本发明属于生物纳米材料，具体地说，涉及一种具有高抗肿瘤性能的搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法。
背景技术：
1、癌症是人类健康最严重的威胁之一，癌症治疗是当前临床领域面临的一项巨大挑战。众所周知，由于异常细胞生长驱动的新陈代谢增加，癌细胞比正常细胞更容易受到氧化应激的影响，这反映在活性氧(ros)的基础水平升高。ros是一组含氧的高活性化学物种，如羟基自由基(·oh)、过氧化氢(h2o2)和超氧自由基(·o2-)，是促进肿瘤发生、进展、转移和耐药性的关键驱动因素之一，在肿瘤微环境(tme)中具有复杂、多方面的作用。ros升高会诱发氧化应激并扰乱氧化还原平衡，从而对细胞中的蛋白质、脂质和dna造成不可逆的损伤。因此，调节氧化应激为抗癌提供了有效的治疗武器。许多治疗方法，如化疗、放射疗法和光动力疗法在很大程度上都是由氧化应激介导的疗法。因此，利用纳米材料通过促进ros生成和/或减少ros清除来破坏细胞内的氧化还原平衡，应能有效放大细胞内的氧化应激，从而实现更有效的癌症治疗。
2、羟基自由基是一种比·o2-和h2o2活性更高的ros。芬顿反应是利用大多数类型实体瘤中高水平的内源性h2o2来产生毒性高的·oh诱导癌细胞死亡的一种创新策略。芬顿反应利用fe2+作为催化剂，将h2o2就地转化为高度氧化性的·oh。此外，癌细胞中过量表达的谷胱甘肽(gsh)作为一种强大的ros清除剂，可适应性地维持细胞内的氧化还原平衡，以抵消芬顿反应产生的ros对细胞的杀伤作用。因此，实现肿瘤内gsh的耗竭，从而促进芬顿反应的抗肿瘤效果是有必要的。
3、二硒类聚合物由于主链中含有多个二硒键，在肿瘤细胞中可以高效地消耗gsh。通过薄膜水化法，将二硒类聚合物与含亚铁的芬顿试剂结合得到复合纳米粒子。这种纳米粒子在进入肿瘤细胞后，能够同时实现gsh的消耗和·oh的产生，极大程度上破坏肿瘤细胞内的氧化还原平衡，放大氧化应激，达到杀伤肿瘤的作用。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法。
2、为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
3、本发明的第一方面，提供了一种搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法，包括以下步骤：
4、第一步，氩气氛围中，加入novozym 435酶，将摩尔比为1:2～8:20～60(优选为1:3:45)的引发剂聚乙二醇单甲醚mpeg、含二硒大环碳酸酯(msese)、三亚甲基碳酸酯(tmc)加入上述溶液中，加入甲苯，进行开环溶液聚合，反应温度为60～80℃(优选为70℃)，反应1～48h(优选为24h)，得到含二硒嵌段聚碳酸酯pse；novozym 435酶占含二硒大环碳酸酯与三亚甲基碳酸酯总质量的5～15％(优选为10％)；
5、第二步，将质量比为2～8:1(优选为4:1)的聚乙烯吡咯烷酮(pvp)和四水合氯化亚铁(fecl2·4h2o)溶解于脱气超纯水中，室温下搅拌5～15min(优选为10min)，向溶液中缓慢滴加没食子酸水溶液，没食子酸和四水合氯化亚铁的质量比为1:1～3(优选为1:2)，氩气氛围中搅拌1～48h(优选为24h)，透析纯化过夜、超滤，得到纳米粒子ga-fe(ii)；
6、所述第二步中透析纯化过夜是用截留分子量为mw co＝10kda的透析袋纯化过夜。
7、所述第二步中超滤是用10kda超滤管超滤除去未络合的芬顿粒子。
8、第三步，将第一步制备的含二硒嵌段聚碳酸酯pse溶于丙酮中，蒸干丙酮形成聚合物薄膜，加入第二步制备的纳米粒子ga-fe(ii)水溶液，第一步制备的含二硒嵌段聚碳酸酯pse和第二步制备的纳米粒子ga-fe(ii)中se与fe元素的质量比为5～16:1(优选为5:1、8:1、16:1)，30～50℃(优选为40℃)水化1～5h(优选为3h)，经过后处理，得到搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子nse-gfe。
9、所述第三步中后处理包括超声后过滤、超滤，或者，超滤。
10、所述第三步中超声的时间为5～15min(优选为10min)。
11、所述第三步中过滤是用450μm水相滤头过滤。
12、所述第三步中超滤是用100kda超滤管除去未搭载的芬顿试剂。
13、本发明的第二方面，提供了一种所述方法制备的搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子在制备抗肿瘤的药物中的应用。
14、所述肿瘤选自肝癌。
15、由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：
16、铁死亡不仅对肿瘤有很强的单独治疗效果，而且与其他药物联合使用时还会产生协同效应。以铁基粒子为基础的纳米药物能高效、可靠地诱导铁死亡，也使药物联合应用变得更简单、更方便，在控释、精确靶向和提高给药效率等方面具有显著优势。本发明通过联合芬顿试剂和含硒聚合物，改变两者的比例，以及设计不同的对比例，探究搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法，探讨se-se与fe之间的联合作用。本发明所制备出的nse-gfe可用于肝癌及其他多种癌症的治疗，以及可尝试用于逆转癌细胞的耐药性。
1.一种搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述第二步中透析纯化过夜是用截留分子量为mw co＝10kda的透析袋纯化过夜。
3.根据权利要求1所述的搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述第二步中超滤是用10kda超滤管超滤除去未络合的芬顿粒子。
4.根据权利要求1所述的搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述第三步中后处理包括超声后过滤、超滤，或者，超滤。
5.根据权利要求4所述的搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述第三步中超声的时间为5～15min。
6.根据权利要求4所述的搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述第三步中过滤是用450μm水相滤头过滤。
7.根据权利要求4所述的搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述第三步中超滤是用100kda超滤管除去未搭载的芬顿试剂。
8.一种权利要求1至7任一项所述的方法制备的搭载芬顿试剂的含硒复合纳米粒子在制备抗肿瘤的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述肿瘤选自肝癌。
