞系宿主为huh7细胞。
15、本发明优点在于:
16、(1)本发明针对slc38a6构建了过表达慢病毒载体，通过效果试验证实本发明的慢病毒载体能够显著高表达slc38a6蛋白表达量。鉴于slc38a6为一种潜在的肝癌治疗靶点，因此本发明的构建的slc38a6表达载体及稳定细胞株有助于研究slc38a6在肝癌发展中的作用机制。
17、(2)本发明在肝癌细胞中稳定表达slc38a6，该稳定细胞系有利于进一步研究肝癌的发生发展机制。
1.一种高表达重组slc38a6表达载体，其特征在于：将带有egfp的融合片段和slc38a6的cdna同源重组于pcdh-cmv-mcs-ef1-puro质粒骨架上。
2.根据权利要求1所述的高表达重组slc38a6表达载体，其特征在于：所述slc38a6的cdna核酸序列如seq id no:1所示；所述带有egfp的融合片段序列如seq id no:2所示。
3.一种权利要求1所述表达载体的构建方法，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤4具体为：利用第一、第二限制性内切酶消化pcdh-cmv-mcs-ef1-puro质粒，然后37度处理120分钟；将限制性内切酶消化后的pcdh-cmv-mcs-ef1-puro质粒以及目的片段同源重组，得高表达重组slc38a6表达载体。
5.一种权利要求1所述的表达载体在表达egfp-slc38a6融合蛋白中的应用。
6.一种权利要求1所述的表达载体在表达egfp-slc38a6融合蛋白用于治疗肝癌中的应用。
7.一种稳定高表达slc38a6的细胞系，其特征在于：细胞系中含权利要求1所述的高表达重组slc38a6表达载体。
8.根据权利要求7所述的稳定高表达slc38a6的细胞系，其特征在于：所述细胞系宿主为huh7细胞。
