本发明涉及cd111抗原作为多形核髓源性抑制细胞(pmn-mdsc)的新型特异性诊断和治疗标志物。具体而言，本发明涉及通过采用cd111抗原作为多形核髓源性抑制细胞(pmn-mdsc)的标志物来检测生物样品中的所述细胞的方法以及所述标志物作为免疫治疗靶标的用途。
背景技术：
1、众所周知，髓源性抑制细胞(mdsc)包括具有免疫调节活性的成熟和未成熟髓细胞的异质性群体。mdsc来源于常见的造血祖细胞，能够抑制个体的先天免疫系统和适应性免疫系统。
2、在健康个体中，髓细胞系(imc)的前体约占外周血单核细胞(pbmc)的2.5％，在骨髓中产生并分化为粒细胞、巨噬细胞或树突细胞。相反，诸如癌症、各种感染性疾病、败血症、创伤、骨髓移植和一些自身免疫性疾病等病理状况会诱导imc分化的部分阻断和随后的mdsc积累。大量证据表明mdsc在人类肿瘤中的重要性，因为它们能够促进肿瘤进展、转移和诱导免疫系统对肿瘤的耐受性(1,2)。特别是，对这些细胞的研究表明，它们的扩增与以炎症状态为特征的各种病理状况相关，包括感染、肿瘤和自身免疫性疾病。此外，已经强调某些因素可能促进mdsc的扩增和活化。迄今为止，文献中的大多数证据主要基于对动物肿瘤模型和癌症患者的研究。然而，在自身免疫性病理中研究这些细胞也是非常重要的，在这些病理中必须调节过度激活的免疫系统。在这些自身免疫性病理中，mdsc已被证明有利于维持免疫反应的稳态(3)。
3、由于mdsc的表型和功能异质性，其发育、积累和发挥活性的确切机制尚未明确。pmn-mdsc的存在和抑制作用先前已在治疗高危白血病的单倍体相合移植的体外研究中得到证实。特别地，在造血干细胞移植的情况下，供体的成熟nk细胞在化疗/放疗方案后清除患者体内残留的白血病细胞方面起着重要作用。然而，在“αβt细胞和b细胞去除”的情况下，供体nk细胞的抗白血病作用受到极大抑制。如前所述，在通常用g-csf“动员”的供体移植物中，除了造血干细胞显著增加外，还有pmn-mdsc的积累。这些细胞以不同的机制(ido、pge2和外泌体的释放)抑制供体成熟nk细胞的活性，从而损害供体成熟nk细胞的抗白血病作用(4)。
4、此外，在肿瘤患者中，观察到外周血中pmn-mdsc的存在与对治疗的反应之间存在相关性(1)。
5、因此，pmn-mdsc显示出抑制免疫细胞抗肿瘤反应的非凡能力。鉴于pmn-mdsc在不同病理中的免疫抑制作用，因此重要的是能够通过能够直接识别它们的标志物来容易地识别它们，以便能够通过靶向选择从造血产物(在干细胞移植的情况下)和瘤形成患者的外周血中消除它们。特别地，在移植的情况下，这些细胞的直接鉴定和选择/消除将使得nk细胞的抗白血病活性(gvl)能够功能性恢复，而在瘤形成患者中，这将使得有可能容易地验证它们在外周血中的存在并评估治疗的有效性和疾病的任何复发。
6、然而，到目前为止还没有鉴定出用于鉴定pmn-mdsc的专属标志物。
7、目前，为了鉴定mdsc，有必要结合各种标志物，使mdsc分成两组：单核细胞(mo)和多形核细胞(pmn)。由于两组mdsc在形态上与成熟髓细胞和嗜中性粒细胞相似，因此为了鉴定它们，有必要评估特定表面标志物相互组合的表达以及它们的免疫抑制活性，如先前的研究所示(5)。mdsc被鉴定为谱系(cd3/56/19/123)-hla-drlow/negcd33+cd11b+；mo-mdsc是cd14+，而pmn-mdsc是cd15+cd66b+。
8、为了鉴定这些细胞，有必要进行以下步骤：在密度梯度介质上进行分层，然后进行复杂的表型分析，确定不同标志物的表达或缺乏，最后通过功能测试评估免疫抑制潜力。
9、鉴于以上所述，显然需要提供用于选择性鉴定pmn-mdsc的新型标志物，其克服了已知标志物的缺点。
10、根据本发明的旨在提供用于鉴定pmn-mdsc的特异性标志物的技术方案符合这一背景。
11、众所周知，cd111标志物，也称为脊髓灰质炎病毒受体相关1(pvrl1)或纤连蛋白-1，是属于免疫球蛋白超家族的人类蛋白质，也被认为是纤连蛋白的成员。它是一种膜蛋白，具有三个细胞外免疫球蛋白结构域、单个跨膜螺旋和一个细胞质尾。cd111是一种粘附分子，以不依赖ca2+的方式发挥作用。另外如下文进一步显示的实验数据(特别是图2a)所证实，cd111标志物位于各种组织的连接处(图2a)，特别是上皮组织连接处之间或神经元的化学突触中。在化学突触中，pvrl1与pvrl3(纤连蛋白-3)相互作用，这两种蛋白质都可以在大脑发育的早期阶段的神经元组织中发现。cd111蛋白还通过与病毒糖蛋白d(gd)相互作用在单纯疱疹病毒进入细胞中发挥作用(6)。
技术实现思路
1、根据本发明，现已发现cd111标志物能够选择性地鉴定pmn-mdsc。更详细地，如下面进一步报道的实验数据所示，根据本发明，已经观察到通过已知方法鉴定的所有pmn-mdsc表达cd111标志物。已知与健康个体相比，pmn-mdsc在肿瘤个体的外周血中高度丰富。
2、与已知方法不同，根据本发明的cd111标志物有利地能够区分pmn-mdsc和它们的嗜中性对应物，而无需分离单核细胞。事实上，在缺乏旨在纯化pbmc的外周血分层步骤的情况下，当通过显微镜和流式细胞术进行分析时，pmn-mdsc和嗜中性粒细胞显示出具有相同的形态。因此，根据迄今为止已知的方法直接鉴定外周血中的这些细胞是不可能的。令人惊讶的是，通过根据本发明鉴定cd111标志物，可以选择性地直接在外周血中鉴定pmn-mdsc，因为嗜中性粒细胞不表达该标志物。
3、因此，根据本发明对cd111表达的评估有利地允许直接在外周血样品中快速、直接鉴定pmn-mdsc，并有可能研究它们对病程的影响和对所用各种治疗方法的反应。如上所述，事实上，已知pmn-mdsc显著抑制免疫系统的淋巴效应细胞如nk细胞和t淋巴细胞的功能。
4、此外，根据本发明的cd111标志物可有利地用作免疫治疗靶标/标志物，以消除该细胞亚群，即pmn-mdsc，从而恢复免疫系统的效应细胞的抗肿瘤功能。
5、因此，本发明的一个特定目的是cd111蛋白(基因id:5818)作为检测生物样品中多形核髓源性抑制细胞(pmn-mdsc)的标志物的用途。
6、根据本发明，生物样品可以选自液体样品，例如外周血、腹水、滑液，或固体组织，例如新鲜的石蜡包埋或冷冻保存的组织活检。
7、本发明还涉及一种检测生物样品中多形核髓源性抑制细胞(pmn-mdsc)的方法，所述方法包括通过鉴定作为所述细胞的标志物的cd111蛋白来检测所述细胞。根据本发明，生物样品可以选自液体样品，例如外周血、腹水、滑液，或固体组织，例如新鲜的石蜡包埋或冷冻保存的组织活检。根据本发明的方法可以通过流式细胞术或免疫组织化学分析来进行。
8、根据本发明，cd111蛋白可有利地用作免疫治疗靶标。例如，cd111标志物可用于制备能够抑制和/或选择性消除多形核髓源性抑制细胞的产品，所述产品以cd111标志物作为其靶标。选择性清除这些细胞能够恢复免疫系统的效应细胞的抗肿瘤功能。
9、本发明进一步涉及一种用于治疗肿瘤或感染性疾病的多形核髓源性抑制细胞的抑制剂产品，所述抑制剂产品以cd111标志物作为其靶标。
10、因此，根据本发明的抑制剂产品是具有cd111分子作为其特异性靶标的分子，并且通过与cd111分子结合，其能够识别并消除/抑制pmn-mdsc。特别地，所述抑制剂产品与cd111的结合能够介导阻断pmn-mdsc的抑制功能或诱导细胞自身(pmn-mdsc)死亡。
11、根据本发明，所述抑制剂产品可选自抗cd111单克隆抗体或用能够选择性识别cd111蛋白的构建体(特别是受体)遗传修饰的效应细胞(例如t和nk淋巴细胞)。
12、特别地，当根据本发明用于治疗肿瘤或感染性疾病的抑制剂产品是能够选择性识别cd111的单克隆抗体时，所述抗体具有能够根据两种方法使用的优点。根据第一种方法，为了激活内源性免疫系统，可以单独施用根据本发明的所述抗体：抗体免疫球蛋白的恒定部分(fc)可以被表达fc部分的受体的内源性免疫系统细胞(自然杀伤细胞和单核细胞)识别。这种特异性识别确保了被鉴定为抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)过程的激活。此外，抗体的fc可以被补体系统识别，并诱导cd111阳性细胞的调理和消除。
13、根据本发明的另一种治疗方法，所述抗体的fc片段可以与毒素、放射性同位素或药物等物质结合，所述物质能够特异性诱导cd111阳性多形核类型的髓源性抑制细胞的死亡。通过这种方式，可以有利地将抗cd111抗体的结合特异性与所述物质的药理活性结合起来。因此，根据本发明，所述抑制剂产品可以是抗cd111单克隆抗体，其中所述抗体或更具体地所述抗体的fc片段与能够诱导多形核类型的髓源性抑制细胞死亡的物质结合，所述物质为例如药物、毒素或放射性同位素。
14、根据本发明，待治疗的肿瘤可选自实体瘤，例如肺癌和成神经细胞瘤，或儿童或成人血癌，例如白血病。
15、此外，本发明涉及一种制备用于干细胞移植的产品的方法，所述方法包括通过使用抗cd111单克隆抗体消除包含干细胞的造血样品中的多形核髓源性抑制细胞的步骤。
1.cd111蛋白作为检测生物样品中多形核髓源性抑制细胞的标志物的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述生物样品选自液体样品，例如外周血、腹水、滑液，或固体组织，例如新鲜的石蜡包埋或冷冻保存的组织活检。
3.检测生物样品中多形核髓源性抑制细胞的方法，所述方法包括通过鉴定作为所述细胞的标志物的cd111蛋白来检测所述细胞。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述生物样品选自液体样品，例如外周血、腹水、滑液，或固体组织，例如新鲜的石蜡包埋或冷冻保存的组织活检。
5.根据权利要求3-4中任一项所述的方法，所述方法通过流式细胞术或免疫组织化学分析进行。
6.多形核髓源性抑制细胞的抑制剂产品，其用于治疗肿瘤或感染性疾病，所述抑制剂产品以cd111标志物作为其靶标。
7.根据权利要求6所述的抑制剂产品，其用于根据权利要求6的用途，其中所述抑制剂产品选自抗cd111单克隆抗体或效应细胞，例如t和nk淋巴细胞，其用构建体进行遗传修饰以选择性识别cd111蛋白。
8.根据权利要求7所述的抑制剂产品，其中所述抑制剂产品是抗cd111单克隆抗体，并且其中所述抗体与能够诱导多形核类型的髓源性抑制细胞死亡的物质结合，所述物质为例如药物、毒素或放射性同位素。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的抑制剂产品，其用于根据权利要求6的用途，其中所述肿瘤选自实体瘤，例如肺癌和成神经细胞瘤，或儿童或成人血癌，例如白血病。
10.制备用于干细胞移植的产品的方法，所述方法包括通过使用抗cd111单克隆抗体消除包含干细胞的造血样品中的多形核髓源性抑制细胞的步骤。
