本发明涉及一种拮抗剂的检测方法，特别是一种血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法。
背景技术：
1、急性心肌梗死(acute myocardial infarction,ami)是一种冠心病发展过程中出现的最为严重的类型，其具有发病急骤、病情凶险、病情进展迅速、发病率和院内及院外死亡率较高特点。在ami治疗中，抗血小板的治疗有着非常重要的地位。经皮冠脉介入术(percutaneous coronary intervention,pci)作为治疗ami的首选方法，术前需使用抗血小板药物来抑制血小板聚集，不仅能提高心肌再灌注能力，而且对预防心肌梗死再发具有重要意义。
2、近年来，替罗非班作为一种非肽类血小板受体gpiib/iiia高选择性拮抗剂，可竞争性阻断纤维蛋白原及血管性血友病因子(vwf)与血小板受体的结合，阻止血小板聚集、黏附等活化反应，有效地抑制血小板介导的血栓形成并延长出血时间，改善相关梗死动脉缺血事件的发生，有效降低急性心肌梗死患者经介入治疗，开通血管后心绞痛、术后再发心肌梗死、心力衰竭等缺血事件的发生率，是临床介入治疗中抗血小板聚集的重要药物。
3、但是目前尚缺乏快速检测急性心肌梗死患者介入治疗术前后替罗非班的血药浓度的相关技术，对于替罗非班的用药量和安全性难以把控。
技术实现思路
1、本发明的目的在于，提供一种血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法。本发明具有能快速、准确血液中替罗非班的血药浓度的特点。
2、本发明的技术方案：血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法，包括以下步骤：
3、s1、制备系列浓度的标准血浆样本，将标准血浆样本经样本处理后，采用微型质谱仪进行二级质谱检测，得标准曲线；
4、s2、将待测血液样本经样本处理后，采用微型质谱仪进行二级质谱检测，将检测的结果代入标准曲线中，以峰面积对应的浓度进行线性回归，得到测试血样中替罗非班的含量。
5、其中，微型质谱仪的质谱条件为：正离子模式，电离电压为3600v，iso1为8v，iso2为2v，cid为3v。
6、前述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法中，所述步骤s1和步骤s2中的样本处理为：将样本加入到乙腈-水溶液中混合均匀后离心，取上层清液进行检测。
7、前述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法中，所述样本与乙腈-水溶液的体积比为1:1。
8、前述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法中，所述乙腈-水溶液的体积比为9:1。
9、前述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法中，所述离心的速度为4000～8000r/min，离心时间为1～2min。
10、前述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法中，所述步骤s1中标准血浆样本的制备方法为：将不含有替罗非班的血液样品作为空白样品，将溶解在乙腈中的替罗非班溶液作为标准物质，向空白样品中添加不同量的标准物质，得到系列浓度的标准血浆样本。
11、前述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法中，所述步骤s1中的标准血浆样本的系列浓度依次为50ng·ml-1、100ng·ml-1、250ng·ml-1、500ng·ml-1、1μg·ml-1、2μg·ml-1、5μg·ml-1。
12、前述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法中，所述微型质谱仪的进样量为5μl。
13、前述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法中，所述替罗非班的母离子为m/z 441.3，替罗非班的的子离子为m/z 260、m/z 276和m/z 395。
14、与现有技术相比，本发明的有益效果为：
15、本发明通过微型质谱检测血液中的拮抗剂替罗非班的浓度，具有现场采样、临床检测和即刻分析的特点，实现替罗非班的精准用药。研究结果显示，替罗非班在正离子模式下能形成较为显著且稳定的母离子峰m/z 441.3，经碰撞诱导碎裂成m/z 395.4、m/z321.3、m/z 276.3、m/z 260.3等子离子。采用多反应检测对替罗非班进行半定量，为提高离子响应，将替罗非班电离参数优化为电压3600v、iso1为8v、iso2为2v、cid为3v。
16、对该方法进行验证，发现lod和loq分别为75ng·ml-1和300ng·ml-1，灵敏度高；重复性实验rsd在6.4％～16.6％之间，日间相对标准偏差(rsd)在5.5％～15.50％，说明方法的重复性及室内再现性良好；方法回收率在74.57％-112.94％，准确度高。
17、尽管血液样本中的基质效应对目标信号形成一定的抑制，但建立了基质匹配标准曲线，根据标准曲线来计算待测组分含量，减少基质干扰，提高定量分析的准确性，结果显示替罗非班线性良好，r2为0.998，可以抵消部分基质效应。最后，该方法成功应用于临床采集的血液样本中替罗非班的检测，对于监测替罗非班用药过程中血药浓度，具有重要的临床意义，避免严重介入治疗术中术后相关并发症的发生，防止出现因用药不足导致的溶栓效果不佳和过量用药导致的出血等副反应。
1.血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法，其特征在于：所述步骤s1和步骤s2中的样本处理为：将样本加入到乙腈-水溶液中混合均匀后离心，取上层清液进行检测。
3.根据权利要求2所述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法，其特征在于：所述样本与乙腈-水溶液的体积比为1:1。
4.根据权利要求2所述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法，其特征在于：所述乙腈-水溶液的体积比为9:1。
5.根据权利要求2所述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法，其特征在于：所述离心的速度为4000～8000r/min，离心时间为1～2min。
6.根据权利要求1所述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法，其特征在于：所述步骤s1中标准血浆样本的制备方法为：将不含有替罗非班的血液样品作为空白样品，将溶解在乙腈中的替罗非班溶液作为标准物质，向空白样品中添加不同量的标准物质，得到系列浓度的标准血浆样本。
7.根据权利要求1所述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法，其特征在于：所述步骤s1中的标准血浆样本的系列浓度依次为50ng·ml-1、100ng·ml-1、250ng·ml-1、500ng·ml-1、1μg·ml-1、2μg·ml-1、5μg·ml-1。
8.根据权利要求1所述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法，其特征在于：所述微型质谱仪的进样量为5μl。
9.根据权利要求1所述的血液中拮抗剂替罗非班的微型质谱即时检测方法，其特征在于：所述替罗非班的母离子为m/z 441.3，替罗非班的的子离子为m/z 260、m/z 276和m/z395。
