本发明涉及生物检测，尤其涉及一种用于肾穿刺组织活检光镜特殊染色的试剂盒及染色方法。
背景技术：
1、肾穿刺活检病理检查主要包括常规he染色、pasm套masson染色、pas染色、masson染色、congo red染色（刚果红染色）、免疫组化染色或免疫荧光染色以及电镜检查，以上检查相辅相成，缺一不可，是肾脏疾病病理诊断的基本检查。其中，pasm套masson染色、pas染色、masson染色、congo red染色（刚果红染色）属于特殊染色，可直观地显示肾小球基底膜的病变、肾小管的损伤、肾间质炎症及纤维化的情况、血管的硬化程度及特殊蛋白的沉积量及沉积部位等，对于确定肾脏疾病的病理类型有着十分重要的意义。
2、现有肾穿刺组织活检光镜特殊染色方法主要通过自制特殊染色试剂或现有商业化试剂盒实现，但目前市面上可购买到的pasm套masson染色试剂盒、masson染色试剂盒、congo red染色试剂盒存在对于目标物质的上色不足以及非目标物质的上色过度问题，不能清晰勾画出病变部位，且商品化的试剂盒广谱的用于所有组织，对肾脏组织的结构没有针对性的勾勒，严重影响医生的病理诊断，影响治疗方案的制定，进而影响病人的治疗效果。因而，亟需对肾穿刺组织活检光镜特殊染色剂进行优化。
技术实现思路
1、鉴于上述的分析，本发明实施例旨在提供一种用于肾穿刺组织活检光镜特殊染色的试剂盒及染色方法，包含pasm套masson染色剂、masson染色剂以及刚果红染色剂，用以解决现有肾穿刺组织活检光镜特殊染色试剂盒对于目标物质的上色不足以及对非目标物质上色过度的问题。
2、本发明的目的主要是通过以下技术方案实现的：
3、本发明提供了一种用于肾穿刺组织活检光镜特殊染色的试剂盒，包括pasm套masson染色剂、masson染色剂和刚果红染色剂；
4、所述pasm套masson染色剂包括：过碘酸、六胺银工作液、硫代硫酸钠溶液、天青石蓝溶液、mayer苏木素、碳酸锂溶液、第一自制试剂、第二自制试剂和第三自制试剂；
5、所述masson染色剂包括重铬酸钾混合溶液、天青石蓝溶液、mayer苏木素、碳酸锂溶液、第一自制试剂、第二自制试剂和第三自制试剂；
6、所述刚果红染色剂包括刚果红染液、氢氧化钾溶液、harris苏木素、盐酸酒精混合溶液和碳酸锂溶液；
7、所述第一自制试剂包括比布里希猩红、酸性品红、去离子水和冰醋酸；
8、所述第二自制试剂包括磷钼酸、磷钨酸和去离子水；
9、所述第三自制试剂包括水溶性苯胺蓝、去离子水和冰醋酸。
10、进一步地，所述pasm套masson染色剂中，所述过碘酸质量浓度为0.5-5%；
11、所述六胺银工作液包括六次甲基四胺、硝酸银和四硼酸钠，所述六次甲基四胺、硝酸银和四硼酸钠的体积比为25∶5∶3；
12、所述硫代硫酸钠溶液的质量浓度为2-10%；
13、所述碳酸锂溶液的质量浓度为1-10%。
14、进一步地，所述masson染色剂中，所述重铬酸钾混合溶液包括重铬酸钾溶液和三氯醋酸溶液，所述重铬酸钾溶液和三氯醋酸溶液的体积比为1∶1；
15、所述天青石蓝溶液包括硫酸高铁胺、天青石蓝、甘油和去离子水；
16、所述碳酸锂溶液的质量浓度为1-10%。
17、进一步地，所述刚果红染色剂中，所述刚果红染液由0.1-5g刚果红粉末用50%乙醇定容至100ml配制而成；
18、所述氢氧化钾溶液由0.02-2g氢氧化钾用80%乙醇定容至100ml配置而成；
19、所述盐酸酒精混合溶液由1ml的浓盐酸中加入99ml70%的乙醇配置而成。
20、进一步地，所述第一自制试剂通过将0.4-1.8g比布里希猩红和0.05-0.2g酸性品红用去离子水定容至100ml，加入1ml冰醋酸混匀配置而成。
21、进一步地，第二自制试剂通过将1-5g磷钼酸和0.5-5g磷钨酸加去离子水定容至100ml配置而成。
22、进一步地，所述第三自制试剂通过1-8g水溶性苯胺蓝加去离子水定容至100ml，加入1ml冰醋酸混匀配置而成。
23、本发明还提供了一种用于肾穿刺组织活检光镜特殊染色的染色方法，通过上述试剂盒完成染色，包括使用所述试剂盒中的pasm套masson染色剂、masson染色剂和刚果红染色剂对肾穿刺组织的不同切面进行染色；
24、使用pasm套masson染色剂的染色方法为：将肾穿刺组织石蜡包埋后，制成2μm石蜡切片贴于阳离子防脱片上，烤片后脱蜡水洗后，在0.5-5%的过碘酸溶液中浸泡15-25min，水洗三遍，放入六胺银工作液浸泡并通过66-86℃的水浴加热8-16min后镜检，水洗三遍，通过硫代硫酸钠溶液定影1-2min，水洗三遍，在天青石蓝溶液中浸染8-15min，水洗三遍，在mayer苏木素中浸染8-15min，水洗三遍，碳酸锂返蓝数秒，水洗三遍，在第一自制试剂中浸染15-25min，水洗三遍，在第二自制试剂中浸染数秒，在第三自制试剂中浸染数秒，水洗三遍，脱水封片。
25、进一步地，所述使用masson染色剂的染色方法为：将肾穿刺组织石蜡包埋后，制成2μm石蜡切片贴于阳离子防脱片上，烤片后脱蜡，无需水洗，直接浸入bouin 's溶液，水浴加热至55-65℃，加热40-60min，水洗三遍，放入重铬酸钾溶液浸泡15-25min，水洗三遍，在天青石蓝溶液中浸染8-15min，水洗三遍，在mayer苏木素中浸染8-15min，水洗三遍，碳酸锂返蓝数秒，水洗三遍，在第一自制试剂中浸染15-20min，水洗三遍，在第二自制试剂中浸染数秒，在第三自制试剂中浸染数秒，水洗三遍，脱水封片。
26、进一步地，所述使用刚果红染色剂的染色方法为：将肾穿刺组织石蜡包埋后，制成2μm石蜡切片贴于阳离子防脱片上，烤片后脱蜡，无需水洗，直接浸入刚果红染液5-20min，浸入氢氧化钾溶液分化数秒，水洗三遍，在harris苏木素中浸染8-15min，水洗三遍，在盐酸酒精混合溶液中分化数秒，水洗三遍，碳酸锂返蓝数秒，水洗三遍，脱水封片。
27、与现有技术相比，本发明至少可实现如下有益效果之一：
28、1、本发明的用于肾穿刺组织活检光镜特殊染色的试剂盒包含的三种染色剂，通过组成材料的选择以及配比的精确设计，可以实现对目标物质的适度上色，同时对非目标物质的上色较浅，不会过度，增加了对比度，突出病变部位，可充分满足诊疗要求，弥补肾脏专科病理光镜染色试剂盒缺失的情况。
29、2、本发明的用于肾穿刺组织活检光镜特殊染色的试剂盒，单次染色可满足最大量96位病人肾穿刺组织的同时染色，并且单次染色中的每例肾穿刺组织均具有相同的染色效果，可以同时满足染色产量和质量。
30、3、本发明的用于肾穿刺组织活检光镜特殊染色的试剂盒及染色方法，可在较短时间内同时完成pasm套masson染色、masson染色、刚果红染色三种特殊染色，降低了人力成本；通过本发明的试剂盒进行肾穿刺组织染色时，全部的染色流程仅需一人完成，操作简便，无复杂操作流程，染色工序简单，但染色效果优于现有试剂盒，节省了人力及耗材；同时，染色过程易于控制，可随时中止染色流程。
31、本发明中，上述各技术方案之间还可以相互组合，以实现更多的优选组合方案。本发明的其他特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分优点可从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过说明书以及附图中所特别指出的内容中来实现和获得。
1.一种用于肾穿刺组织活检光镜特殊染色的试剂盒，其特征在于，包括pasm套masson染色剂、masson染色剂和刚果红染色剂；
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述pasm套masson染色剂中，所述过碘酸质量浓度为0.5-5%；
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述masson染色剂中，所述重铬酸钾混合溶液包括重铬酸钾溶液和三氯醋酸溶液，所述重铬酸钾溶液和三氯醋酸溶液的体积比为1∶1；
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述刚果红染色剂中，所述刚果红染液由0.1-5g刚果红粉末用50%乙醇定容至100ml配制而成；
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述第一自制试剂通过将0.4-1.8g比布里希猩红和0.05-0.2g酸性品红用去离子水定容至100ml，加入1ml冰醋酸混匀配置而成。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，第二自制试剂通过将1-5g磷钼酸和0.5-5g磷钨酸加去离子水定容至100ml配置而成。
7.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述第三自制试剂通过1-8g水溶性苯胺蓝加去离子水定容至100ml，加入1ml冰醋酸混匀配置而成。
8.一种用于肾穿刺组织活检光镜特殊染色的染色方法，通过权利要求1-7任一项所述试剂盒完成染色，其特征在于，包括使用所述试剂盒中的pasm套masson染色剂、masson染色剂和刚果红染色剂对肾穿刺组织的不同切面进行染色；
9. 根据权利要求8所述的染色方法，其特征在于，所述使用masson染色剂的染色方法为：将肾穿刺组织石蜡包埋后，制成2μm石蜡切片贴于阳离子防脱片上，烤片后脱蜡，无需水洗，直接浸入bouin 's溶液，水浴加热至55-65℃，加热40-60min，水洗三遍，放入重铬酸钾溶液浸泡15-25min，水洗三遍，在天青石蓝溶液中浸染8-15min，水洗三遍，在mayer苏木素中浸染8-15min，水洗三遍，碳酸锂返蓝数秒，水洗三遍，在第一自制试剂中浸染15-20min，水洗三遍，在第二自制试剂中浸染数秒，在第三自制试剂中浸染数秒，水洗三遍，脱水封片。
10.根据权利要求9所述的染色方法，其特征在于，所述使用刚果红染色剂的染色方法为：将肾穿刺组织石蜡包埋后，制成2μm石蜡切片贴于阳离子防脱片上，烤片后脱蜡，无需水洗，直接浸入刚果红染液5-20min，浸入氢氧化钾溶液分化数秒，水洗三遍，在harris苏木素中浸染8-15min，水洗三遍，在盐酸酒精混合溶液中分化数秒，水洗三遍，碳酸锂返蓝数秒，水洗三遍，脱水封片。
