本发明涉及中药质量分析检测，尤其涉及一种羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法。
背景技术：
1、在市场上，羌活不同的商品规格有蚕羌、竹节羌、条羌、大头羌，其中条羌、大头羌被归类于宽叶羌活，而在临床中常使用蚕羌和竹节羌，因蚕羌和竹节羌的质量较佳，临床使用效果较好。中国药典2020年版羌活的鉴别、含量测定及特征图谱项下并未对不同基原的样品进行区分，而现有的专利研究中关于不同基原羌活的研究内容则更少，仅有部分研究内容涉及到其质量控制方法的研究；而在文献研究中，有部分文献涉及到不同基原羌活样品的研究，但其特征峰的分离度较差，且指认特征峰的数目较少，并未将药典中规定的4个特征峰纳入研究中，并且特征图谱信息也缺少药典项下羌活薄层鉴别项下的紫花前胡苷的参照物，所建立的特征图谱信息不够全面，并且在现有的研究中并未涉及到其标准汤剂的研究，在标准汤剂方面研究的内容，还处于技术空白。
技术实现思路
1、本发明所要解决的技术问题在于，提供一种羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法，该方法重现性良好，准确可靠，可为羌活药材或羌活标准汤剂大生产质量控制提供数据基础，保证产品质量的稳定性和可控性。
2、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法，包括以下步骤：
3、制备参照物溶液，所述参照物溶液包括对照药材溶液和对照品溶液，所述对照品溶液包括阿魏酸对照品溶液、羌活醇和异欧前胡素混合对照品溶液、紫花前胡苷对照品溶液和绿原酸对照品溶液；
4、取羌活药材或羌活标准汤剂制得供试品溶液；
5、取预设量的参照物溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相a，以磷酸溶液为流动相b进行梯度洗脱，建立特征图谱。
6、在一种实施方式中，所述梯度洗脱按下述程序进行：
7、0～9min，流动相a为25％→28.5％，流动相b为75％→71.5％；
8、9～25min，流动相a从28.5％→33.5％，流动相b从71.5％→66.5％；
9、25～30min，流动相a从33.5％→70％，流动相b从66.5％→30％；
10、30～31min，流动相a从70％→75％，流动相b从30％→25％；
11、31～45min，流动相a从75％→78％，流动相b从25％→22％。
12、在一种实施方式中，所述磷酸溶液的体积浓度为0.1～0.25％。
13、所述参照物溶液和供试品溶液的预设量为1μl～3μl；
14、所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为150mm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm，柱温为29℃～31℃；
15、所述进行梯度洗脱时，流动相的流速为0.24～0.26ml/min；
16、所述液相色谱仪的紫外检测波长为245nm～247nm。
17、优选地，所述磷酸溶液的体积浓度为0.2％。
18、所述参照物溶液和供试品溶液的预设量为2μl；
19、所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，柱长为150mm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm，柱温为30℃；
20、所述进行梯度洗脱时，流动相的流速为0.25ml/min；
21、所述液相色谱仪的紫外检测波长为246nm。
22、需要说明的是，本发明分别不同色谱柱、不同柱温、不同流速对特征图谱的影响，以确定上述条件为优选的测试条件。进一步地，本发明提供的特征图谱构建方法经专属性、精密度、重复性和稳定性验证，均符合规定，经中间精密度考察，相对保留时间及相对峰面积均较稳定。峰4、峰5分离度受柱温影响较大，建议固定柱温30℃。
23、在一种实施方式中，采用下述方法完成所述取羌活药材制得供试品溶液：
24、取羌活药材，研磨后过45目～55目筛网，然后称取0.4g～0.6g与70％的甲醇混合，所述甲醇的加入量为20ml～30ml，加热回流处理25min～35min后，放冷，再称定重量，用70％的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
25、需要说明的是，本发明通过单因素分析，分别考察提取溶剂、提取溶剂用量、提取方式及提取时间对羌活特征图谱的影响，以确定上述条件为优选的羌活药材供试品溶液的前处理方法。
26、在一种实施方式中，采用下述方法完成所述取羌活标准汤剂制得供试品溶液：
27、取羌活标准汤剂，研磨后称取0.05g～0.15g与70％的甲醇混合，所述甲醇的加入量为20ml～30ml，超声处理25min～35min后，放冷，再称定重量，用70％的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
28、所述超声处理的功率为200w～300w，频率为35khz～45khz。
29、需要说明的是，本发明分别考察提取溶剂、提取溶剂用量、提取时间及提取方式对特征图谱的影响，以确定上述条件为优选的羌活标准汤剂供试品溶液的前处理方法。
30、在一种实施方式中，所述阿魏酸对照品溶液采用下述方法制得：
31、精密称取阿魏酸2.215mg，置25ml量瓶中，加70％甲醇制成每1ml含87.714μg的溶液，摇匀，即得；
32、和/或，所述羌活醇和异欧前胡素混合对照品溶液采用下述方法制得：
33、精密称取羌活醇2.888mg、异欧前胡素2.339mg置25ml量瓶中，加70％甲醇制成每1ml含羌活醇115.405μg和异欧前胡素92.999μg混合对照品溶液，摇匀，即得；
34、和/或，所述紫花前胡苷对照品溶液采用下述方法制得：
35、精密称取紫花前胡苷2.252mg置20ml量瓶中，加70％甲醇制成每1ml含112.150μg的紫花前胡苷对照品溶液；
36、和/或，所述绿原酸对照品溶液采用下述方法制得：
37、精密吸取绿原酸对照品2.214mg置50ml量瓶中，加70％甲醇制成每1ml含绿原酸42.863mg的对照品溶液；
38、和/或，所述对照药材溶液采用下述方法制得：
39、取羌活对照药材约0.5g，置具塞锥形瓶中，加入70％甲醇25ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得。
40、在一种实施方式中，所述特征图谱包括羌活药材的特征图谱、羌活标准汤剂的特征图谱，所述特征图谱包括9个共有峰；其中与阿魏酸对应的为3号峰，与羌活醇对应的为7号峰。
41、在一种实施方式中，所述羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱中，以3号峰为参照峰s1，1号峰、2号峰与s1峰的相对保留时间符合：1号峰0.306～0.374，2号峰0.648～0.792；
42、以7号峰为参照峰s2，4号峰、5号峰、6号峰、8号峰、9号峰与s2峰的相对保留时间符合：4号峰0.621～0.759，5号峰0.648～0.792，6号峰0.873～1.067，8号峰0.936～1.144，9号峰0.954～1.166。
43、相应地，本发明提供了一种羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱，所述羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱采用上述的羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法获得。
44、相应地，所述羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱在(1)、(2)或(3)中的应用：
45、(1)羌活药材或羌活标准汤剂的真伪鉴别和成分检测；
46、(2)羌活药材和宽叶羌活药材的区分；
47、(3)羌活标准汤剂和宽叶羌活标准汤剂的区分。
48、实施本发明，具有如下有益效果：
49、本发明通过所述特征图谱的构建方法方法，首次建立了羌活药材、羌活标准汤剂的特征图谱，该特征图谱可充分展示羌活药材或羌活标准汤剂的化学成分特征，特征峰信息量丰富，可全面地反映羌活药材或羌活标准汤剂的质量信息，从而能够达到全面、有效地控制羌活药材或羌活标准汤剂质量的目的。并且能够实现对羌活药材和宽叶羌活药材、及羌活标准汤剂和宽叶羌活标准汤剂的鉴别区分，保证特征图谱在药材和标准汤剂中能够得到一致性的传递，确保临床使用中药材的基原的准确性。
1.一种羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱按下述程序进行：
3.如权利要求1所述的羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述磷酸溶液的体积浓度为0.1～0.25％；
4.如权利要求1所述的羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，采用下述方法完成所述取羌活药材制得供试品溶液：
5.如权利要求1所述的羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，采用下述方法完成所述取羌活标准汤剂制得供试品溶液：
6.如权利要求1所述的羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述特征图谱包括羌活药材的特征图谱、羌活标准汤剂的特征图谱，所述特征图谱包括9个共有峰；其中与阿魏酸对应的为3号峰，与羌活醇对应的为7号峰。
7.如权利要求6所述的羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱中，以3号峰为参照峰s1，1号峰、2号峰与s1峰的相对保留时间符合：1号峰0.306～0.374，2号峰0.648～0.792；
8.一种羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱，其特征在于，所述羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱采用如权利要求1～7任一项所述的羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱的构建方法获得。
9.权利要求8所述羌活药材或羌活标准汤剂的特征图谱在(1)、(2)或(3)中的应用：
