本发明涉及功能性多肽相关，具体为一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法及其应用。
背景技术：
1、蛋白质是机体获得必需氨基酸和能量的重要来源。除了基本营养功能外，在某些特定的食用蛋白质中存在着一些寡肽，它们在相应的食用蛋白质分子中活性较低，但经过酶解、发酵或胃肠消化从蛋白质中释放后具有强大的生物活性，这些寡肽被称为生物活性肽。生物活性肽具有广泛的生物活性，包括免疫调节、抗癌、抗高血压、抗氧化、抗炎、降血脂和抗菌等作用。已报道具有免疫调节能力的生物活性肽来源主要有牛奶乳清来源、鸡蛋来源、水产动物来源、植物来源(如大豆、小麦、豌豆、黄豆等)。
2、根据文献报道，生物活性肽免疫调节功能的实现并不是其直接同病原体直接作用进行病原体消灭，而是间接地对机体的固有免疫和适应性免疫反应进行免疫调节，例如诱导或调控细胞因子和抗体的产生，刺激淋巴细胞增殖，增强巨噬细胞的吞噬能力，增强自然杀伤细胞活性，提高机体对入侵病原体的防御能力，抑制宿主细胞对细菌成分(如脂多糖)的促炎反应等，以通过促进宿主的防御反应以达到免疫提升的效果。然而，这些研究基本集中于探究生物活性肽对机体免疫细胞的主要发源地——初级/次级淋巴器官(胸腺和脾脏)内免疫细胞增殖能力和免疫应答能力的探究，而对于一些三级淋巴结构，如肠道黏膜中相应的免疫细胞是否也相应受生物活性肽调控的研究较少。考虑到生物活性肽在肠道被消化吸收，肠道可能是其最初作用并发挥免疫调节功能的位点，且肠道黏膜免疫在机体面临膳食来源的免疫挑战中占有极为重要的地位，生物活性肽与肠道黏膜免疫的相互作用值得探究。
3、此外，目前尚未完全了解生物活性肽的免疫调节作用的确切机制，仅研究发现免疫调节生物活性肽的靶点细胞包括单核细胞、巨噬细胞、nk细胞、肥大细胞、t和b淋巴细胞等。免疫调节生物活性肽通过对这些免疫细胞的激活、促进免疫调节剂(如细胞因子、一氧化氮和免疫球蛋白)的分泌来达到提升机体免疫力的目的。具体的分子机制可能是生物活性肽通过与免疫细胞表面的受体结合进一步激活免疫细胞激活分化相关信号通路，激活免疫细胞增殖分化。
4、甲鱼肽是甲鱼蛋白经过复合酶水解而获得的小分子肽，从而增加原食品蛋白质中没有的生物学功能。现代营养学研究发现，人体摄入的蛋白质大多是以寡肽的形式被消化吸收的，多肽的生物效价比游离氨基酸要高。目前已有多种活性多肽的研究和产品，如胶原蛋白肽、乳铁蛋白活性多肽、鹿茸活性多肽、大豆肽等，它们具有多种生理功能，如抗氧化、降血压和免疫调节等。
5、近年来，国内外市场对甲鱼的需求日益增长，极大地促进了甲鱼养殖业和加工业的发展，但是目前，甲鱼主要以鲜活销售为主，加工产品少，产品附加值低，将其加工成高附加值的甲鱼肽具有巨大的发掘潜力，发展前景广阔，因此，对于甲鱼肽更进一步的研究与应用的意义重大。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法及其应用，用于克服现有技术中的上述缺陷。
2、本发明是通过以下技术方案来实现的。
3、所述的一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法，包括如下步骤：
4、s1、取适量新鲜甲鱼(去内脏后清洗干净)加入水没过甲鱼，用高压蒸煮反应釜，将温度升高至118℃，高温高压蒸煮3小时，继续保温过夜；
5、s2、保温结束后料液脱脂；
6、s3、脱脂结束后剪切，搅拌均匀后加入0.5-3.0％复合蛋白酶(主要有木瓜蛋白酶、枯草芽孢杆菌来源碱性蛋白酶、风味酶等)，升温至50-55℃，持续酶解6-12小时；
7、s4、酶解结束后，加入活性碳，吸附保温1小时后，加入硅藻土搅拌混合均匀，经板框过滤器过滤；
8、s5、过滤后清液经真空低温薄膜蒸发器浓缩料液糖度至20-25°；
9、s6、浓缩后料液经uht瞬时高温灭菌；
10、s7、灭菌后料液经喷雾干燥、包装后制得成品。
11、进一步的技术方案，所述甲鱼肽水解度＞35％，分子量＜1000d的比例＞90％，且具备改善脾脏形态功能，避免环磷酰胺对脾脏生发中心的损伤，增强了脾脏免疫细胞增殖能力。
12、进一步的技术方案，所述甲鱼肽可促进血清细胞因子的正常分泌，提升了免疫细胞分泌细胞因子il-2、il-12、tgf-β和效应细胞因子ifn-γ、tnf-α的含量，增加了血清iga的分泌。
13、进一步的技术方案，所述甲鱼肽可促进肠道物理屏障的修复，改善了回肠组织形态，增加了肠道绒毛长度以及绒毛长度/隐窝深度比值，促进紧密连接蛋白claudin-1和occludin，黏附连接蛋白e-cadherin的分泌；高剂量甲鱼肽也促进了肠道化学屏障修复，增加了muc2蛋白的分泌。
14、进一步的技术方案，所述甲鱼肽可增强回肠t细胞介导的细胞免疫反应，增强了th1、th2、th17、treg细胞特征转录因子t-bet、gata-3、rorγt、foxp3的表达，同时维持了th1/th2、th17/treg细胞的分化平衡，避免了可能出现的炎症反应。
15、进一步的技术方案，所述甲鱼肽可以非t细胞依赖非炎症反应方式增强iga介导的体液免疫反应。
16、进一步的技术方案，所述甲鱼肽可以上调回肠组织中ahr的基因、蛋白表达，并上调cyp1a1酶的表达，表明回肠中ahr信号得到激活，显著上调了回肠组织中的il-22分泌水平，il-22r的mrna表达水平，促进了肠道屏障修复。
17、进一步的技术方案，所述甲鱼肽可以上调回肠组织中stat3的基因、蛋白表达并上调stat3的磷酸化水平，促进免疫细胞增殖分化。
18、进一步的技术方案，所述甲鱼肽中含色氨酸肽段lsw、plw、wgf、pawe和wtf可以通过氢键、π-π键、π-cation作用与ahr的pas-b结构内氨基酸残基发生作用。
19、本发明还包括一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的应用，包括：
20、本发明一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽可以单独应用于调节免疫的药物和保健品，也可以与其他具有调节免疫的活性成分进行复配使用，还可以制备成微胶囊，以改善多肽的胃肠道消化稳定性、生物利用度和延缓保质期，使其更好的应用于食品工业和保健领域。
21、进一步的技术方案，所述调节免疫的活性成分可以包括植物提取物(茯苓、枸杞、人参、黄芪、铁皮石斛等)、维生素(例如维生素c)、多酚类、其他的蛋白肽。
22、进一步的技术方案，所述的药物和保健品是饮料、口服液、胶囊、微胶囊粉、片剂、颗粒或者乳液。
1.一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种可提高肠道黏膜免疫功能的甲鱼肽的制备方法，其特征在于：生产的所述甲鱼肽水解度＞35％，分子量＜1000d的比例＞90％，且具备改善脾脏形态功能，避免环磷酰胺对脾脏生发中心的损伤，增强了脾脏免疫细胞增殖能力。
3.根据权利要求1所述的一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法，其特征在于：生产的所述甲鱼肽可促进血清细胞因子的正常分泌，提升了免疫细胞分泌细胞因子il-2、il-12、tgf-β和效应细胞因子ifn-γ、tnf-α的含量，增加了血清iga的分泌。
4.根据权利要求1所述的一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法，其特征在于：生产的所述甲鱼肽可促进肠道物理屏障的修复，改善了回肠组织形态，增加了肠道绒毛长度以及绒毛长度/隐窝深度比值，促进紧密连接蛋白claudin-1和occludin，黏附连接蛋白e-cadherin的分泌；高剂量甲鱼肽也促进了肠道化学屏障修复，增加了muc2蛋白的分泌。
5.根据权利要求1所述的一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法，其特征在于：生产的所述甲鱼肽可增强回肠t细胞介导的细胞免疫反应，增强了th1、th2、th17、treg细胞特征转录因子t-bet、gata-3、rorγt、foxp3的表达，同时维持了th1/th2、th17/treg细胞的分化平衡，避免了可能出现的炎症反应。
6.根据权利要求1所述的一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法，其特征在于：生产的所述甲鱼肽可以非t细胞依赖非炎症反应方式增强iga介导的体液免疫反应。
7.根据权利要求1所述的一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法，其特征在于：生产的所述甲鱼肽可以上调回肠组织中ahr的基因、蛋白表达，并上调cyp1a1酶的表达，表明回肠中ahr信号得到激活，显著上调了回肠组织中的il-22分泌水平，il-22r的mrna表达水平，促进了肠道屏障修复。
8.根据权利要求1所述的一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法，其特征在于：生产的所述甲鱼肽可以上调回肠组织中stat3的基因、蛋白表达并上调stat3的磷酸化水平，促进免疫细胞增殖分化。
9.根据权利要求1所述的一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的制备方法，其特征在于：所述甲鱼肽中含色氨酸肽段lsw、plw、wgf、pawe和wtf可以通过氢键、π-π键、π-cation作用与ahr的pas-b结构内氨基酸残基发生作用。
10.本发明还包括一种可提高肠道黏膜免疫的甲鱼肽的应用，其特征在于，包括：
