：本发明属于生物工程领域，涉及一种生物标记物，具体来说是环状非编码rnacirckcnk2作为预测肾癌骨转移标记物或者肾癌预后评价的用途。
背景技术
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背景技术：
1、肾细胞癌(renal cell carcinoma，rcc)，简称为肾癌，是泌尿系统常见恶性肿瘤之一，约30％肾癌患者初诊时就发现了转移灶，称为转移性肾癌(metastatic rcc,mrcc)，其恶性度高、进展迅速、预后不佳，最为常见的转移器官为肺、骨、肾上腺等。其中，骨转移占所有肾癌转移器官比例的20-30％，位居第二，并且多数是以溶骨性骨破坏为表现形式。肾癌患者一旦发生骨转移，临床可表现为疼痛、肿胀、脊髓压迫症、病理性骨折、高钙血症等，难以治愈、预后较差。肿瘤的骨转移可以分为成骨性和溶骨性，成骨性骨转移与成骨细胞的骨合成功能密切相关，肿瘤细胞产生fgf、bmp和pdfg等能诱导成骨细胞合成，是前列腺癌骨转移的主要方式。而溶骨性骨转移作为肾癌骨转移的主要方式，预后较差，出现骨转移后中位生存时间仅为12-28个月，多表现为正常骨结构的破坏，伴随的骨痛、病理性骨折以及压迫症状使患者生活质量大幅下降。溶骨性骨转移的过程与破骨细胞噬骨过程密切相关。
2、研究表明环状非编码rna(circular rna,circrna)调控肾癌侵袭转移中扮演重要角色。circrnas的产生又受到多个因素调节，主要的成环机制包括：一、sr蛋白(即含有长重复丝氨酸和精氨酸氨基酸残基的蛋白)等反式剪接因子通过催化外显子下游的5’供体位点连接到3’供体位点，索尾插接(back-splice)形成环化，并剪切；二、circrna本身存在的顺式作用元件，如重复元件(例如alu元件)在环状rna外显子两侧形成的反向互补序列，在剪切位点上排列成双链体，再通过可变剪切形成带内含子及不带内含子的两种circrna；三、还存在一系列，包括adar1、adar2和qki在内的特殊rna结合蛋白，能够与侧翼内含子中的特定基序结合使下游剪接供体位点(splice-donor site,sd)与上游剪接受体位点(splice-acceptor site,sa)接近并促进circrna形成。
3、circrna呈封闭环状结构，不受rna外切酶影响，表达更稳定，在肿瘤中发挥了更重要的调控作用。《nature》杂志早些年前已经揭示了circrna能够影响基因的表达的作用，如充当分子“海绵”以解除mirna对靶基因的抑制作用、结合功能蛋白参与转录翻译等过程调控。rna结合蛋白(rna binding protein,rbp)是细胞中一类重要的蛋白质,它们通过识别特殊的rna结合域与rna互作,广泛参与到rna剪切、转运、序列编辑及翻译控制等多个转录后调控。通过设计生物素标记的circrna接头序列互补序列的探针，拉下circrna的同时拉下与之内源性结合的蛋白，并考察蛋白富集程度高的目标蛋白。
4、环状非编码rna(circrnas)的异常表达已经成为人类癌症研究的热点分子，多种circrna参与于肿瘤血管生成、侵袭转移过程中。然而在肾癌领域，国内外均未见骨转移相关circrna相关的研究报道。申请人开展的circrna相关基础实验已获得了初步结果，展现出了良好的预测效能，这一肾癌特异性circrna或能成为骨转移事件乃至肿瘤进展的预测靶标，最终为临床患者带去治疗契机。
技术实现思路
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技术实现要素：
1、针对现有技术中的上述技术问题，本发明提出了环状非编码rna circkcnk2作为预测肾癌骨转移标记物或者肾癌预后评价的用途，所述的这种环状非编码rna circkcnk2作为预测肾癌骨转移或者肾癌预后评价的标记物的用途要解决现有技术对于肾癌患者的诊断和预后缺乏有效标记物的问题。
2、本发明提供了环状非编码rna circkcnk2作为肾癌预测骨转移或者肾癌预后评价的生物标记物的用途，环状非编码rna circkcnk2的序列如seq id no.1所示。
3、进一步的，环状非编码rna circkcnk2高表达患者较circkcnk2低表达患者更容易出现骨转移相关pfs事件(pfs表示的是维持病情稳定的时间,时间越长,表明受益越大)，所述的环状非编码rna circkcnk2高表达患者是指△△ct小于7.36，所述的环状非编码rnacirckcnk2低表达患者是指△△ct大于7.36。
4、本发明提供了环状非编码rna circkcnk2作为肾癌预测骨转移或者肾癌预后评价的生物标记物在制备用于预测肾细胞癌骨转移进展或者肾癌预后评价的试剂盒中的用途，环状非编码rna circkcnk2的序列如seq id no.1所示。
5、本发明还提供了一种用于预测肾细胞癌骨转移进展或者肾癌预后评价的试剂盒，含有检测环状非编码rna circkcnk2和内参的引物，检测circkcnk2的上游引物序列如seqid no.7所示，检测circkcnk2的下游引物序列如seq id no.8所示。
6、所述的试剂盒中，还含有内参，所述的内参为β-actin，检测β-actin的上游引物序列如seq id no.9所示，检测β-actin的下游引物序列如seq id no.10所示。
7、进一步的，所述的试剂盒中，环状非编码rna circkcnk2作为肾癌预测骨转移或者肾癌预后评价的生物标记物，环状非编码rna circkcnk2的序列如seq id no.1所示。
8、本发明和已有技术相比，其技术效果是积极和明显的。本发明可以通过检测患者肾癌组织中circkcnk2的表达水平了解患者骨转移事件及远期预后的情况。本发明发现在肾癌人群中，circkcnk2高表达患者(△△ct小于7.36)较circkcnk2低表达患者更容易出现骨转移相关pfs事件，生存时间较短。一定程度上，能尽早发现高表达circkcnk2的肾癌患者，可以提前进行手术、放疗、靶向等治疗，可以提高生存时间。
1.环状非编码rna circkcnk2作为肾癌预测骨转移或者肾癌预后评价的生物标记物在制备用于预测肾细胞癌骨转移进展或者肾癌预后评价的试剂盒中的用途，环状非编码rnacirckcnk2的序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：环状非编码rna circkcnk2高表达患者较circkcnk2低表达患者更容易出现骨转移相关pfs事件。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的环状非编码rna circkcnk2高表达患者是指△△ct小于7.36，所述的环状非编码rna circkcnk2低表达患者是指△△ct大于7.36。
4.环状非编码rna circkcnk2作为肾癌预测骨转移或者肾癌预后评价的生物标记物的用途，环状非编码rna circkcnk2的序列如seq id no.1所示。
5.一种用于预测肾细胞癌骨转移进展或者肾癌预后评价的试剂盒，其特征在于：含有检测环状非编码rna circkcnk2，检测circkcnk2的上游引物序列如seq id no.7所示，检测circkcnk2的下游引物序列如seq id no.8所示。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒中，还含有内参，所述的内参为β-actin，检测β-actin的上游引物序列如seq id no.9所示，检测β-actin的下游引物序列如seq id no.10所示。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒中，环状非编码rnacirckcnk2作为肾癌预测骨转移或者肾癌预后评价的生物标记物，环状非编码rnacirckcnk2的序列如seq id no.1所示。
