本发明属于医药检测，涉及吡罗昔康的检测，特别涉及一种吡罗昔康的电化学检测方法。
背景技术：
1、吡罗昔康是昔康类非甾体抗炎药，常用于治疗炎症性疾病和关节疾病，如急性病毒性呼吸道感染，类风湿关节炎，强直性脊柱炎、骨关节炎等。吡罗昔康的大量服用会造成譬如胃溃疡，肝肾损害等，严重者危及生命。由于上述的副作用，因此建立一套快速、方便、准确的吡罗昔康样品检测方法，对于吡罗昔康的合理使用和临床评价都是极其重要的。
2、目前常见的吡罗昔康检测方法有荧光分光光度法，流动注射化学发光抑制法，液相色谱-串联质谱法，毛细管电泳法，hplc等。传统分析方法要么需要大量实验工作，实验进程缓慢，要么分析周期较长。且传统分析方法较难用于活体检测，因此，研发一种制备简单，灵敏度好，检出限低，可快速达到稳态的吡罗昔康检测方法是很有必要的。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种吡罗昔康的电化学检测方法，本发明采用nafion/碳纳米管修饰电极为工作电极，构建三电极工作体系，用循环伏安法和线性循环伏安法检测电化学响应，利用氧化峰电流和吡罗昔康浓度标准曲线，测得样品中吡罗昔康的浓度。本发明的检测方法灵敏度好、检出限低、可快速达到稳态。
2、本发明是通过以下技术方案实现的：
3、一种吡罗昔康的电化学检测方法，包括以下步骤：
4、（1）以nafion/碳纳米管修饰电极为工作电极，铂丝电极为对电极，ag/agcl电极为参比电极，组成三电极系统，以柠檬酸、磷酸氢二钠缓冲溶液或硫酸溶液为支持电解质；
5、（2）将nafion/碳纳米管修饰电极放入支持电解质中，加入吡罗昔康待测液，搅拌溶液50 秒~ 20 分钟，采用环伏安法检测电化学响应，扫描窗口范围为0.4 ~ 1.4 v，扫描速度为10 ~ 400 mv/s，氧化时间为400~600秒，氧化电位为0.8 v，记录氧化峰电流值，并对应标准曲线得到样品中吡罗昔康的浓度。
6、所述nafion/碳纳米管修饰电极为nafion/cnts/gce电极或nafion/cnts/pt-microe电极。
7、本发明的进一步改进方案为：
8、所述支持电解质为0.1 m 的硫酸溶液。
9、进一步的，当工作电极为nafion/cnts/gce电极时，步骤（2）中的搅拌时间为10分钟；
10、和/或，当工作电极为nafion/cnts/pt-microe电极，步骤（2）中的搅拌时间为0分钟，即不需要搅拌。
11、进一步的，所述nafion/碳纳米管修饰电极通过以下步骤制得：
12、（1）先将玻碳电极或铂微电极用氧化铝分散液抛光研磨至表面光滑，后在超纯水、无水乙醇中分别进行超声清洗，再用氮气干燥，得到待修饰的玻碳电极或铂微电极；
13、（2）将商品化的nafion和碳纳米管分别制备成溶液，再将nafion溶液和碳纳米管溶液按一定体积比进行混合，超声形成均匀稳定的溶液，记为nafion-碳纳米管溶液；
14、（3）取步骤（2）得到的nafion-碳纳米管溶液滴于洁净的玻碳电极或铂微电极表面，自然晾干得到nafion/cnts/gce电极或nafion/cnts/pt-microe电极。
15、进一步的，制备nafion/碳纳米管修饰电极的步骤（1）中所述玻碳电极表面直径3毫米，所述铂微电极表面直径25 μm，使用0.05 μm的氧化铝分散液抛光研磨至表面光滑。
16、进一步的，制备nafion/碳纳米管修饰电极的步骤（2）中nafion-碳纳米管溶液通过以下步骤制备：
17、（1）取5 % nafion溶液溶于超纯水中，超声形成0.5% - 1.5 % nafion溶液；
18、（2）取碳纳米管溶于n,n-二甲基甲酰胺中，超声分散，形成1-6 mg/ml的碳纳米管溶液；
19、（3）将nafion溶液和碳纳米管溶液按照体积比1:9~9:1的比例混合超声，得到nafion-碳纳米管溶液。
20、进一步的，步骤（2）中所述标准曲线为氧化峰电流和吡罗昔康浓度标准曲线，线性方程为：i(μa)=15.368 c(μ m) + 0.6548 （r2 = 0.9948，5×10−9 ~ 8×10−6 m）和ip =8.4078c + 66.605（r2 = 0.9911，8×10-6~6×10-5 m）。
21、进一步的，步骤（2）测定结束后将修饰电极置于空白支持电解质中，进行循环伏安法连续扫2~10圈除去富集在表面的吡罗昔康，恢复电极电活性，电极0~10℃保存待用，可重复检测。
22、本发明的有益效果为：
23、（1）本发明的检测方法简单易操作，灵敏度好，抗干扰能力强，检测速度快；
24、（2）本发明的工作电极制备时采用滴涂法，制备简单便宜，重现性好，稳定性好，长期稳定性好，可重复检测；
25、（3）本发明工作电极采用的nafion/cnts/pt-microe电极为微型传感器，体积小，可实现传质快速达到稳态，不需搅拌也可实现灵敏检测，拓宽应用前景。
1.一种吡罗昔康的电化学检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种吡罗昔康的电化学检测方法，其特征在于：所述支持电解质为0.1 m 的硫酸溶液。
3.根据权利要求1所述的一种吡罗昔康的电化学检测方法，其特征在于：当工作电极为nafion/cnts/gce电极时，步骤（2）中的搅拌时间为10分钟；
4.根据权利要求1所述的一种吡罗昔康的电化学检测方法，其特征在于：所述nafion/碳纳米管修饰电极通过以下步骤制得：
5.根据权利要求4所述的一种吡罗昔康的电化学检测方法，其特征在于：步骤（1）中所述玻碳电极表面直径3毫米，所述铂微电极表面直径25 μm，使用0.05 μm的氧化铝分散液抛光研磨至表面光滑。
6.根据权利要求4所述的一种吡罗昔康的电化学检测方法，其特征在于：步骤（2）中nafion-碳纳米管溶液通过以下步骤制备：
7.根据权利要求1所述的一种吡罗昔康的电化学检测方法，其特征在于：步骤（2）中所述标准曲线为氧化峰电流和吡罗昔康浓度标准曲线，线性方程为：i(μa)=15.368 c(μ m) +0.6548 （r2 = 0.9948，5×10−9 ~ 8×10−6 m）和ip = 8.4078c + 66.605（r2 = 0.9911，8×10-6~6×10-5 m）。
8.根据权利要求1所述的一种吡罗昔康的电化学检测方法，其特征在于：步骤（2）测定结束后将修饰电极置于空白支持电解质中，进行循环伏安法连续扫2~10圈除去富集在表面的吡罗昔康，恢复电极电活性，电极0~10℃保存待用，可重复检测。
