本发明涉及生物工程，特别是涉及一种猪流行性腹泻病毒中和性单克隆抗体的开发及应用。
背景技术：
1、猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea, ped）是由猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, pedv）引起的一种以腹泻、呕吐、脱水为主要特征的急性、高度接触性猪肠道传染病。pedv发病率高，幼年猪感染率高达100%，7日龄以下仔猪感染死亡率80%-100%，给世界各国养猪业均造成了严重的经济损失和国际影响，受到世界各养猪国家的高度重视。ped疫病防控主要以疫苗免疫和生物安全措施为主，但由于病原变异性强、致病和传播机制复杂，疫苗效果欠佳，抗体产生周期长，新生仔猪免疫系统发育不完善等问题，临床实践中大部分新生仔猪常常无法获得有效保护，最终导致防控失败。
技术实现思路
1、本发明针对pedv疫苗免疫的“空档期”，提供了一种可以高效中和猪流行性腹泻病毒中和性单克隆抗体，以解决上述现有技术存在的问题。
2、为实现上述技术目的，本发明采用了如下技术方案：
3、一种蛋白，包括重链多肽和/或轻链多肽，重链多肽包括重链可变区cdr3，轻链多肽包括轻链可变区cdr3，重链可变区cdr3的序列如seq id no.1的97-109位所示，轻链可变区cdr3序列如seq id no.2的89-97位所示。
4、上述蛋白，重链多肽包括重链可变区cdr2，轻链多肽包括轻链可变区cdr2，重链可变区cdr2序列如seq id no.1的51-58位所示，轻链可变区cdr2序列为seq id no.2的50-52位所示。
5、上述蛋白，重链多肽包括重链可变区cdr1，轻链多肽包括轻链可变区cdr1，重链可变区cdr1序列如seq id no.1的26-33所示，轻链可变区cdr1序列为seq id no.2的27-32位所示。
6、上述蛋白，重链多肽包括重链可变区fr框架区，所述重链可变区fr框架区如seqid no.1的1-25、34-50、59-96、110-120位所示；轻链多肽包括轻链可变区fr框架区，所述轻链可变区fr框架区如seq id no.2的1-26、33-49、53-88、98-107位所示。
7、上述蛋白，重链可变区序列如seq id no.1所示，轻链可变区序列如seq id no.2所示。
8、所述蛋白自命名为1-2b。
9、本发明还提供上述蛋白的编码核酸分子。
10、本发明还提供含有上述蛋白、核酸分子的表达盒、重组载体和/或重组细胞、微生物等生物材料。比如，所述蛋白可以由hek293f真核表达系统表达。
11、本发明还提供生物制剂，包含上述蛋白、核酸分子或生物材料。
12、本发明还提供上述蛋白、核酸分子、生物材料、生物制剂的应用。
13、上述蛋白、核酸分子、生物材料、生物制剂在制备诊断、治疗、预防猪流行性腹泻或猪流行性腹泻病毒感染的抗体、试剂、药物、制剂中的应用。优选为仔猪或幼年猪。优选的，上述蛋白作为猪流行性腹泻病毒中和性抗体的应用。
14、本发明还提供猪流行性腹泻病毒中和性单克隆抗体的制备方法，包括将重链（vh）和轻链（vl）核酸序列构建入pcdna3.4载体，转染至hek293f真核表达系统表达，再经纯化，即可得到所述猪流行性腹泻病毒中和性单克隆抗体。进一步地，所述纯化采用proteina亲和层析法。
15、本发明还提供一种开发猪流行性腹泻病毒中和性单克隆抗体的方法，包括pedv灭活病毒抗原的制备及小鼠免疫，pedv中和性杂交瘤单克隆抗体的筛选，抗体亚型鉴定及序列测定。
16、有益效果
17、1、本发明获得的1-2b蛋白是高效的pedv中和性单克隆抗体，中活效价为1.24 μg/ml，单克隆抗体1-2b是igg2a亚型。所述抗体能应用于治疗pedv感染的仔猪，弥补疫苗免疫的“空档期”，具有较大应用前景。
18、2、本发明中的pedv中和性单克隆抗体1-2b不仅能与pedv s1蛋白结合还能与n蛋白结合。其与s1蛋白结合能与其中s1abcd（234aa-736aa）截短蛋白及s-rbd（505aa-629aa）截短蛋白同时结合。
19、3、本发明所述蛋白、抗体可用重组法制备，得到的抗体产品纯度高、活性高，且生产效率高、产量可控，适用于工业化生产。
20、4、本发明获得的pedv单克隆抗体1-2b与pedv病毒结合活性很高，可应用于pedv病毒的早期诊断。
1.一种蛋白，包括重链多肽和/或轻链多肽，重链多肽包括重链可变区cdr3，轻链多肽包括轻链可变区cdr3，重链可变区cdr3的序列如seq id no.1的97-109位所示，轻链可变区cdr3序列如seq id no.2的89-97位所示。
2.如权利要求1所述蛋白，重链多肽包括重链可变区cdr2，轻链多肽包括轻链可变区cdr2，重链可变区cdr2序列如seq id no.1的51-58位所示，轻链可变区cdr2序列为seq idno.2的50-52位所示。
3.如权利要求1或2所述蛋白，重链多肽包括重链可变区cdr1，轻链多肽包括轻链可变区cdr1，重链可变区cdr1序列如seq id no.1的26-33所示，轻链可变区cdr1序列为seq idno.2的27-32位所示。
4.如权利要求1-3任一所述蛋白，重链多肽包括重链可变区fr框架区，所述重链可变区fr框架区如seq id no.1的1-25、34-50、59-96、110-120位所示；轻链多肽包括轻链可变区fr框架区，所述轻链可变区fr框架区如seq id no.2的1-26、33-49、53-88、98-107位所示。
5.如权利要求1-4任一所述蛋白，，重链可变区序列如seq id no.1所示，轻链可变区序列如seq id no.2所示。
6.如权利要求1-5任一所述蛋白的编码核酸分子。
7.含有权利要求1-5任一所述蛋白、权利要求6所述核酸分子的表达盒、重组载体和/或重组细胞、微生物等生物材料。
8.权利要求1-5任一所述蛋白、权利要求6所述核酸分子核酸分子、权利要求7所述生物材料在制备诊断、治疗、预防猪流行性腹泻或猪流行性腹泻病毒感染的抗体、试剂、药物、制剂中的应用；优选为仔猪或幼年猪。
9.权利要求1-5任一所述蛋白作为猪流行性腹泻病毒中和性抗体的应用。
10.猪流行性腹泻病毒中和抗体的制备方法，包括将权利要求1-5任一所述蛋白的编码核酸分子构建入pcdna3.4载体，转染至hek293f真核表达系统表达，并纯化。
