本发明提供了一类针对hpk1的抑制剂。本发明涉及所述化合物的结构和化学合成方法，及其用于制备hpk1小分子抑制剂以用于治疗突变所引起的多种疾病的用途。
背景技术：
1、t细胞和b细胞和树突状细胞(dcs)是人体免疫系统用于抵抗外来入侵者诸如病毒和细菌以及自身感染或异常细胞如癌细胞的强有力武器。近年来利用患者自身的免疫系统来克服肿瘤细胞所采用的免疫逃逸策略，并增强机体抗肿瘤免疫力是一种新型的癌症治疗策略，其中一种策略是通过抑制通常起维持外周耐受作用的免疫反应的负调控因子，使肿瘤抗原被识别为非自身抗原，从而克服肿瘤细胞免疫逃逸。
2、造血祖细胞激酶1(hpk1或又称map4k1)是一个树突状细胞(dcs)、t细胞和b细胞活化反应的负调控因子，抑制其活性可以增强机体抗肿瘤免疫力。此外，动物研究表明，hpk1的抑制和pd-1/pd-l1抗体药物具有明显的协同抗肿瘤效应。
3、因此，hpk1激酶在疾病治疗特别是癌症治疗中具有关键作用，需要开发一种强效的hpk1激酶抑制剂，以用于癌症等疾病的治疗。现有技术已知的hpk1激酶抑制剂包括hpk1-in-7(选自acs med chem lett.2021；12(3):443-450.published 2021feb 19)等。
4、
5、hpk1激酶有一些同族靶点酶，例如glk激酶等。由于这些酶的蛋白结构相近，导致在抑制hpk1激酶的同时，也容易抑制glk激酶等其它酶。然而，glk激酶是免疫细胞活化的正调控因子，若被不当地抑制，反而会导致免疫细胞不能被活化等不理想后果。因此，在开发hpk1激酶抑制剂时，也期望得到一种对于hpk1激酶具有高选择性(例如相对于glk而言)的抑制剂。此外，在开发hpk1激酶抑制剂时，也期望得到一种代谢稳定性良好和/或相对于现有技术得到改善的抑制剂。
技术实现思路
1、本发明的第一方面，本发明提供了式(i)的化合物或其药学上可接受的盐以及立体异构体：
2、
3、或其盐，其中：
4、x为crx或n；
5、rx选自h或者卤素(例如-f、-cl)、-cn、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3卤代烷基(例如-cf3和-chf2)；优选地，rx选自h、卤素(例如-f、-cl)、c1-3烷基；更优选地，rx为h；
6、r1选自卤素(例如-f、-cl)、-cn、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3卤代烷基(例如-cf3和-chf2)、c1-3卤烷氧基(例如-ocf3、-ochf2和-och2cf3)、c3-6环烷基和-nryry的取代基取代的c1-6烷基、-c(o)oh、-c(o)o(c1-3烷基)、-c(o)nhr1a、-nhc(o)r1a、-c(o)nhnh2、-c(o)nhnhc(o)r1b、-c(o)nhnhc(＝nch2ch3(nh(ch2)2-4n(ch3)2)、1,8-二氧杂-3-氮杂螺[4.5]癸-2-烯基，或选自c6-14芳基(例如苯基)、含有1-4个选自n、o、s的杂原子的5至14元杂芳基(例如噁二唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑基、吡嗪基、咪唑基、三唑基、异噁唑基)、含有1-4个选自n、o、s的杂原子的3至14元杂环烷基(例如二氢噁唑基)，其各自被0至3个r1c取代；
7、优选地，r1选自-c(o)o(c1-3烷基)和同时含有n和o杂原子的5至6元杂芳基(例如噁二唑基、噁唑基、异噁唑基)，其各自被0至3个r1c取代。
8、每个ry独立地为h或c1-3烷基(例如-ch3)；
9、r1a为h、c1-4烷基、c1-3氟烷基、c1-2氰基烷基、-ch2ch2och3、-ch2c≡ch、-(ch2)2-3n(ch3)2、-ch(ch3)(苯基)或-(ch2)mra；
10、ra为c3-7环烷基、c5-8双环烷基、4至7元杂环基、5至8元双环含氮杂环基、苯基或5至6元杂芳基，其各自被0至4个rh取代；
11、每个rh独立地选自卤素(例如f、cl)、-cn、-oh、c1-3烷基、-cd3、-cf3、-chf2、-och3、-ocf3、-ch2(吗啉基)、苯基和苄基；
12、m为0、1、2、3、4或5；
13、r1b为-c(ch3)2oh、-c(cf3)(ch3)oh、环丙基、吡啶基或吡嗪基；
14、每个r1c独立地选自卤素(例如f)、c1-4烷基、c2-6羟基烷基、c1-4卤代烷基(例如c1-4氟烷基)、c2-4羟基-氟烷基、-(ch2)nrc、＝o、-s(c1-2烷基)、3至14元杂环烷基(例如氮杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、四氢吡喃基、二氧代四氢噻喃基、氮杂双环[2.2.2]辛烷基、氟氮杂双环[2.2.2]辛烷基、氨基双环[1.1.1]戊烷基、二甲基氨基双环[1.1.1]戊烷基、乙酰胺基双环[1.1.1]戊烷基、(甲氧基羰基)氨基双环[1.1.1]戊烷基)，含有1-4个选自n、o、s的杂原子的5至14元杂芳基(例如吡啶基、哒嗪基)，或被0至2个独立选自卤素(例如f)、-cn、-cf3、-ch2oh和-oc(o)(二氟氮杂环丁烷基)的取代基取代的c3-6环烷基、c6-14芳基(例如苯基)；
15、优选地，r1c独立地选自c1-4烷基(例如甲基)、c1-4卤代烷基(例如三氟甲基)、c3-6环烷基(例如环丙基)。
16、rc为4至7元杂环基(包括但并不限于例如氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基等)或5至8元双环含氮杂环基(包括但并不限于例如哌嗪基、吗啉基、二氮杂环己烷基等)，其各自被0至4个rx取代；或rc为氨基、c1-4烷基氨基(例如甲基氨基)、二(c1-4烷基)氨基(例如二甲基氨基)；
17、n为0、1、2、3、4或5；
18、linker为-o-、-nh-、-c(o)nrz-、-nrzc(o)-、-c(rl)2-或者-n(rl)-；
19、每一个rz独立地为h、c1-4烷基、c1-4环烷基、单氟或多氟取代的c1-4烷基(例如-cf3和-chf2)；
20、每一rl独立地为h、c1-4烷基或c1-4环烷基；
21、r2选自：-chr2ar2b、-(ch2)1-3nry(ch2)1-3nryry、-(cryry)1-2nryc(o)och2(苯基)、-chr2bch2r2a或-ch2ch2c(o)r2a；选自环丙基、吲唑基、苯基、哌啶基、吡唑基、氧杂环丁烷基、和四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶基的环状基团，其各自被0至5个选自卤素(例如-f、-cl)、-cn、-ch3、-sch3、-oh、烷氧基、嘧啶基和苯基的取代基取代；c3-6环烷基或3至14元或含有1-4个选自n、o、s的杂原子的杂环烷基，其任选取代有1-5个r2d，每个r2d独立地为-oh、-ch2oh、-nh2、-ch2nh2、卤素、或者c1-6烷基，其任选取代有1-3个独立地选自以下的基团：oh、卤素、c1-3烷氧基、和c3-7单环环烷基；
22、r2a为c3-6环烷基、噁二唑基、噁唑基、氧杂环丁烷基、苯基、吡唑基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶基或噻唑基，其各自被0至5个r2c取代；
23、r2b为h、-oh、c1-3烷基、c1-2卤代烷基、c1-3羟基烷基(例如-ch2oh)、-ch2och3、-ch2ocf3、-ch2nryry、-ch2s(c1-2烷基)或-ch2n3；
24、每个r2c独立地为f、cl、-cn、-oh、c1-2烷基、c1-3羟基烷基、c1-2氨基烷基、c1-2烷氧基、c1-2氟烷氧基、-ch2o(c1-2烷基)、-nryc(o)(c1-2烷基)、-s(c1-2烷基)、-s(o)2(c1-4烷基)、苯基、甲基环氧乙烷基或嘧啶基；
25、每个ry独立地为h或c1-3烷基(例如-ch3)。
26、优选地，r2选自：-chr2ar2b，其中r2a优选为苯基；被0至5个选自卤素(例如-f、-cl)、-cn、-ch3、-sch3、-oh、烷氧基、嘧啶基和苯基的取代基取代的苯基；c3-6环烷基或4至8元1-4个选自n、o、s的杂原子的杂环烷基，其任选取代有1-5个r2d。
27、r3为h或c1-3烷基(例如-ch3)；
28、r4为h或c1-3烷基(例如-ch3)；或
29、r3、r4连同其所连接的碳原子共同形成c3-8亚环烷基(例如亚环戊基、亚环己基)；
30、r5为h或卤素(例如-f和-cl)。
31、在一种具体的实施方案中，rc为4至7元杂环基或5至8元双环含氮杂环基，其各自被0至4个rx取代；
32、r3为h或c1-3烷基(例如-ch3)；
33、r4为h或c1-3烷基(例如-ch3)；且
34、r5为h。
35、在一种具体的实施方案中，根据式(i)提供的化合物或其盐，其中linker为-n(rl)-，每一rl独立地为h、c1-4烷基或c1-4环烷基，r1、r2、r3、r4、r5和x在第一方面中定义，该实施方案的化合物或其盐具有式(ii)的结构：
36、
37、在一种具体的实施方案中，根据式(ii)提供的化合物或其盐，其中x为n，r1、r2、r3、r4和r5在第一方面中定义该实施方案的化合物或其盐具有式(iia)的结构：
38、
39、在一种具体的实施方案中，根据式(ii)提供的化合物或其盐，其中x为crx，rx为h或者-f、-cl、-cn、c1-3烷基、c1-3烷氧基、c1-3卤代烷基(例如-cf3和-chf2)，r1、r2、r3、r4和r5在第一方面中定义该实施方案的化合物或其盐具有式(iib)的结构：
40、
41、在一种具体的实施方案中，根据式(i)提供的化合物或其盐，其中linker为-c(o)nrz-，每一个rz独立地为h、c1-4烷基、c1-4环烷基、单氟或多氟取代的c1-4烷基(例如-cf3和-chf2)，r1、r2、r3、r4和r5在第一方面中定义该实施方案的化合物或其盐具有式(iii)的结构：
42、
43、在一种具体的实施方案中，根据式(iii)提供的化合物或其盐，其中x为n，r1、r2、r3、r4和r5在第一方面中定义该实施方案的化合物或其盐具有式(iiia)的结构：
44、
45、在一种具体的实施方案中，根据式(iii)提供的化合物或其盐，其中x为crx，rx为h或者-f、-cl、-cn、c1-3烷基、c1-3烷氧基c1-3卤代烷基(例如-cf3和-chf2)，r1、r2、r3、r4和r5在第一方面中定义该实施方案的化合物或其盐具有式(iiib)的结构：
46、
47、在一种具体的实施方案中，根据式(i)提供的化合物或其盐，其中linker为-nrzc(o)-，每一个rz独立地为h、c1-4烷基、c3-6环烷基、单氟或多氟取代的c1-4烷基(例如-cf3和-chf2)，r1、r2、r3、r4和r5在第一方面中定义该实施方案的化合物或其盐具有式(iv)的结构：
48、
49、在一种具体的实施方案中，根据式(iv)提供的化合物或其盐，其中x为n，r1、r2、r3、r4和r5在第一方面中定义该实施方案的化合物或其盐具有式(iva)的结构：
50、
51、在一种具体的实施方案中，根据式(iv)提供的化合物或其盐，其中x为crx，rx为h或者-f、-cl、-cn、c1-3烷基、c1-3烷氧基c1-3卤代烷基(例如-cf3和-chf2)，r1、r2、r3、r4和r5在第一方面中定义该实施方案的化合物或其盐具有式(ivb)的结构：
52、
53、在一种具体的实施方案中，根据式(i)提供的化合物或其盐，r1选自-f、-cl、-cf3、-chf2、-cn、-c(o)nhr1a、-nhc(o)r1a、苯基、杂芳基、噁二唑基、噻唑基、噁唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑基、吡嗪基、咪唑基、三唑基、异噁唑基、二氢噁唑基等环状基团，其各自被0至3个r1c取代。
54、每个ry独立地为h或-ch3；
55、r1a为h、c1-4烷基、c1-3氟烷基、c1-2氰基烷基、-ch2ch2och3、-ch2c≡ch、-(ch2)2-3n(ch3)2、-ch(ch3)(苯基)或-(ch2)mra；
56、ra为c3-7环烷基、c5-8双环烷基、4至7元杂环基、5至8元双环含氮杂环基、苯基或5至6元杂芳基，其各自被0至4个rh取代；
57、每个rh独立地选自f、cl、-cn、-oh、c1-3烷基、-cd3、-cf3、-chf2、-och3、-ocf3、-ch2(吗啉基)、苯基和苄基；
58、m为0、1、2、3、4或5；
59、r1b为-c(ch3)2oh、-c(cf3)(ch3)oh、环丙基、吡啶基或吡嗪基；
60、每个r1c独立地为f、c1-4烷基、c2-6羟基烷基、c1-4氟烷基、c2-4羟基-氟烷基、-(ch2)nrc、＝o、-s(c1-2烷基)、氮杂环丁烷基、吗啉基、哌啶基、四氢吡喃基、二氧代四氢噻喃基、氟苯基、吡啶基、哒嗪基、氮杂双环[2.2.2]辛烷基、氟氮杂双环[2.2.2]辛烷基、氨基双环[1.1.1]戊烷基、二甲基氨基双环[1.1.1]戊烷基、乙酰胺基双环[1.1.1]戊烷基、(甲氧基羰基)氨基双环[1.1.1]戊烷基、或被0至2个独立选自f、-cn、-cf3、-ch2oh和-oc(o)(二氟氮杂环丁烷基)的取代基取代的c3-6环烷基；
61、rc为4至7元杂环基或5至8元双环含氮杂环基，其各自被0至4个rx取代；或rc为氨基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基；
62、n为0、1、2、3、4或5；
63、在一个更具体的方案中，r1选自-f、-cl、-cf3、-chf2、-cn、-c(o)nh2、-c(o)oh、-c(o)och2ch3、-c(o)nh(ch2)3n(ch3)2、-c(o)nh(ch2)2och3、-c(o)nh(ch2)2n(ch3)2、-c(o)nhc(ch3)4、-c(o)nhch2ch(ch3)2、-c(o)nhch(ch3)2、-c(o)nhch2ch2ch3、-c(o)nhch2ch3、-c(o)nhnh2、
64、
65、
66、
67、在一种更优选的实施方案中，本发明提供如式(v)所示的化合物或盐。
68、
69、其中r1、rl、r2a、r2b、r3、r4、r5如前文所定义。
70、在一种更优选的实施方案中，本发明提供如式(vi)所示的化合物或盐。
71、
72、其中r1、r3、r4、r5如前文所定义。
73、在本发明的一个优选的方案中，所述化合物为选自下表1中的化合物或其药学上可接受的盐：
74、表1：本发明的具体化合物
75、
76、
77、
78、本发明的前述各通式化合物及具体化合物具有优异的hpk1抑制活性，并且更优选地，针对hpk1(例如相对于glk)具有优异的选择性，并且具有良好的代谢稳定性。
79、通用合成方法
80、本发明中的化合物，可通过商业购得的试剂以如下的合成方法和反应制备，或者以其他试剂及技术人员熟知的常规方法制备。
81、本发明化合物可以通过许多种方法制备，包括标准的化学方法。在下文列出了说明性的一般合成方法，可以通过有机合成领域中已知的方法制备式(ii)、式(iii)和式(iv)化合物。在参考下文所述的实施例的方法时，应当理解，可以对部分取代基进行本领域中熟知的基团替换，从而在不偏离本发明的主旨的情况下得到类似的衍生物。如果必要，按照一般原理或化学方法对敏感性或反应性基团使用保护基团。保护基团是按照有机合成的标准方法进行操作(t.w.greene和p.g.m.wuts,protective groups in organic synthesis,第三版,wiley,new york 1999)。这些基团在化合物合成的方便阶段使用本领域技术人员很清楚的方法除去。选择方法以及反应条件和其处理次序，应当与式(ii)、式(iii)和式(iv)化合物的制备相符。
82、本领域技术人员将能够识别在式(ii)、式(iii)和式(iv)化合物中是否存在立体中心。因此，本发明包括可能的立体异构体，并且既包括外消旋化合物又包括单个对映异构体。当所需化合物是单个对映异构体时，其可以通过立体特异性合成或通过终产物或任何方便的中间体拆分获得。终产物、中间体或起始原料的拆分可以通过本领域已知的任何适合的方法实现。参见，例如e.l.eliel,s.h.wilen和l.n.mander的“stereochemistry oforganic compounds”(wiley-interscience,1994)。
83、实施例
84、下面的实施例可以对本发明做进一步的描述，然而，这些实施例不应作为对本发明的范围的限制。本发明的化合物(特别是式(ii)、式(iii)和式(iv)及其子通式化合物)包括但不限于实施例1～28所述的化合物，其化学名称和表征数据如下，且其结构分别对应于前述表1中所示的化合物1～28。
85、实施例1：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物1)
86、lcms:m/z 458.2[m+h]+。
87、实施例2：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物2)
88、lcms:m/z 472.2[m+h]+。
89、实施例3：(s)-5-((5-(5-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-基)-4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物3)
90、lcms:m/z 498.2[m+h]+。
91、实施例4：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物4)
92、lcms:m/z 472.1[m+h]+。
93、实施例5：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(3-甲基异噁唑-5-基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物5)
94、lcms:m/z 471.2[m+h]+。
95、实施例6：n-(2-氰基-6-氟苯基)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异二氢吲哚-5-基)胺基)-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶基-4-甲酰胺(化合物6)
96、lcms:m/z 485.1[m+h]+。
97、实施例7：2-((3,3-二甲基-1-氧代异二氢吲哚-5-基)胺基)-n-((1s,2r)-2-羟基环戊基)-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶基-4-甲酰胺(化合物7)
98、lcms:m/z 450.2[m+h]+。
99、实施例8：2-氯-6-氰基-n-(2-((3,3-二甲基-1-氧代异二氢吲哚-5-基)胺基)-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-4-基)苯甲酰胺(化合物8)
100、lcms:m/z 501.8[m+h]+。
101、实施例9：(s)-6-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)胺基)-1,1-二甲基-1,2-二氢-3h-吡咯并[3,4-c]吡啶基-3-酮(化合物9)
102、lcms:m/z 459.1[m+h]+。
103、实施例10：(r)-2-((1,1-二甲基-3-氧代-2,3-二氢-1h-吡咯并[3,4-c]吡啶-6-基)胺基)-n-甲基-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)-n-(哌啶-3-基)嘧啶基-4-甲酰胺(化合物10)
104、lcms:m/z 464.2[m+h]+。
105、实施例11：乙基(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)胺基-4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)嘧啶基-5-羧酸(化合物11)
106、lcms:m/z 462.2[m+h]+。
107、实施例12：(s)-6’-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)胺基)螺[环己烷基-1,1’-异吲哚基]-3’-酮(化合物12)
108、lcms:m/z 512.2[m+h]+。
109、实施例13：(s)-6’-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)嘧啶-2-基)胺基)螺[环己烷基-1,1’-异吲哚基]-3’-酮(化合物13)
110、lcms:m/z 512.2[m+h]+。
111、实施例14：(s)-6’-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)胺基)螺[环戊烷基-1,1’-异吲哚基]-3’-酮(化合物14)
112、lcms:m/z 498.3[m+h]+。
113、实施例15：(s)-5-((4-(2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物15)
114、lcms:m/z 472.2[m+h]+。
115、实施例16：(s)-5-((4-(2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(5-甲基异噁唑-3-基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物16)
116、lcms:m/z 471.2[m+h]+。
117、实施例17：(r)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)胺基)-n-甲基-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)-n-(哌啶-3-基)嘧啶基-4-甲酰胺(化合物17)
118、lcms:m/z 463.2[m+h]+。
119、实施例18：(r)-n-甲基-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)-2-((3’-氧代螺[环己烷基-1,1’-异吲哚]-6-基)胺基)-n-(哌啶-3-基)嘧啶基-4-甲酰胺(化合物18)
120、lcms:m/z 503.1[m+h]+。
121、实施例19：(r)-n-环丙基-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)-2-((3’-氧代螺[环己烷基-1,1’-异吲哚]-6-基)胺基)-n-(哌啶-3-基)嘧啶基-4-甲酰胺(化合物19)
122、lcms:m/z 529.3[m+h]+。
123、实施例20：(s)-4-氟-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物20)
124、lcms:m/z 476.2[m+h]+。
125、实施例21：(r)-2-((4-氟-3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)胺基)-n-甲基-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)-n-(哌啶-3-基)嘧啶基-4-甲酰胺(化合物21)
126、lcms:m/z 481.2[m+h]+。
127、实施例22：(r)-n-(二氟甲基)-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)-2-((3’-氧代螺[环己烷基-1,1’-异吲哚]-6-基)胺基)-n-(哌啶-3-基)嘧啶基-4-甲酰胺(化合物22)
128、lcms:m/z 539.1[m+h]+。
129、实施例23：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物23)
130、lcms:m/z 458.2[m+h]+。
131、实施例24：(s)-5-((5-(二氟甲氧基)-4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物24)
132、lcms:m/z 456.2[m+h]+。
133、实施例25：(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)胺基)-4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)嘧啶基-5-腈(化合物25)
134、lcms:m/z 415.2[m+h]+。
135、实施例26：(s)-5-((5-(二氟甲基)-4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物26)
136、lcms:m/z 440.2[m+h]+。
137、实施例27：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物27)
138、lcms:m/z 488.2[m+h]+。
139、实施例28：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-甲基嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物28)
140、lcms:m/z 404.2[m+h]+。
141、实施例29：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)氨基)-5-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)-甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物29)
142、lcms:m/z 569.1[m+h]+。
143、实施例30：(s)-5-((4-((-2-羟基-1-苯基乙基)氨基)-5-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)-甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物30)
144、lcms:m/z 584.2[m+h]+。
145、实施例31：(s)-5-(4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基-二甲基异吲哚-1-酮(化合物31)
146、lcms:m/z 436.2[m+h]+。
147、实施例32：(s)-5-((4-(2-羟基-1-吡啶-2-氨基2-羟基-1-吡啶-2-氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-嘧啶)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物32)
148、lcms:m/z 473.2[m+h]+。
149、实施例33：(s)-5-((4-((2-羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物33)
150、lcms:m/z 473.0[m+h]+。
151、实施例34：(s)-5-((4-((2-羟基-1-(吡啶-4-基)乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物34)
152、lcms:m/z 473.1[m+h]+。
153、实施例35：(s)-5-((4-((1-环丙基-2-羟丙基-2-基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物35)
154、lcms:m/z 449.9[m+h]+。
155、实施例36：(s)-5-((4-((1-环丁基-3-羟丙基-2-基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物36)
156、lcms:m/z 464.3[m+h]+。
157、实施例37：(s)-5-((4-((1-环丁基-2-羟乙基-2-基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物37)
158、lcms:m/z 450.1[m+h]+。
159、实施例38：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)氨基)-5-(1-(2-羟基-2-甲基丙基基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物38)
160、lcms:m/z 528.2[m+h]+。
161、实施例39：(s)-5-((5-(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物39)
162、lcms:m/z 470.1[m+h]+。
163、实施例40：(s)-5-((4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-5-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮(化合物40)
164、lcms:m/z 491.1[m+h]+。
165、实施例41：(s)-5-((4-((1-环丁基-2-羟乙基)氨基)-5-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮(化合物41)
166、lcms:m/z 505.2[m+h]+。
167、实施例42：(s)-6'-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(化合物42)
168、lcms:m/z 554.2[m+h]+。
169、实施例43：(s)-6'-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环己烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(化合物43)
170、lcms:m/z 568.2[m+h]+。
171、实施例44：(s)-6'-((5-(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(化合物44)
172、lcms:m/z 553.3[m+h]+。
173、通用合成方法举例
174、将前述实施例3的化合物(化合物3)的具体合成步骤例示于下文。本技术的其它实施例化合物以及本技术通式范围内涵盖的化合物，均可以使用本领域已知的原料、试剂和方法，按照类似化合物3的合成策略进行制备。
175、实施例3：(s)-5-((5-(5-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-基)-4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物3)
176、
177、步骤一：5-溴-2-(4-甲氧基苄基)异吲哚-1-酮的合成
178、
179、把4-溴代-2-溴甲基苯甲酸甲酯(80.0g，260mmol)，对甲氧基苄胺(39.2g，286mmol)和三乙胺(65.7g，650mmol)溶于乙腈(800ml)后，在80℃氮气保护下反应12小时。lcms监测反应结束。反应液萃取浓缩打浆后得白色固体5-溴-2-(4-甲氧基苄基)异吲哚-1-酮(32.0g，产率35.2％)。
180、lcms:m/z 331.9[m+h]+。
181、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝7.81(d,j＝0.8hz,1h),7.62-7.72(m,2h),7.21(d,j＝8.6hz,2h),6.91(d,j＝8.6hz,2h),4.64(s,2h),4.32(s,2h),3.72ppm(s,3h)ppm。
182、步骤二：5-溴-2-(4-甲氧基苄基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
183、
184、将5-溴-2-(4-甲氧基苄基)异吲哚-1-酮(20.0g，60mmol)溶于四氢呋喃(200ml)中，在0℃下滴加二(三甲基硅)氨基钠1m四氢呋喃溶液(150ml，150mmol)，然后恢复到室温反应一个小时。再降到-60℃后滴加碘甲烷(13ml，211mmol)，再次恢复到室温并反应两个小时。lcms监测反应结束。反应液在0℃下用饱和氯化铵水溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取，浓缩后打浆得黄色固体5-溴-2-(4-甲氧基苄基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(30.0g，粗品)。
185、lcms:m/z 362.0[m+h]+。
186、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.00(s,1h),7.60-7.72(m,2h),7.29(br d,j＝8.5hz,2h),6.86(d,j＝8.6hz,2h),4.60(s,2h),3.71(s,3h),1.35ppm(s,6h)ppm。
187、步骤三：(2-(4-甲氧基苄基)-3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
188、
189、把5-溴-2-(4-甲氧基苄基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(30.0g，38mmol)和氨基甲酸叔丁酯(11.7g，99.9mmol)溶于二氧六环(300ml)，加入醋酸钯(1.87g，8.33mmol)、45-双二苯基膦-99-二甲基氧杂氧杂蒽杂蒽(9.64g，16.6mmol)和碳酸铯(40.7g，125mmol)后在90℃反应12小时。lcms监测反应结束。反应液用乙酸乙酯萃取浓缩后打浆得黄色固体(2-(4-甲氧基苄基)-3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基甲酸叔丁酯(29.5g，产率84.9％)。
190、lcms:m/z 397.1[m+h]+。
191、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.73(s,1h),7.80(s,1h),7.58(d,j＝8.3hz,1h),7.37(dd,j＝8.3,1.6hz,1h),7.29(d,j＝8.8hz,2h),6.85(d,j＝8.6hz,2h),4.58(s,2h),3.71(s,3h),1.48(s,9h),1.29ppm(s,6h)ppm。
192、步骤四：5-氨基-2-(4-甲氧基苄基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
193、
194、将(2-(4-甲氧基苄基)-3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基甲酸叔丁酯(29.5g，74.4mmol)溶于盐酸二氧六环(300ml)后在25℃反应12小时。lcms监测反应结束。反应液浓缩后打浆得黄色固体5-氨基-2-(4-甲氧基苄基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(22.5g，产率91.8％)。
195、lcms:m/z 297.0[m+h]+。
196、1h nmr(400mhz,chloroform-d):δ＝7.82(d,j＝7.9hz,1h),7.61-7.72(m,2h),7.44(br d,j＝3.5hz,1h),7.31-7.39(m,1h),7.24(d,j＝8.6hz,2h),6.81(d,j＝8.6hz,2h),4.63(s,2h),3.77(s,3h),1.29ppm(s,6h)ppm。
197、步骤五：5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
198、
199、在25℃下向5-氨基-2-(4-甲氧基苄基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(16.1g，54.5mmol)加入三氟乙酸(154g，1.35mol)和三氟甲磺酸(12.3g，81.7mmol)，在120℃反应24小时。lcms监测反应结束。反应液浓缩过柱得黄色固体5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(12.5g，粗品)。
200、lcms:m/z 177.1[m+h]+。
201、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.47(br d,j＝1.6hz,5h),7.53(d,j＝8.1hz,1h),7.15(d,j＝1.4hz,1h),7.07(dd,j＝8.1,1.7hz,1h),1.41ppm(s,6h)ppm。
202、步骤六：(s)-乙基2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸酯的合成
203、
204、25℃把(s)-2-氯-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(500mg，1.55mmol)和5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(479mg，2.72mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)后加入醋酸(93.3mg，1.55mmol)，在90℃下反应12小时。lcms监测反应结束。反应液在0℃用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，硫酸钠干燥，过滤浓缩柱层析得黄色固体(s)-乙基2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸酯(450mg，产率60.2％)。
205、lcms:m/z 462.1[m+h]+。
206、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝11.36-11.50(m,1h),10.06(br s,1h),8.98(br d,j＝7.9hz,1h),8.86(d,j＝8.4hz,1h),8.64(s,1h),8.41(s,1h),8.16-8.30(m,1h),7.83(s,1h),7.59(dd,j＝8.4,1.5hz,1h),5.61(dt,j＝8.0,5.5hz,1h),5.28-5.37(m,1h),5.18(brs,1h),4.22-4.35(m,4h),4.03(q,j＝7.1hz,1h),3.83-3.90(m,1h),3.73-3.82(m,1h),1.99(s,1h),1.25-1.42(m,14h),1.17ppm(t,j＝7.1hz,2h)ppm。
207、步骤七：(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼的合成
208、
209、把(s)-乙基2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸酯(450mg，975umol)溶于水合肼(11.3g，222mmol)后，在80℃氮气保护下反应2小时。lcms监测反应结束。反应液浓缩机分得白色固体(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼(280mg，产率64.0％)。
210、lcms:m/z 448.1[m+h]+。
211、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.75(s,1h),9.56-9.69(m,2h),8.49(s,1h),8.37(s,1h),7.84(s,1h),7.59(br d,j＝7.3hz,1h),7.41(d,j＝8.4hz,1h),7.32-7.38(m,4h),7.24(td,j＝5.7,2.9hz,1h),5.24-5.34(m,1h),5.09(br t,j＝4.7hz,1h),3.78-3.86(m,1h),3.73(dt,j＝10.8,5.3hz,1h),1.38ppm(br d,j＝13.1hz,6h)ppm。
212、步骤八：(s)-n'-(环丙烷羰基)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼的合成
213、
214、把(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼(280mg，626umol)和环丙基羧酸(53.8mg，626umol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(3ml)后，加入o-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-n,n,n,n-四甲基脲六氟膦盐(547mg，1.44mmol)和n,n-二异丙基乙胺(323mg，2.55mmol)后在25℃反应12小时。lcms监测反应结束。反应液萃取浓缩机分纯化得白色固体(s)-n'-(环丙烷羰基)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼(100mg，产率31.0％)。
215、lcms:m/z 516.2[m+h]+。
216、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.17(s,1h),10.01(s,1h),9.88(s,1h),9.53(brd,j＝7.9hz,1h),8.63(s,1h),8.40(s,1h),7.84(d,j＝1.4hz,1h),7.55-7.62(m,1h),7.42(d,j＝8.3hz,1h),7.35(d,j＝4.4hz,4h),7.19-7.28(m,1h),5.25-5.34(m,1h),3.79-3.87(m,1h),3.69-3.78(m,1h),1.63-1.73(m,1h),1.38(d,j＝13.4hz,7h),0.72-0.83ppm(m,4h)ppm。
217、步骤九：(s)-5-((5-(5-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
218、
219、把(s)-n'-(环丙烷羰基)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼(100mg，194umol)溶于四氢呋喃(50ml)后加入对甲苯磺酰氯(222mg，1.16mmol)和三乙胺(78.5mg，776umol)并在55℃反应12小时。lcms监测原料有40％没反应完。反应液浓缩机分纯化得白色固体(s)-5-((5-(5-环丙基-1,3,4-噁二唑-2-基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(12mg，产率12.2％)。
220、lcms:m/z 498.2[m+h]+。
221、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.03(s,1h),8.80(d,j＝7.9hz,1h),8.60(s,1h),8.42(s,1h),7.86(s,1h),7.61(dd,j＝8.4,1.6hz,1h),7.44(d,j＝8.3hz,1h),7.32-7.41(m,4h),7.22-7.28(m,1h),5.38-5.47(m,1h),5.22(t,j＝4.9hz,1h),3.85-3.94(m,1h),3.80(dt,j＝10.8,5.3hz,1h),2.26-2.37(m,1h),1.38(d,j＝14.8hz,6h),1.11-1.21ppm(m,4h)ppm。
222、实施例中其他代表性化合物的合成方法如下：
223、实施例2：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物2)
224、
225、
226、步骤一：(s)-2-(3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-基)氨基)-4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯的合成
227、
228、将(s)-乙基2-氯-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐(2g,6.22mmol)和5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(1.92g,10.88mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(20ml)后加入乙酸(373.27mg,6.22mmol)，在90℃搅拌12小时。lcms监测反应结束。将反应液缓慢的倒入饱和的碳酸氢钠水溶液中，有固体析出，过滤后的滤饼用少量水冲洗后油泵拉干。得到的粗品用甲基叔丁基醚打浆就得到黄灰色固体物2(s)-2-(3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-基)氨基)-4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(2.17g，产率60.5％)。
229、lcms:m/z 462.2[m+h]+。
230、1h nmr(400mhz,chloroform-d):δ＝9.13(br d,j＝7.5hz,1h),8.77-8.66(m,1h),7.78-7.66(m,2h),7.57-7.48(m,1h),7.40(s,3h),7.35-7.31(m,1h),6.36(br s,1h),5.45(br d,j＝7.6hz,1h),4.43-4.28(m,2h),4.02(br d,j＝5.1hz,2h),1.54(d,j＝3.4hz,6h),1.47-1.34(m,3h)ppm。
231、步骤二：(s)-5-((4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
232、
233、室温下，将2(s)-2-(3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-基)氨基)-4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(300mg,650.04umol)溶于乙醇(10ml)后加入n-羟基乙眯(284.12mg,3.84mmol)和4a分子筛(1g,6.50mmol)，搅拌10分钟后加入乙醇钠(172.52mg,2.54mmol)，反应在80℃搅拌12小时。lcms监测反应结束，反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩送prep-hplc分离纯化得白色固体(s)-5-((4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)3,3-二甲基异吲哚-1-酮(40mg,产率13.0％)。
234、lcms:m/z 472.2[m+h]+。
235、1h nmr(400mhz,chloroform-d):δ＝9.28(br d,j＝7.4hz,1h),8.77(s,1h),7.97(br d,j＝1.9hz,1h),7.70(d,j＝8.3hz,1h),7.61(br s,1h),7.55-7.48(m,1h),7.48-7.38(m,4h),7.37-7.30(m,1h),7.26-7.22(m,1h),6.18(s,1h),5.51(td,j＝4.9,7.3hz,1h),4.07(dd,j＝2.0,4.9hz,2h),2.50(s,3h),1.55(d,j＝3.0hz,6h)ppm。
236、实施例5：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(3-甲基异噁唑-5-基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物5)
237、
238、步骤一：(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇-1-醇的合成
239、
240、把5-溴-2，4-二氯嘧啶(5.00g，21.9mmol)和n,n-二异丙基乙胺(5.67g，43.9mmol)溶于乙腈(50ml)后，在0℃下加入l-苯甘氨醇(2.86g，20.8mmol)，在25℃氮气保护下反应12小时。lcms监测反应结束。反应液浓缩打浆后得白色固体(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇-1-醇(4.50g，产率59.3％)。
241、lcms:m/z 329.9[m+h]+。
242、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.29(s,1h),7.73(br d,j＝8.0hz,1h),7.36-7.40(m,2h),7.29-7.35(m,2h),7.21-7.28(m,1h),5.19(td,j＝7.7,5.3hz,1h),5.09(t,j＝5.6hz,1h),3.84(ddd,j＝11.0,7.7,6.3hz,1h),3.72ppm(dt,j＝10.9,5.2hz,1h)ppm。
243、步骤二：(s)-5-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
244、
245、把(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇-1-醇(2.00g，6.09mmol)，5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(1.18g，6.70mmol)和樟脑磺酸(2.44g，9.74mmol)溶于n-甲基吡咯烷酮(20ml)后，在90℃氮气保护下反应12小时。lcms监测原料还有8.4％没有反应完，产物占比81.7％。反应液缓慢倒入饱和的碳酸氢钠水溶液中，产物析出，过滤后滤饼打浆得黄色固体(s)-5-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(1.8g，产率88.8％)。
246、lcms:m/z 470.0[m+h]+。
247、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.56(s,1h),8.35(s,1h),8.13(s,1h),7.76(s,1h),7.59(br d,j＝8.3hz,1h),7.37-7.44(m,3h),7.33(t,j＝7.5hz,2h),7.20-7.26(m,1h),6.99(br d,j＝7.9hz,1h),5.31(q,j＝6.5hz,1h),5.14(br s,1h),3.77-3.89(m,2h),1.36ppm(br d,j＝10.5hz,6h)ppm。
248、步骤三：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(2-乙基嘧啶-2-基)氨基)-3，3二甲基异吲哚-1-酮的合成
249、
250、在(s)-5-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(1.70g，3.63mmol)，三乙胺(1.84g，18.2mmol)和(三异丙基硅基)乙炔(6.62g，36.3mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(20ml)后，在氮气保护下加入四三苯基磷钯(839mg，726umol)，氮气置换3次气体，最后该反应在120℃氮气保护下反应12小时。lcms监测反应结束。反应液用乙酸乙酯萃取浓缩机分得黄色固体产物(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(2-乙基嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(630mg，产率92.7％)。
251、lcms:m/z 570.3[m+h]+。
252、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.79(s,1h),8.37(s,1h),8.18(s,1h),7.78(d,j＝1.3hz,1h),7.56(dd,j＝8.4,1.3hz,1h),7.31-7.43(m,5h),7.21-7.29(m,1h),6.51(br d,j＝7.8hz,1h),5.20-5.27(m,1h),5.17(t,j＝4.8hz,1h),3.83-3.93(m,1h),3.72(dt,j＝10.6,5.1hz,1h),1.36(d,j＝16.9hz,6h),1.09-1.14ppm(m,21h)ppm。
253、步骤四：(s)-5-((5-乙炔基-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
254、
255、将(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(2-乙基嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(160mg，281umol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(1ml)后加入氟化铯(171mg，1.12mmol)，在60℃反应1小时。lcms监测反应结束。反应液用乙酸乙酯萃取浓缩得黄色固体产物(s)-5-((5-乙炔基-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(100mg，产率86.1％)。
256、lcms:m/z 414.2[m+h]+。
257、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.69(s,1h),8.37(s,1h),8.14(s,1h),7.78(d,j＝1.3hz,1h),7.59(dd,j＝8.4,1.3hz,1h),7.37-7.42(m,3h),7.31-7.36(m,2h),7.20-7.26(m,1h),6.95(d,j＝8.0hz,1h),5.26-5.35(m,1h),5.15(t,j＝5.3hz,1h),4.62(s,1h),3.83(t,j＝5.4hz,2h),2.89(s,1h),2.73(s,1h),1.01-1.05ppm(m,8h)ppm。
258、步骤五：(s)-5-((4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基-5-(3-甲基异噁唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
259、
260、把(s)-5-((5-乙炔基-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(90.0mg，218umol),硝基乙烷(40.7mg，435umol)溶于叔丁醇(1ml)和水(1ml)的混合溶剂中，加入抗坏血酸钠(8.62mg，43.5umol),碳酸氢钾(196mg，1.96mmol)和五水硫酸铜(2.17mg，8.71umol)，在25℃反应12小时。lcms监测原料还有16％未反应完，产物占比11％。再次补加硝基乙烷(20.3mg，218umol)，在25℃反应12小时。lcms监测原料还有12％未反应完，产物占比13％。反应液用乙酸乙酯萃取机分得白色产物(s)-5-((4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基-5-(3-甲基异噁唑-5-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(10.0mg，产率9.46％)。
261、lcms:m/z 471.1[m+h]+。
262、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.82(s,1h),8.46(s,1h),8.38(s,1h),7.76(s,1h),7.58-7.66(m,1h),7.41(d,j＝8.3hz,3h),7.34(t,j＝7.6hz,2h),7.20-7.30(m,2h),6.75(s,1h),5.34-5.43(m,1h),5.21(t,j＝5.1hz,1h),3.77-3.92(m,2h),2.30(s,3h),1.36ppm(d,j＝14.1hz,6h)ppm。
263、实施例15：(s)-5-((4-(2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物15)
264、
265、步骤一：(s)-2-氯-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶的合成
266、
267、2,4-二氯-5-氰基嘧啶(1.90g,10.9mmol,)溶于乙腈(5ml)中，加入diea(2.82g,21.8mmol,),反应液降至0℃，l-苯甘氨醇(1.42g,10.37mmol)溶于乙腈(20ml)在0℃缓慢滴加到反应液中，在20℃氮气保护下反应12小时。lcms监测反应结束。反应液浓缩柱层析纯化得到黄色油状物(s)-2-氯-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶(2.90g,产率96.6％)。
268、lcms:m/z 275.5[m+h]+。
269、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.70(d,j＝2.0hz,1h),7.42-7.21(m,6h),5.14-4.95(m,2h),3.69-3.54(m,2h)ppm。
270、步骤二：(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶的合成
271、
272、将(s)-2-氯-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶(1.10g,4.00mmol),5-氨基-3,3-二甲基-1-酮-异吲哚(1.02g,4.81mmol,hcl),醋酸(240.47mg,4.00mmol,)加入到dmf(10ml)中，升温到70℃反应12小时。lcms监测反应结束。之前三个小试总共1.27g和此次反应合并处理，将反应液缓慢倒入饱和碳酸氢钠(100ml)中，用二氯甲烷(100ml×3)进行萃取，浓缩旋干，进行柱层析纯化得到(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶(1.95g，产率54.5％)。
273、lcms:m/z 415.3[m+h]+。
274、步骤三：(s，z)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-n'-羟基-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基-5-羧酰胺嘧啶的合成
275、
276、(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-氰基嘧啶(1.90g,4.58mmol)和盐酸羟胺(605mg,8.71mmol)溶于水(10ml)，碳酸钠(1.17g,11.00mmol)溶于水(10ml)之后加入到反应液中，在90℃反应6小时。lcms监测反应结束。将反应液加入到50ml中，过滤，滤饼旋干得到(s，z)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-n'-羟基-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基-5-羧酰胺嘧啶(1.60g，产率76.9％)。
277、lcms:m/z 448.3[m+h]+。
278、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝11.53(s,1h),9.85(br s,1h),9.59-9.29(m,1h),8.66-8.29(m,2h),7.74-7.11(m,9h),6.24-5.82(m,2h),5.16-4.77(m,2h),3.69(br s,2h),1.49-1.35(m,6h)ppm。
279、步骤四：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基-1-酮异吲哚的合成
280、
281、(s，z)-2-((3,3-二甲基-1-氧异喹啉-5-基)氨基)-n'-羟基-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基-5-羧酰胺嘧啶(500mg,1.12mmol)和乙酸乙酯(196.89mg,2.23mmol)加入二甲基亚砜(5ml)中，之后加入氢氧化钠(89.38mg,2.23mmol)，在20℃反应2小时。lcms监测反应结束。反应液加入水(50ml)后，用二氯甲烷进行萃取，干燥旋干。用中性条件进行机分，再用sfc进行分离拿到产物白色固体：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基-1-酮异吲哚(59.8mg,产率11.2％)。
282、lcms:m/z 472.3[m+h]+。
283、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.28(s,1h),9.51(s,1h),8.47(s,1h),7.67-7.38(m,2h),6.78(br d,j＝7.8hz,1h),6.68(d,j＝8.3hz,1h),6.56-6.34(m,5h),5.00(br d,j＝4.3hz,1h),4.32(s,1h),3.54(br dd,j＝4.1,9.9hz,1h),3.19(td,j＝5.2,10.9hz,1h),1.28(s,3h),0.71-0.46(m,6h)ppm。
284、实施例23：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物23)
285、
286、步骤一：(s)-2-(2-氯-5-三氟甲基嘧啶-4-氨基)-2-苯乙醇的合成
287、
288、2,4-二氯-5-三氟甲基嘧啶(1.00g,4.61mmol)溶于乙腈(5ml)中，加入diea(1.19g,9.22mmol),反应液降至0℃，l-苯甘氨醇(600mg,4.38mmol,)溶于乙腈(15ml)在0℃缓慢滴加到反应液中，在20℃氮气保护下反应12小时。lcms监测原料反应结束，有两个产物峰生成，反应液浓缩柱层析纯化得到白色固体(s)-2-(2-氯-5-三氟甲基嘧啶-4-氨基)-2-苯乙醇(270mg,产率18.3％)。
289、lcms:m/z 318.1[m+h]+。
290、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.44(s,1h),7.86(br d,j＝7.6hz,1h),7.46-7.29(m,4h),7.28-7.17(m,1h),5.33(dt,j＝5.3,7.6hz,1h),5.08(t,j＝5.5hz,1h),3.86(ddd,j＝6.1,7.9,11.0hz,1h),3.73(td,j＝5.2,10.8hz,1h)ppm。
291、步骤二：(s)-5-(4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-氨基)-3,3-二甲基-1-酮-异吲哚的合成
292、
293、将(s)-2-(2-氯-5-三氟甲基嘧啶-4-氨基)-2-苯乙醇(270mg,849.88umol),5-氨基-3,3-二甲基-1-酮-异吲哚(216.90mg,1.02mmol,hcl),醋酸(51.04mg,849.88umol)加入到dmf(3ml)中，升温到70℃反应12小时。lcms监测反应结束。将反应液缓慢倒入饱和碳酸氢钠(100ml)中，用二氯甲烷(100ml×3)进行萃取，浓缩旋干，中性机分进行纯化，得到产物白色固体：(s)-5-(4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-三氟甲基嘧啶-2-氨基)-3,3-二甲基-1-酮-异吲哚(60.0mg，产率15.4％)。
294、lcms:m/z 458.3[m+h]+。
295、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.89(s,1h),8.44(s,1h),8.29(s,1h),7.71(s,1h),7.59(br d,j＝8.3hz,1h),7.44(d,j＝8.3hz,1h),7.40-7.27(m,4h),7.26-7.18(m,1h),6.95(br d,j＝7.5hz,1h),5.39(br d,j＝6.8hz,1h),5.18(s,1h),3.82(br s,2h),1.37(d,j＝8.3hz,6h)ppm。
296、实施例24：(s)-5-((5-(二氟甲氧基)-4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物24)
297、
298、步骤一：(s)-2-((2-氯-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇的合成
299、
300、2,4-二氯-5-甲氧基嘧啶(10.0g,55.86mmol)溶于乙腈(50ml)中，加入diea(14.4g,111.73mmol),反应液降至0℃，l-苯甘氨醇(7.66g,55.86mmol)溶于乙腈(200ml)中在0℃缓慢滴加到反应液中，在20℃氮气保护下反应12小时。lcms监测原料还有41％的剩余，tlc监测原料剩余10％。反应液浓缩柱层析纯化得到白色固体(s)-2-((2-氯-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇(9.10g,产率58.2％)。
301、lcms:m/z 280.1[m+h]+。
302、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝7.77-7.60(m,2h),7.41-7.35(m,2h),7.30(t,j＝7.5hz,2h),7.23(d,j＝7.3hz,1h),5.13(br d,j＝5.3hz,1h),4.97(t,j＝5.7hz,1h),3.88(s,3h),3.81-3.73(m,1h),3.71-3.64(m,1h)ppm。
303、步骤二：(s)-2-氯-4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-醇的合成
304、
305、(s)-2-((2-氯-5-甲氧基嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇(2.50g,8.94mmol)溶于二氯甲烷(25ml)中，反应液降至0℃，三溴化硼(11.2g,44.69mmol)逐滴加入到反应液中，到20℃反应5小时。lcms监测反应结束。在0℃下，将50ml的水缓慢的加入到反应液中进行淬灭，室温下搅拌一个小时，浓缩掉二氯甲烷，用饱和的碳酸钠水溶液将水相调至6～7，再用乙酸乙酯萃取，浓缩。室温下用mtbe(5ml)打浆12小时，过滤，滤饼浓缩得到产物白色固体：(s)-2-氯-4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-醇(1.28g，产率53.9％)。
306、lcms:m/z 266.2[m+h]+。
307、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.37(s,1h),7.54-7.11(m,6h),5.24-4.98(m,1h),3.83-3.62(m,2h)ppm。
308、步骤三：(s)-2-((2-氯-5-(二氟甲氧基)嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇的合成
309、
310、将(s)-2-氯-4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-5-醇(500mg,1.88mmol),一氯二氟乙酸甲酯(815mg,5.65mmol)加入到dma(10ml)中，再加入碳酸纳(239mg,2.26mmol)50℃反应12小时。lcms监测有21.8％的原料剩余,20.4％的产物峰生成。eb7095-194(20.0mg)和eb7095-195(100mg)与本次反应一起合并处理。将反应液倒入水(80ml)中，用乙酸乙酯(30ml)进行萃取，浓缩旋干，柱层析纯化得到产物无色油状物：(s)-2-((2-氯-5-(二氟甲氧基)嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇(150mg，产率12.6％)。
311、lcms:m/z 316.1[m+h]+。
312、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.21(d,j＝8.4hz,1h),7.96(s,1h),7.42-7.16(m,5h),5.16(br d,j＝5.0hz,1h),4.99(s,1h),3.75(br dd,j＝6.1,8.3hz,1h),3.71-3.62(m,1h)ppm。
313、步骤四：(s)-5-(5-(二氟甲氧基)-4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
314、
315、将s)-2-((2-氯-5-(二氟甲氧基)嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇(100mg,316.75umol),5-氨基-3,3-二甲基-1-酮-异吲哚(80.84mg,380.10umol,hcl),醋酸(19.02mg,316.75umol)加入到dmf(2ml)中，升温到80℃反应12小时。lcms监测有7.47％的原料剩余，54.9％的产物生成。将反应液用prep-hplc的方法纯化得到产物白色固体：(s)-5-(5-(二氟甲氧基)-4-(2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(34.0mg，产率23.4％)。
316、lcms:m/z 456.2[m+h]+。
317、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.45(s,1h),8.31(s,1h),7.88(s,1h),7.80(d,j＝1.1hz,1h),7.60(dd,j＝1.5,8.4hz,1h),7.46-7.36(m,4h),7.32(t,j＝7.6hz,2h),7.23(d,j＝7.3hz,1h),6.96(d,j＝73.5hz,1h),5.28(br d,j＝6.5hz,1h),5.00(s,1h),3.78(br d,j＝3.3hz,2h),1.37(d,j＝10.6hz,6h)ppm。
318、实施例26：(s)-5-((5-(二氟甲基)-4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物26)
319、
320、步骤一：2,4-二氯-5-(二氟甲基)嘧啶的合成
321、
322、将2,4-二氯-5-嘧啶甲醛(2.50g，14.1mmol)溶于二氯甲烷(30ml)中，在氮气保护下0℃滴加二乙氨基三氟化硫(22.8g，141.3mmol)，将反应液在25℃搅拌16小时。lcms监测反应结束。将反应液冷却至0℃，缓慢滴入冰水中淬灭，饱和食盐水、无水硫酸钠干燥，真空浓缩。柱层析浓缩得黄色液体2,4-二氯-5-(二氟甲基)嘧啶(1.50g，产率53.0％)。
323、lcms:m/z 198.8[m+h]+。
324、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.05(s,1h),7.27ppm(t,j＝53.0hz,1h)ppm。
325、19f nmr(377mhz,dmso-d6,):δ＝-118.30(s,1f)ppm。
326、步骤二：(s)-2-((2-氯-5-二氟甲基嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇的合成
327、
328、将2,4-二氯-5-(二氟甲基)嘧啶(800mg，4.02mmol)和n，n-二异丙基乙胺(1.04g，8.04mmol)溶于乙腈(10ml)中，0℃加入(s)-2-氨基-2-苯乙醇(523.9mg，3.82mmol)。在0℃反应2小时。lcms检测反应结束。真空浓缩得粗品，采用反相高效液相色谱法对粗产物进行纯化浓缩得白色固体产物(s)-2-((2-氯-5-二氟甲基嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇(590mg，产率48.5％)。
329、lcms:m/z 300.1[m+h]+。
330、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ8.25(s,1h),7.89(br s,1h),7.42 -7.29(m,4h),7.28-7.20(m,2h),5.28(br t,j＝5.4hz,1h),5.09(br s,1h),3.87-3.61(m,2h)ppm。
331、步骤三：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-二氟甲基嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
332、
333、将(s)-2-((2-氯-5-二氟甲基嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇(550mg，1.84mmol)和5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(388.1mg，2.20mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(10ml)后加入醋酸(110.2mg，1.84mmol)，在70℃反应12小时。lcms监测(s)-2-((2-氯-5-二氟甲基嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇(550mg，1.84mmol)剩余2.9％，产物有44.8％。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液(80ml)，乙酸乙酯(20mlx5),饱和食盐水(50ml)萃取，无水硫酸钠干燥浓缩过柱，乙酸乙酯：甲醇＝10：1打浆得白色固体产物(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-二氟甲基嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(25.5mg，产率3％)。
334、lcms:m/z 440.2[m+h]+。
335、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.71(s,1h),8.38(s,1h),8.15(s,1h),7.76(s,1h),7.61(s,1h),7.46 -7.36(m,3h),7.36-7.30(m,2h),7.29 -6.98(m,3h),5.37(q,j＝6.5hz,1h),5.10(s,1h),3.79(br s,2h),1.37(d,j＝9.9hz,6h)ppm。
336、19f nmr(377mhz,dmso-d6)δ-118.20(m,1f)ppm。
337、实施例28：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)胺基)-5-甲基嘧啶-2-基)胺基)-3,3-二甲基异吲哚基-1-酮(化合物28)
338、
339、步骤一：(s)-2-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-氨基)-2-苯乙醇的合成
340、
341、将2,4-二氯-5-甲基嘧啶(1.00g，6.13mmol)、n,n-二异丙基乙胺(1.59g，12.3mmol)溶于乙腈(10ml)中，在0℃滴加(s)-2-氨基-2-苯乙醇(799.49mg，5.83mmol)，将反应液在25℃搅拌16小时。lcms监测原料剩余66.7％，有28％的产物ms。将反应液旋干，柱层析浓缩得白色固体(s-2-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-氨基)-2-苯乙醇(430mg，产率24.2％)。
342、lcms:m/z 163.0[m+h]+。
343、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝7.82(s,1h),7.36-7.42(m,3h),7.31(t,j＝7.4hz,2h),7.22(s,1h),5.21(td,j＝8.0,5.3hz,1h),4.97(s,1h),3.53-3.87(m,2h),2.08ppm(s,3h)ppm。
344、步骤二：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-氨基)-3,3-二甲基异-1-酮-吲哚的合成
345、
346、将(s)-2-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-氨基)-2-苯乙醇(310mg，1.18mmol)和5-氨基-3,3-二甲基1-酮-异吲哚(310.7mg，1.76mmol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(10ml)后加入醋酸(70.6mg，1.18mmol)，在70℃反应12小时。lcms监测(s)-2-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙醇(310mg，1.18mmol)剩余5％，产物有41％。反应液用水(50ml)，乙酸乙酯(20mlx 5),饱和食盐水(50ml)萃取，无水硫酸钠干燥浓缩柱得白色固体产物(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-氨基-3,3-二甲基异-1-酮-吲哚(60mg，产率17.5％)。
347、lcms:m/z 404.0[m+h]+。
348、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.16(s,1h),8.32(s,1h),7.75(d,j＝14.6hz,2h),7.64(dd,j＝8.4,1.4hz,1h),7.36-7.45(m,3h),7.31(t,j＝7.6hz,2h),7.17-7.24(m,1h),6.77(d,j＝8.0hz,1h),5.23-5.42(m,1h),5.04(t,j＝5.7hz,1h),3.66-3.85(m,2h),2.05(s,3h),1.36ppm(d,j＝9.4hz,6h)ppm。
349、实施例29：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)氨基)-5-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)-甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物29)
350、
351、
352、步骤一：2-((3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基)-4-(((1s)-2-羟基-1-苯基)氨基嘧啶-5羧酸乙酯))的合成
353、
354、将2-氯-4[[(1s)-2-羟基-1-苯基]氨基嘧啶-5羧酸乙酯(3.50g，10.9mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(35.0ml)中，加入冰醋酸(653.2mg，10.9mmol)和5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(2.30g，13.1mmol)，在氮气保护下将反应液在90℃搅拌12小时。lcms监测反应结束。将反应液冷却至25℃，缓慢滴入饱和碳酸氢钠中淬灭，有白色固体析出，过滤，滤液浓缩柱层析浓缩得黄色固体2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基]氨基嘧啶-5羧酸乙酯)](3.30g，产率51.9％)。
355、lcms:m/z 462.0[m+h]+。
356、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.17 -10.04(m,1h),8.98(br d,j＝7.9hz,1h),8.64(s,1h),8.42(s,1h),7.83(s,1h),7.59(br d,j＝8.4hz,1h),7.43(d,j＝8.4hz,1h),7.40-7.32(m,4h),7.25(br dd,j＝5.6,2.8hz,1h),5.36-5.30(m,1h),5.19(t,j＝4.9hz,1h),4.33 -4.27(m,2h),3.85(s,1h),3.79(s,1h),1.41-1.30(m,9h)ppm。
357、步骤二：2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基嘧啶-5-碳肼的合成
358、
359、将2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基]氨基嘧啶-5羧酸乙酯)](2.00g，4.33mmol)溶于水合肼(18.7g，365.5mmol)中，在80℃反应2小时。lcms检测反应结束。真空浓缩得粗品，柱层析浓缩得黄色固体产物2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基嘧啶-5-碳肼(1.70g，产率72.8％)。
360、lcms:m/z 448.0[m+h]+。
361、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.75(s,1h),9.62(br d,j＝7.9hz,1h),8.49(s,1h),8.39(s,1h),7.84(s,1h),7.65-7.52(m,3h),7.42(d,j＝8.4hz,1h),7.37-7.33(m,4h),7.27-7.21(m,1h),5.32-5.26(m,1h),3.84 -3.80(m,1h),3.73(br dd,j＝10.8,5.6hz,1h),1.38(br d,j＝13.3hz,7h)ppm。
362、步骤三：2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基-n’-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰]嘧啶-5-碳肼的合成
363、
364、将4-甲基-1-哌嗪乙酸(106.1mg，670.4umol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(5.00ml)后加入hatu(586.3mg，1.54mmol)和n,n-二异丙基乙胺(346.6mg，467.1umol)，在25℃反应2小时，向反应液中加入2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基嘧啶-5-碳肼(300mg，670.4umol)，在25℃反应12小时。lcms监测2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基嘧啶-5-碳肼(300mg，670.4umol)剩余2.7％，产物有37.0％。采用反相高效液相色谱法对粗产物进行纯化浓缩得白色固体产物2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基-n’-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰]嘧啶-5-碳肼(50.0mg，产率12.7％)。
365、lcms:m/z 558.1[m+h]+。
366、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.23-10.11(m,1h),9.87(s,1h),9.63(br s,1h),9.57-9.44(m,1h),8.64(s,1h),8.39(s,1h),7.82(s,1h),7.59(dd,j＝8.4,1.3hz,1h),7.42(d,j＝8.4hz,1h),7.34(d,j＝4.4hz,4h),7.26-7.20(m,1h),5.35-5.26(m,1h),5.13(s,1h),3.86-3.78(m,1h),3.74(br d,j＝5.4hz,1h),3.07(s,2h),2.52(br s,4h),2.37(br s,4h),2.17(s,3h),1.37(br d,j＝14.8hz,6h)ppm。
367、步骤四：5-[[4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基]-5-[5-[(4-甲基哌嗪-1-基)-甲基]-1,3,4-噁二唑-2-基]嘧啶-2-基]氨基]-3,3-二甲基异吲哚-1-酮
368、
369、将2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基-n’-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙酰]嘧啶-5-碳肼(40.0mg，68.1umol)溶于无水四氢呋喃(2.00ml)中，加入三乙胺(27.6mg，272.3umol)和对甲苯磺酰氯(77.6mg，407.0mg)，在55℃下搅拌12小时。lcms监测反应结束，反应液用水溶液(20.0ml)，乙酸乙酯(10mlx3),饱和食盐水(50ml)萃取，无水硫酸钠干燥浓缩，粗品采用正相分离，sfc拆分，反相分离冻干得白色固体产物5-[[4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基]-5-[5-[(4-甲基哌嗪-1-基)-甲基]-1,3,4-噁二唑-2-基]嘧啶-2-基]氨基]-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(11.0mg，28.1％)。
370、lcms:m/z 570.4[m+h]+。
371、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.08(br s,1h),8.85(br d,j＝7.9hz,1h),8.61(s,1h),8.42(s,1h),7.86(s,1h),7.62(br d,j＝8.3hz,1h),7.47-7.33(m,5h),7.27(br d,j＝7.1hz,1h),5.47-5.40(m,1h),5.24(t,j＝4.6hz,1h),3.94-3.79(m,4h),2.54(br s,3h),2.34(br d,j＝2.5hz,4h),2.15(s,3h),1.38(br d,j＝14.8hz,6h)ppm。
372、实施例30：(s)-5-((4-((-2-羟基-1-苯基乙基)氨基)-5-(5-((4-乙基哌嗪-1-基)-甲基)-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物30)
373、
374、步骤一：2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基-n’-[2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙酰]嘧啶-5-碳肼的合成
375、
376、将4-乙基-1-哌嗪乙酸(154.0mg，893.9umol)溶于n，n-二甲基甲酰胺(5.00ml)后加入hatu(781.7mg，2.06mmol)和n,n-二异丙基乙胺(462.1mg，3.58umol)，在25℃反应1小时，向反应液中加入2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基嘧啶-5-碳肼(400mg，893.9umol)，在25℃反应12小时。lcms监测2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基嘧啶-5-碳肼(300mg，670.4umol)剩余45.0％，产物有18.0％。采用正相分离、反相高效液相色谱法对粗产物进行纯化浓缩得白色固体产物2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基-n’-[2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙酰]嘧啶-5-碳肼(50.0mg，产率8.64％，盐)。
377、lcms:m/z 602.3[m+h]+。
378、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.89(s,1h),9.65(s,1h),9.48(br d,j＝7.9hz,1h),8.65(s,1h),8.40(s,1h),8.19(br s,1h),7.83(s,1h),7.65-7.56(m,1h),7.43(d,j＝8.4hz,1h),7.35(d,j＝4.4hz,4h),7.28-7.22(m,1h),5.37 -5.25(m,1h),3.85 -3.81(m,1h),3.76-3.72(m,1h),3.62 -3.43(m,4h),3.08(s,2h),2.54(br d,j＝6.8hz,4h),2.36(br d,j＝7.3hz,3h),1.38(br d,j＝15.1hz,6h),1.01(t,j＝7.1hz,3h)ppm。
379、步骤二：5-[[4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基]-5-[5-[(4-乙基哌嗪-1-基)-甲基]-1,3,4-噁二唑-2-基]嘧啶-2-基]氨基]-3,3-二甲基异吲哚-1-酮
380、
381、将2-[(3,3-二甲基-1-氧基异吲哚-5-基)氨基]-4-[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基-n’-[2-(4-乙基哌嗪-1-基)乙酰]嘧啶-5-碳肼(45.0mg，74.8umol)溶于无水四氢呋喃(1.00ml)中，加入三乙胺(30.3mg，299.2umol)和对甲苯磺酰氯(85.3mg，447.2mg)，在55℃下搅拌12小时。lcms监测反应结束，反应液用水溶液(20.0ml)，乙酸乙酯(10mlx3),饱和食盐水(20ml)萃取，无水硫酸钠干燥浓缩，粗品采用反相分离，正相分离冻干得白色固体产物5-[[4-[[(1s)-2-羟基-1-苯基乙基]氨基]-5-[5-[(4-乙基哌嗪-1-基)-甲基]-1,3,4-噁二唑-2-基]嘧啶-2-基]氨基]-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(7.00mg，15.7％)
382、lcms:m/z 584.2[m+h]+。
383、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ10.07(br s,1h),8.85(br d,j＝7.8hz,1h),8.6-8.59(m,1h),8.43(s,1h),7.87 -7.81(m,1h),7.62(br d,j＝8.8hz,1h),7.45(d,j＝8.1hz,1h),7.41-7.34(m,4h),7.29 -7.23(m,1h),5.49 -5.40(m,1h),5.24(t,j＝4.7hz,1h),3.94(br s,2h),3.85(s,1h),3.72-3.57(m,2h),1.38(br d,j＝14.8hz,8h),1.23(s,5h),1.11 -0.99(m,3h),0.85(br s,1h)ppm。
384、实施例31：(s)-5-(4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基-二甲基异吲哚-1-酮(化合物31)
385、
386、步骤一：乙基(s)-4-(2-(叔丁基二甲基硅基)氧基)-1-环丙基乙基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸盐的合成
387、
388、将(s)-2-氨基-2-环丙基-1-醇盐酸盐(1.25g,9.05mmol)溶于乙腈(40ml)后加入后降温至0℃加入n,n-二异丙基乙胺(2.57g,19.91mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(1.36g,9.05mmol)。反应在25℃搅拌1小时后再次降温至0℃加入n,n-二异丙基乙胺(1.40g,10.86mmol)和2,4-二氯-5-嘧啶甲酸乙酯(2g,9.05mmol)，反应在25℃搅拌2小时。lcms监测反应结束，反应液减压浓缩后用水稀释，乙酸乙酯萃取，硫酸钠干燥，过滤浓缩得到粗品柱层析后得无色油状物乙基(s)-4-(2-(叔丁基二甲基硅基)氧基)-1-环丙基乙基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸盐(2.30g,产率：57.2％)。
389、lcms:m/z 400.2[m+h]+。
390、1h nmr(400mhz,chloroform-d):δ＝8.74(br d,j＝8.3hz,1h),8.65(s,1h),4.45-4.29(m,2h),3.79(dd,j＝1.4,3.5hz,2h),3.75-3.62(m,1h),1.69(br s,1h),1.38(t,j＝7.1hz,3h),0.92-0.88(m,9h),0.60-0.45(m,3h),0.39-0.27(m,1h),0.08-0.01(m,6h)ppm。
391、步骤二：(乙基(s)-4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐的合成
392、
393、将乙基(s)-4-(2-(叔丁基二甲基硅基)氧基)-1-环丙基乙基)氨基)-2-氯嘧啶-5-羧酸盐(1.9g,4.75mmol)和5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(1.00g,5.70mmol)溶于异丙醇(20ml)后入偶氮4m盐酸水溶液(1.73g，47.50mmol)，反应在100℃搅拌3小时。lcms监测反应结束，反应液减压浓缩后加水稀释，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗，硫酸钠干燥，过滤浓缩柱层析得棕色固体(乙基(s)-4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐(1.65g,产率：73.4％)。
394、lcms:m/z 426.2[m+h]+。
395、步骤三：(s)-4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼的合成
396、
397、将(乙基(s)-4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐(0.6g,1.41mmol)溶于水合肼(15.21g,297.76mmol)后在100℃反应2小时。lcms监测反应结束。反应液加水稀释，用二氯甲烷：异丙醇＝4：1的混合溶剂萃取，饱和食盐水洗，硫酸钠干燥，过滤浓缩得棕色固体(s)-4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼(400mg,产率62.0％)。
398、lcms:m/z 412.2[m+h]+。
399、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.77(s,1h),9.56(br d,j＝1.1hz,1h),9.04(br d,j＝8.4hz,1h),8.19(s,1h),7.54-7.43(m,1h),3.89-3.71(m,4h),1.41(s,6h),1.12(dt,j＝3.6,8.2hz,1h),1.03(d,j＝6.1hz,2h),0.55-0.39(m,2h),0.37-0.13(m,2h)ppm。
400、步骤四：(s)-5-(4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基-二甲基异吲哚-1-酮的合成
401、
402、将(s)-4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼(200mg,486.08umol)和原乙酸三乙酯(788.54mg,4.86mmol)溶于二氧六环(2ml)后加醋酸(58.38mg,972.16umol),反应升至100℃搅拌2小时。lcms监测反应结束，反应液用甲醇稀释后机分得到白色固体(s)-5-(4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基-二甲基异吲哚-1-酮(33.2mg,产率15.62％)。
403、lcms:m/z 436.2[m+h]+。
404、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.06(s,1h),8.55(s,1h),8.42(s,1h),8.28(d,j＝8.4hz,1h),8.21(s,1h),7.50(t,j＝8.5hz,2h),5.02(t,j＝5.1hz,1h),3.90(br d,j＝3.9hz,1h),3.69(br dd,j＝4.6,19.8hz,2h),2.57(s,3h),1.43(s,6h),1.23-1.17(m,1h),0.50(ddd,j＝4.7,8.8,18.2hz,2h),0.40-0.31(m,1h),0.29-0.20(m,1h)ppm。
405、实施例32：(s)-5-((4-(2-羟基-1-吡啶-2-氨基2-羟基-1-吡啶-2-氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-嘧啶)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物32)
406、
407、步骤一：(s)-2-氯-4-((2-羟基-1-吡啶-2-乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯的合成
408、
409、将2,4-二氯-5-嘧啶甲酸乙酯(1.50g,6.79mmol),(s)-2-氨基-2-吡啶-2-乙二醇(1.19g,6.79mmol,hcl)加入到乙腈(10ml)中，0℃下，将diea(1.75g,13.57mmol)加入反应液中。25℃反应3小时。lcms监测反应结束。将反应液浓缩，用30ml二氯甲烷和20ml水萃取，干燥，浓缩，用5ml乙酸乙酯在室温下打浆30分钟，过滤得到产物白色固体(s)-2-氯-4-((2-羟基-1-吡啶-2-乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(1.07g，产率48.8％)。
410、lcms:m/z 323.0[m+h]+。
411、1h nmr(400mhz,chloroform-d):δ＝8.70(s,1h),8.60(dd,j＝0.8,4.9hz,1h),7.76(dt,j＝1.8,7.7hz,1h),7.48(d,j＝7.9hz,1h),7.30(ddd,j＝1.0,5.0,7.5hz,1h),5.66-5.38(m,1h),4.47-4.33(m,3h),4.18(s,1h),4.04(dd,j＝4.4,11.3hz,1h),1.40(t,j＝7.1hz,4h)ppm。
412、步骤二：(s)-2-(3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-氨基)-4-(2-羟基-1-吡啶-2-氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯的合成
413、
414、将(s)-2-氯-4-((2-羟基-1-吡啶-2-乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(660mg,2.04mmol),5-氨基-3,3-二甲基-1-酮-异吲哚(522mg,2.45mmol,hcl)，盐酸(4m,5.11ml,10.0eq)加入到异丙醇(10ml)中，100℃下反应12小时。lcms监测反应结束。将之前小试的50.0mg反应与之合并浓缩，用饱和碳酸氢钠水溶液调至ph＝10,用二氯甲烷：甲醇＝10：1的混合液进行萃取，干燥，浓缩。用柱层析法进行纯化30ml二氯甲烷和20ml水萃取，干燥，浓缩，用5ml乙酸乙酯在室温下打浆30分钟，过滤得到产物灰色固体(s)-2-(3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-氨基)-4-(2-羟基-1-吡啶-2-氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(500mg，产率51.6％)。
415、lcms:m/z 463.2[m+h]+。
416、步骤三：(s)-2-(3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-氨基)-4-(2-羟基-1-吡啶-2-氨基)嘧啶-5-碳酰肼的合成
417、
418、将(s)-2-(3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-氨基)-4-(2-羟基-1-吡啶-2-氨基)嘧啶-5-羧酸乙酯(660mg,1.08mmol)加入到水合肼(4.67g,91.42mmol)中，100℃下反应2小时。lcms监测反应结束。浓缩得到产物白色固体(s)-2-(3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-氨基)-4-(2-羟基-1-吡啶-2-氨基)嘧啶-5-碳酰肼(550mg，产率95.6％)。
419、lcms:m/z 449.0[m+h]+。
420、步骤四：(s)-5-((4-(2-羟基-1-吡啶-2-氨基2-羟基-1-吡啶-2-氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-嘧啶)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
421、
422、将(s)-2-(3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-氨基)-4-(2-羟基-1-吡啶-2-氨基)嘧啶-5-碳酰肼(500mg,1.11mmol),原乙酸三乙酯(1.81g,11.15mmol)，醋酸(134mg,2.23mmol)加入到二氧六环(5ml)中，升温到100℃反应2小时。lcms监测反应结束。将之前小试的50.0mg反应与之合并浓缩。采用机分的方法(column:welch xtimate c18 150*30mm*5um；mobilephase:[water(nh4hco3)-acn]；b％:4％-44％,25min).得到产物白色固体：(s)-5-((4-(2-羟基-1-吡啶-2-氨基2-羟基-1-吡啶-2-氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-嘧啶)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(207mg，产率39.3％)。
423、lcms:m/z 473.2[m+h]+。
424、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.25-9.97(m,1h),9.03(d,j＝8.1hz,1h),8.65-8.57(m,2h),8.41(s,1h),8.06(d,j＝1.3hz,1h),7.76(dt,j＝1.8,7.7hz,1h),7.49(s,1h),7.45-7.40(m,1h),7.35-7.28(m,2h),5.63-5.41(m,1h),5.16(s,1h),4.07-3.83(m,2h),2.59(s,3h),1.46(s,3h),1.40(s,3h)ppm。
425、实施例33：(s)-5-((4-((2-羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物33)
426、
427、
428、步骤一：乙基(s)-2-氯4-((2-((羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐的合成
429、
430、把(s)-2-氨基-2-(吡啶-3-基)乙基-1-醇(573mg，2.71mmol)溶于乙腈(5ml)后，在0℃下加入n,n-二异丙基乙胺(731mg，5.66mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(409mg，2.71mmol)，恢复到室温反应1小时。再次降温至0℃，加入n,n-二异丙基乙胺(438mg，3.39mmol)和2,4-二氯-5-嘧啶甲酸乙酯(500mg，2.26mmol),恢复到室温反应2小时。lcms监测反应结束。反应液浓缩得棕色油状物乙基(s)-2-氯4-((2-((羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐(1.00g，粗品)。
431、lcms:m/z 322.6[m+h]+。
432、步骤二：乙基(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐的合成
433、
434、将乙基(s)-2-氯4-((2-((羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐(500mg，1.55mmol)和5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(273mg，1.55mmol)溶于异丙醇(5ml)中，滴加4m盐酸(565mg，15.5mmol),在100℃下反应两个小时。lcms监测反应结束。反应液倒入水中，用碳酸氢钠水溶液将ph值调至7～8，用乙酸乙酯萃取浓缩过柱后得黄色固体乙基(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐(295mg，产率35.0％)。
435、lcms:m/z 462.9[m+h]+。
436、步骤三：(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-酰肼的合成
437、
438、将乙基(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-羧酸盐(295mg，638umol)加入水合肼(3.46g，67.7mmol)中，在100℃下反应2个小时。lcms监测反应结束。反应液浓缩后得黄色固体(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-酰肼(365mg，产率95.7％)。
439、lcms:m/z 449.0[m+h]+。
440、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.78(br s,1h),9.60-9.71(m,1h),8.59(d,j＝1.9hz,1h),8.49-8.54(m,1h),8.39-8.46(m,2h),7.70-7.76(m,2h),7.59(br d,j＝9.1hz,1h),7.42(d,j＝8.4hz,1h),7.36(dd,j＝7.8,4.8hz,1h),5.23-5.32(m,2h),3.82-3.89(m,1h),3.75-3.82(m,1h),3.67-3.75(m,1h),1.32-1.40ppm(m,6h)ppm。
441、步骤六：(s)-5-((4-((2-羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
442、
443、将(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)嘧啶-5-酰肼(365mg，814umol)溶于二氧六环(4ml)中，加入原乙酸三乙酯(1.32g，8.14mmol)和醋酸(97.7mg，1.63mmol)，在100℃下反应2个小时。lcms监测反应结束。反应液过滤后机分打浆得白色固体(s)-5-((4-((2-羟基-1-(吡啶-3-基)乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(49.3mg，产率12.6％)。
444、lcms:m/z 473.0[m+h]+。
445、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.02(s,1h),8.88(br d,j＝7.4hz,1h),8.55-8.67(m,2h),8.38-8.49(m,2h),7.70-7.82(m,2h),7.62(br d,j＝8.0hz,1h),7.45(d,j＝8.3hz,1h),7.37(dd,j＝7.8,4.8hz,1h),5.38-5.46(m,1h),5.34(t,j＝4.8hz,1h),3.83-3.99(m,2h),2.59(s,3h),1.37ppm(d,j＝12.5hz,6h)ppm。
446、实施例34：(s)-5-((4-((2-羟基-1-(吡啶-4-基)乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物34)
447、
448、化合物34的合成可以参考化合物32和化合物33的合成策略。
449、
450、将(s)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)-4-((2-羟基-1-(吡啶-4-基)乙基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼(200mg,445.95μmol)和原乙酸三乙酯(723.45mg,4.46mmol)溶于二氧六环(4ml)后加入乙酸(53.56mg,891.91μmol)，反应液在100℃搅拌2小时。lcms监测反应结束，反应液用甲醇稀释后机分得粗品(80mg,94.2％ee),然后手性分离得白色固体(s)-5-((4-(2-羟基-1-吡啶-4-基)乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基(氨基)-3,3-二甲基-1-异吲哚-1-酮(7.0mg,产率34.0％)。
451、lcms:m/z 473.1[m+h]+。
452、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.03(br s,1h),8.90(br d,j＝7.5hz,1h),8.61(s,1h),8.53(br d,j＝2.5hz,2h),8.42(s,1h),7.71(br s,1h),7.60(br d,j＝8.0hz,1h),7.50-7.32(m,3h),5.44-5.36(m,1h),5.33(br t,j＝4.5hz,1h),3.92(td,j＝4.5,8.8hz,2h),2.60(s,3h),1.43-1.28(m,6h)ppm。
453、实施例35：(s)-5-((4-((1-环丙基-2-羟丙基-2-基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物35)
454、
455、
456、步骤一：乙基(s)-2-氯-4-((1-环丙基-3-羟丙基-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸酯的合成
457、
458、把(s)-2-氨基-3-环丙基丙烷-1-醇(521mg，4.52mmol)溶于乙腈(10ml)后，在0℃下加入n,n-二异丙基乙胺(1.29g，9.95mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(681mg，4.52mmol)，恢复到室温反应1小时。再次降温至0℃，加入n,n-二异丙基乙胺(702mg，5.43mmol)和2,4-二氯-5-嘧啶甲酸乙酯(1.00g，4.52mmol),恢复到室温反应2小时。lcms监测反应结束。反应液浓缩过柱得黄色固体乙基(s)-2-氯-4-((1-环丙基-3-羟丙基-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸酯(190mg，产率12.9％)。
459、lcms:m/z 299.9[m+h]+。
460、1h nmr(400mhz,chloroform-d):δ＝9.04(s,1h),8.56-8.70(m,2h),4.29-4.52(m,4h),3.82(dd,j＝10.1,3.3hz,1h),3.70(dd,j＝10.1,4.4hz,1h),1.49-1.67(m,3h),1.33-1.48(m,4h),0.90(s,9h),0.65-0.77(m,1h),0.39-0.53(m,2h),0.09-0.17(m,2h),0.05ppm(d,j＝5.3hz,6h)ppm。
461、步骤二：乙基(s)-4-((1-环丙烷-3-羟丙基-2-基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-羧酸酯的合成
462、
463、将乙基(s)-2-氯-4-((1-环丙基-3-羟丙基-2-基)氨基)嘧啶-5-羧酸酯(180mg，600μmol)和5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(127mg，721μmol)溶于异丙醇(2ml)中，滴加4m盐酸(219mg，6.00mmol),在100℃下反应两个小时。lcms监测反应结束。反应液倒入水中，用碳酸氢钠水溶液将ph值调至7～8，用乙酸乙酯萃取浓缩后得黄色固体乙基(s)-4-((1-环丙烷-3-羟丙基-2-基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-羧酸酯(200mg，产率75.6％)。
464、lcms:m/z 439.8[m+h]+。
465、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.12(br s,1h),8.61(s,1h),8.33-8.47(m,2h),8.23(s,1h),7.59(dd,j＝8.3,1.4hz,1h),7.49(d,j＝8.3hz,1h),4.93(t,j＝5.1hz,1h),4.32-4.43(m,1h),4.26(q,j＝7.0hz,2h),3.56-3.68(m,2h),1.43(d,j＝2.3hz,6h),1.30(t,j＝7.1hz,4h),0.70(br d,j＝7.5hz,2h),0.32-0.46(m,3h),0.05ppm(br d,j＝3.3hz,3h)ppm。
466、步骤三：(s)-4-((1-环丙烷-3-羟丙基-2-基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-酰肼的合成
467、
468、将乙基(s)-4-((1-环丙烷-3-羟丙基-2-基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-羧酸酯(200mg，455μmol)加入水合肼(6.81g，133mmol)中，在100℃下反应2个小时。lcms监测反应结束。反应液浓缩后得黄色固体(s)-4-((1-环丙烷-3-羟丙基-2-基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-酰肼(200mg，产率93.0％)。
469、lcms:m/z 425.8[m+h]+。
470、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.81(s,1h),9.01(br d,j＝8.5hz,1h),8.45(s,1h),8.39(s,1h),8.23(s,1h),7.53-7.61(m,1h),7.47(d,j＝8.3hz,1h),4.30(br d,j＝6.1hz,2h),3.53-3.66(m,5h),1.42(s,6h),0.72(ddd,j＝12.3,7.3,4.9hz,2h),0.38(brd,j＝8.3hz,3h),-0.03-0.16ppm(m,3h)ppm。
471、步骤四：(s)-5-((4-((1-环丙基-2-羟丙基-2-基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
472、
473、将(s)-4-((1-环丙烷-3-羟丙基-2-基)氨基)-2-((3,3-二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-酰肼(200mg，470μmol)溶于二氧六环(2ml)中，加入原乙酸三乙酯(763mg，4.70mmol)和醋酸(56.5mg，940μmol)，在100℃下反应2个小时。lcms监测反应结束。反应液过滤后机分得黄色固体(s)-5-((4-((1-环丙基-2-羟丙基-2-基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(39.8mg，产率18.6％)。
474、lcms:m/z 449.9[m+h]+。
475、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.09(s,1h),8.56(s,1h),8.43(s,1h),8.15-8.29(m,2h),7.61(dd,j＝8.2,1.3hz,1h),7.50(d,j＝8.3hz,1h),4.96(t,j＝5.0hz,1h),4.40-4.52(m,1h),3.67(q,j＝4.7hz,2h),2.57(s,3h),1.60-1.71(m,1h),1.54(dt,j＝14.0,7.1hz,1h),1.44(d,j＝2.5hz,6h),0.68-0.80(m,1h),0.32-0.43(m,2h),0.03-0.11ppm(m,2h)ppm。
476、实施例36：(s)-5-((4-((1-环丁基-3-羟丙基-2-基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物36)
477、化合物34的合成可以参考化合物35的合成策略。
478、
479、将(s)-4-(1-环丁基-3-羟基丙-2-基)氨基)-2-((3，3二甲基-1-氧代异吲哚-5-基)氨基)嘧啶-5-碳酰肼(300mg,682.58μmol)和原乙酸三乙酯(1.11g,6.83mmol)溶于二氧六环(3ml)后加入醋酸(81.98mg,1.37mmol)，反应液在100℃搅拌2小时。lcms监测反应结束。反应液旋干后柱层析得到的粗品，粗品进行两次机分后冻干得到白色固体(s)-5-(4-(1-环丁基-3-羟基丙基-2-基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(20mg,产率6.23％)。
480、lcms:m/z 464.3[m+h]+。
481、1h nmr(400mhz,methanol-d4):δ＝8.25(s,1h),7.62(d,j＝8.1hz,1h),7.20-7.04(m,2h),4.33(br d,j＝6.0hz,2h),3.94(d,j＝5.0hz,1h),2.55(s,3h),2.53
482、-2.45(m,1h),2.23-2.07(m,2h),2.05-1.73(m,6h),1.52(s,6h)ppm。
483、实施例37：(s)-5-((4-((1-环丁基-2-羟乙基-2-基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物37)
484、
485、化合物37的合成可以参考化合物31的合成策略。
486、将((s)-4-((1-环丁基2-羟乙基)氨基)-2-(3,3-二甲基-1-氧异吲哚-5-氨基)嘧啶-5-酰肼(180mg,423.05μmol),原乙酸三乙酯(686.30mg,4.23mmol)，醋酸(50.81mg,846.10μmol)加入到二氧六环(3ml)中，升温到100℃反应2小时。lcms监测反应结束。浓缩。采用机分的方法(column:xtimate c18 150*40mm*10um；mobile phase:[water(nh4hco3)-acn]；gradient:12％-52％b over 25min)，之后二次分离(column:xtimate c18 150*40mm*10um；mobile phase:[water(fa)-acn]；gradient:8％-48％b over 36min)得到产物白色固体：(s)-5-(4-((1-环丁基2-羟乙基)氨基)-5-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(45.0mg，产率23.2％)。
487、lcms:m/z 450.1[m+h]+。
488、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.11(s,1h),8.56(s,1h),8.44(s,1h),8.32(s,1h),8.17(d,j＝8.9hz,1h),7.57-7.45(m,2h),5.11-4.79(m,1h),4.42(tt,j＝4.2,8.6hz,1h),3.60-3.47(m,2h),2.78-2.67(m,1h),2.57(s,3h),2.09-1.91(m,2h),1.89-1.63(m,4h),1.46(d,j＝6.5hz,6h)ppm。
489、实施例38：(s)-5-((4-((2-羟基-1-苯基乙基)氨基)-5-(1-(2-羟基-2-甲基丙基基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物38)
490、
491、lcms:m/z 528.2[m+h]+。
492、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.03(s,1h),8.80(d,j＝7.9hz,1h),8.60(s,1h),8.42(s,1h),8.02(s,1h),7.96(s,1h),7.86(s,1h),7.61(dd,j＝8.4,1.6hz,1h),7.44(d,j＝8.3hz,1h),7.32-7.41(m,4h),7.22-7.28(m,1h),5.38-5.47(m,1h),5.22(t,j＝4.9hz,1h),3.85-3.94(m,1h),3.80(dt,j＝10.8,5.3hz,1h),2.76-2.57(m,2h),2.13-1.91(m,2h),1.52(s,6h),1.12(s,6h)ppm。
493、实施例39：(s)-5-((5-(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(化合物39)
494、
495、步骤一：(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙基-1-醇的合成
496、
497、将5-溴-2,4-二氯-嘧啶(5.00g,21.9mmol,2.81ml,1.00eq)，diea(5.67g,43.8mmol,7.64ml,2.00eq)在乙腈(50ml)中混合均匀后在零度加入(2s)-2-氨基-2-苯乙醇(3.01g,21.9mmol,1.00eq)，反应液升温到25度搅拌12个小时。tlc监测完毕后，反应液用水淬灭，乙酸乙酯萃取后用饱和食盐水洗后有机相干燥，浓缩，经过柱层析纯化后得到白色固体(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙基-1-醇(6.20g,18.8mmol,收率85.9％)。
498、lcms:m/z 329.8[m+h]+。
499、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.29(s,1h),7.71(d,j＝8.0hz,1h),7.41-7.21(m,5h),5.20(dt,j＝5.2,7.8hz,1h),5.07(t,j＝5.6hz,1h),3.92-3.66(m,2h)ppm.
500、步骤二：((s)-5-((5-溴-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮的合成
501、
502、将(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙基-1-醇(3.00g,9.13mmol,1.00eq)，5-氨基-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(1.61g,9.13mmol,1.00eq)和盐酸/二氧六环(4.00m,22.82ml,10.0eq)在二氧六环(30.0ml)中混合均匀后在100度下搅拌6个小时。lcms监测完毕后，反应液用水淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥，浓缩,用柱层析纯化后得到棕色固体(s)-5-((5-溴-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(1.00g,2.14mmol,收率23.39％)。
503、lcms:m/z 470.1[m+h]+。
504、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.09(br s,1h),8.85-8.73(m,1h),8.47(s,1h),8.24(s,1h),7.72(br d,j＝1.1hz,1h),7.62-7.57(m,1h),7.56-7.42(m,3h),7.37-7.28(m,3h),7.27-7.20(m,1h),4.87-4.71(m,1h),4.02(q,j＝7.1hz,2h),1.52-1.28(m,6h)ppm.
505、步骤三：(s)-5-((5-(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮
506、
507、将((s)-5-((5-溴-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(200mg,427μmol,1.00eq)，(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)硼酸脂(188mg,1.02mmol,2.40eq)，pd(dppf)cl2(93.7mg,128μmol,0.30eq)，碳酸钾(177mg,1.28mmol,3.00eq)，金刚烷-pd-g3(31.1mg,42.7μmol,0.10eq)在二氧六环(3.00ml)和水(0.30ml)中混合均匀，升温到80度搅拌4个小时，lcms监测完毕后，反应液过滤，浓缩，经过机分纯化得到白色固体(s)-5-((5-(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚-1-酮(43.5mg,81.3μmol,收率19.0％,纯度98.4％)。
508、lcms:m/z 470.1[m+h]+。
509、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.42(s,1h),8.31(s,1h),8.15(s,1h),8.07(s,1h),7.94(s,1h),7.78(s,1h),7.73(s,1h),7.64(dd,j＝1.4,8.3hz,1h),7.43-7.29(m,5h),7.26-7.19(m,1h),6.43(br d,j＝7.5hz,1h),5.31(br d,j＝5.3hz,1h),4.30(t,j＝6.5hz,2h),3.83-3.74(m,2h),2.82(br t,j＝6.4hz,2h),2.27(s,6h),1.36(d,j＝13.8hz,6h)ppm.
510、实施例40：(s)-5-((4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-5-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮(化合物40)
511、
512、步骤一：(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-环丙基乙醇-1-醇的合成
513、
514、将5-溴-2，4-二氯嘧啶(4.00g,17.5mmol,2.25ml,1.00eq)和(s)-2-氨基-2-环丙基乙烷-1-醇(1.78g,17.5mmol,1.00eq)溶于乙腈(8ml)中，加入diea(4.54g,35.1mmol,6.12ml,2.00eq),25℃反应2小时。lcms监测反应结束。浓缩，柱层析纯化得到红色固体(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-环丙基乙醇-1-醇(1.60g，产率26.4％)。
515、lcms:m/z 293.4[m+h]+。
516、步骤二：(s)-5-((5-溴-4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮的合成
517、
518、将(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-环丙基乙醇-1-醇(300mg,1.03mmol,1.00eq)和5-氨基-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮(542mg,3.08mmol,3.00eq)加到二氧六环(3ml)中，后加入对甲苯磺酸(353mg,2.05mmol,2.00eq),100℃反应2小时。lcms监测反应结束。萃取，浓缩，得到棕色固体(s)-5-((5-溴-4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮(370mg，产率63.2％)。
519、lcms:m/z 434.1[m+h]+。
520、步骤三：(s)-5-((4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-5-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮的合成
521、
522、将(s)-5-((5-溴-4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮(200mg,462μmol,1.00eq)和n,n二甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)吡唑-1-基]乙胺(420mg,1.39mmol,3.01eq,hcl),catacxium(r)apd g3(67.3mg,92.5μmol,0.20eq)和碳酸钾(255mg,1.85mmol,4.00eq)溶于二氧六环(2ml)和水(0.1ml)，氮气置换三次，加80℃反应6小时。lcms监测反应结束。浓缩,柱层析纯化，后反相柱分离纯化(column:xtimate c18 150*40mm*10um；mobile phase:[water(nh4hco3)-acn]；gradient:8％-48％b over 32min)得到产物白色固体(s)-5-((4-((1-环丙基-2-羟乙基)氨基)-5-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮(91.2mg，产率39.4％)。
523、lcms:m/z 491.1[m+h]+。
524、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.46(s,1h),8.31(s,1h),8.18(s,1h),7.96(s,1h),7.89(s,1h),7.64(s,1h),7.52(br d,j＝1.0hz,1h),7.44(s,1h),5.90(d,j＝8.5hz,1h),4.86(s,1h),4.23(t,j＝6.6hz,2h),3.80(br s,1h),3.71-3.53(m,2h),2.69(s,2h),2.19(s,6h),1.42(s,6h),1.17-1.01(m,1h),0.67-0.02(m,4h)ppm.
525、实施例41：(s)-5-((4-((1-环丁基-2-羟乙基)氨基)-5-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮(化合物41)
526、
527、化合物41的合成可以参考化合物40的合成策略。
528、
529、将(s)-5-((5-溴-4-((1-环丁基-2-羟乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮(200mg,448μmol,1.00eq)，n,n二甲基-2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)吡唑(405mg,1.34mmol,3.00eq,hcl)，碳酸钾(185mg,1.34mmol,3.00eq)和catacxium(r)a pd g3(65.2mg,89.6μmol,0.20eq)加入二氧六环(3ml)和水(0.3ml)中，氮气置换三次，在80℃反应6小时。lcms监测完毕，反应液过滤，浓缩，柱层析纯化，后通过机分纯化(column:xtimate c18150*40mm*10um；mobile phase:[water(nh4hco3)-acn]；gradient:12％-52％bover 32min)得到白色固体(s)-5-((4-((1-环丁基-2-羟乙基)氨基)-5-(1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)-3,3-二甲基异吲哚啉-1-酮(53.1mg,产率23.3％)。
530、lcms:m/z 505.2[m+h]+。
531、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.52(s,1h),8.58-8.16(m,2h),8.02-7.82(m,2h),7.62(s,1h),7.55(dd,j＝1.4,8.3hz,1h),7.49-7.42(m,1h),5.68(d,j＝9.0hz,1h),4.74(t,j＝5.1hz,1h),4.40-4.31(m,1h),4.24(t,j＝6.5hz,2h),3.49(td,j＝4.8,9.9hz,2h),2.74-2.57(m,3h),2.19(s,6h),2.08-1.89(m,2h),1.87-1.64(m,4h),1.45(d,j＝6.6hz,6h)ppm.
532、实施例42：(s)-6'-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(化合物42)
533、
534、
535、步骤一：(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙基-1-醇的合成
536、
537、将5-溴-2,4-二氯-嘧啶(5.00g,21.9mmol,2.81ml,1.00eq)，diea(5.67g,43.8mmol,7.64ml,2.00eq)在乙腈(50.0ml)中混合均匀后在零度加入(2s)-2-氨基-2-苯乙醇(3.01g,21.9mmol,1.00eq)，反应液升温到25度搅拌12个小时。tlc监测完毕后，反应液用水淬灭，乙酸乙酯萃取后用饱和食盐水洗后有机相干燥，浓缩，经过柱层析纯化后得到白色固体(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙基-1-醇(3.40g,10.0mmol,收率45.5％,纯度96.6％)。
538、lcms:m/z 329.7[m+h]+。
539、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.29(s,1h),7.70(d,j＝8.0hz,1h),7.45-7.15(m,5h),5.20(dt,j＝5.3,7.7hz,1h),5.07(t,j＝5.6hz,1h),3.89-3.68(m,2h)ppm.
540、步骤二：(s)-6'-((5-溴-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1，1'-异吲哚啉]-3'-酮的合成
541、
542、将(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙基-1-醇(500mg,1.52mmol,1.00eq)，6'-氨基螺环[环戊烷-1,1'-异吲哚]-3'-酮(307mg,1.52mmol,1.00eq)和盐酸/二氧六环(4.00m,3.80ml,10.0eq)在异丙醇(5.00ml)中混合均匀后在100度下搅拌12个小时。lcms监测完毕后，反应液加乙酸乙酯后过滤得到棕色固体(s)-6'-((5-溴-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(320mg,647μmol,收率42.5％)。
543、lcms:m/z 496.1.7[m+h]+。
544、步骤三：(s)-6'-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮的合成
545、
546、将(s)-6'-((5-溴-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(160mg,323μmol,1.00eq)，(1-(2-羟基-2-甲基丙)-1h-吡唑-4-基)硼酸脂(172mg,647μmol,2.00eq)，碳酸钾(134mg,970μmol,3.00eq)在二氧六环(2.00ml)和水(0.20ml)中混合均匀后加入甲磺酰氧基(二金刚烷基-正丁基膦基)-2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(47.1mg,64.7μmol,0.20eq)，升温到80度搅拌12个小时，lcms监测完毕后，反应液过滤，浓缩，经过机分纯化得到白色固体(s)-6'-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(12.8mg,22.3μmol)。
547、lcms:m/z 554.2[m+h]+。
548、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.40(s,1h),8.55(s,1h),7.96(d,j＝9.0hz,2h),7.80(s,1h),7.72(s,1h),7.66(dd,j＝1.4,8.4hz,1h),7.42-7.29(m,5h),7.24(d,j＝7.3hz,1h),6.40(d,j＝7.6hz,1h),5.30(br d,j＝5.9hz,1h),5.07(t,j＝5.2hz,1h),4.74(s,1h),4.09(s,2h),3.86-3.67(m,2h),1.96-1.83(m,6h),1.78-1.69(m,2h),1.12(s,6h)ppm.
549、实施例43：(s)-6'-((4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)-5-(1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环己烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(化合物43)
550、
551、化合物43的合成可以参考化合物42的合成策略。
552、lcms:m/z 568.2[m+h]+。
553、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.40(s,1h),8.55(s,1h),7.96(d,j＝9.0hz,2h),7.80(s,1h),7.72(s,1h),7.66(dd,j＝1.4,8.4hz,1h),7.42-7.29(m,5h),7.24(d,j＝7.3hz,1h),6.40(d,j＝7.6hz,1h),5.30(br d,j＝5.9hz,1h),5.07(t,j＝5.2hz,1h),4.74(s,1h),4.09(s,2h),3.86-3.67(m,3h),1.96-1.83(m,6h),1.78-1.69(m,3h),1.12(s,6h)ppm.
554、实施例44：(s)-6'-((5-(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(化合物44)
555、
556、步骤一：(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙基-1-醇的合成
557、
558、将5-溴-2,4-二氯-嘧啶(5.00g,21.9mmol,2.81ml,1.00eq)，diea(5.67g,43.8mmol,7.64ml,2.00eq)在乙腈(50.0ml)中混合均匀后在零度加入(2s)-2-氨基-2-苯乙醇(3.01g,21.9mmol,1.00eq)，反应液升温到25度搅拌12个小时。tlc监测完毕后，反应液用水淬灭，乙酸乙酯萃取后用饱和食盐水洗后有机相干燥，浓缩，经过柱层析纯化后得到白色固体(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙基-1-醇(3.40g,10.0mmol)。
559、lcms:m/z 329.7[m+h]+。
560、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝8.29(s,1h),7.70(d,j＝8.0hz,1h),7.45-7.15(m,5h),5.20(dt,j＝5.3,7.7hz,1h),5.07(t,j＝5.6hz,1h),3.89-3.68(m,2h)ppm.
561、步骤二：(s)-6'-((5-溴-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮的合成
562、
563、将(s)-2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2-苯乙基-1-醇(500mg,1.52mmol,1.00eq)，6'-氨基螺环[环戊烷-1,1'-异吲哚]-3'-酮(307mg,1.52mmol,1.00eq)和盐酸/二氧六环(4.00m,3.80ml,10.0eq)在异丙醇(5.00ml)中混合均匀后在100度下搅拌12个小时。lcms监测完毕后，反应液加乙酸乙酯后过滤得到棕色固体(s)-6'-((5-溴-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(320mg,647μmol)。
564、lcms:m/z 496.1[m+h]+。
565、步骤三：(s)-6'-((5-(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮的合成
566、
567、将(s)-6'-((5-溴-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(110mg,222μmol,1.00eq)，(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)硼酸脂(118mg,445μmol,2.00eq)，碳酸钾(92.2mg,667μmol,3.00eq)在二氧六环(2ml)和水(0.2ml)中混合均匀后加入甲磺酰氧基(二金刚烷基-正丁基膦基)-2’-氨基-1,1’-联苯-2-基)钯(ii)(32.4mg,44.5μmol,0.20eq)，升温到80度搅拌12个小时，lcms监测完毕后，反应液过滤，浓缩，经过机分纯化得到白色固体(s)-6'-((5-(1-(2-(二甲氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)-4-((2-羟基-1-苯乙基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)螺[环戊烷-1,1'-异吲哚啉]-3'-酮(18.1mg,31.9μmol)。
568、lcms:m/z 553.3[m+h]+。
569、1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ＝9.36(s,1h),8.53(s,1h),8.05(s,1h),7.93(s,1h),7.78(d,j＝1.5hz,1h),7.71(s,1h),7.67(dd,j＝1.7,8.3hz,1h),7.41-7.30(m,5h),7.25-7.20(m,1h),6.39(d,j＝7.5hz,1h),5.34-5.24(m,1h),5.07(t,j＝5.3hz,1h),4.26(t,j＝6.6hz,2h),3.86-3.67(m,2h),2.78-2.61(m,2h),2.20(s,6h),1.95-1.81(m,6h),1.74(brd,j＝3.0hz,2h)ppm.
570、生物学测试评价
571、以下结合测试例进一步描述解释本发明：
572、测试例1：hpk1激酶抑制试验
573、待测化合物用dmso溶解，配置成10mm母液。待测化合物使用dmso从10μm起始，连续做三倍梯度稀释，共计11个浓度。依照promega公司的hpk1 kinase assay(promega目录号#v4099)中所描述的方案，来进行检测化合物对hpk1激酶的抑制。hpk1激酶，待测化合物，atp和底物(mbp蛋白)按照方案描述使用激酶缓冲液(40mm tris，ph 7.5；20mm mgc12；0.1mg/ml bsa；50μm dtt)稀释。将稀释后的化合物(1μl)，hpk1激酶(2μl)和atp/mbp混合物(2μl)加入检测反应孔中，室温孵育60分钟后，加入5μl adp-glotm试剂，室温反应40分钟后，加入10μl激酶检测试剂，室温反应30分钟，测定最终发光信号数值。最后将数据输入合适的软件包(例如prism)以进行曲线拟合分析，并计算ic50值。
574、测试例2：glk激酶抑制试验
575、待测化合物用dmso溶解，配置成10mm母液。待测化合物使用dmso从100μm起始，连续做三倍梯度稀释，共计11个浓度。依照promega公司的glk kinase assay(promega目录号#va7179)中所描述的方案，来进行检测化合物对glk激酶的抑制。glk激酶，待测化合物，atp和底物(pka底物多肽)按照方案描述使用激酶缓冲液(40mm tris，ph 7.5；20mm mgc12；0.1mg/ml bsa；50μm dtt)稀释。将稀释后的化合物(1μl)，glk激酶(2μl)和atp/mbp混合物(2μl)加入检测反应孔中，室温孵育60分钟后，加入5μl adp-glotm试剂，室温反应40分钟后，加入10μl激酶检测试剂，室温反应30分钟，测定最终发光信号数值。最后将数据输入合适的软件包(例如prism)以进行曲线拟合分析，并计算ic50值。
576、测试例3：slp-76蛋白磷酸化试验
577、slp-76是hpk1的下游靶点，hpk1被抑制，会影响下游slp-76磷酸化。本测试例通过测定slp-76蛋白磷酸化，来反映本发明化合物抑制hpk1激酶的水平。
578、将jurkat e6-1克隆细胞(atcc，tib-152)培养在含有10％胎牛血清的rpmi 1640培养基中，置于5％co2的加湿培养箱中于37℃生长。化合物用dmso溶解，配置10mm母液。待测化合物使用dmso从10μm起始，连续做三倍梯度稀释，共计11个浓度。用不同浓度的测试化合物加入jurkat细胞培养孔中孵育30分钟，加入50μl稀释后的人cd3/cd28 t细胞激活剂(stemcell，目录号#10971)，使激活剂的终浓度体积为总体系的1/40，37度孵育30分钟。反应结束后将细胞于4度，1200rpm离心，5分钟，弃除培养基，加入细胞裂解液。
579、依照cell signaling公司的phospho-slp-76(ser376)sandwich elisa kit(cst目录号#78222)中说描述的方案测试细胞slp-76的磷酸化水平。将细胞裂解产物转移到涂覆有捕获抗体的预封闭的elisa板上。在室温振荡孵育2小时。用洗涤缓冲液将elisa板洗涤4次后，加入100μl检测抗体。在室温振荡孵育1小时，洗涤4次后，每孔加入100μl的hrp标记的二抗。在37℃下孵育30分钟，再次洗涤4次，每孔加入100μl tmb底物，在37℃下孵育15分钟，加入50μl终止液。在envision微孔板检测仪上读取450nm处的吸光度。最后将数据输入合适的软件包(例如prism)以进行曲线拟合分析，并计算ic50值。
580、测试例1、测试例2和测试例3所获得的各化合物的活性数据，示于表1中。其中所用的对照样品hpk-in-7购买自medchemexpress，目录号为：hy-138742。
581、表1：测试例1、测试例2和测试例3所获得的各化合物的活性数据
582、
583、测试例4：体外人体肝微粒体稳定性试验
584、准备8块96孔孵育板，分别命名为t0、t5、t15、t30、t45、t60、blank60和ncf60。前6块孵育板对应的反应时间点分别为0、5、15、30、45和60分钟。blank60板中不加入待测化合物或对照化合物并在孵育60分钟后取样。ncf60板中用磷酸钾盐缓冲液代替nadph再生体系溶液(sigma，n0505)进行孵育60分钟。
585、分别在t0、t5、t15、t30、t45、t60和ncf60板上添加2μl待测化合物或对照品工作液和100μl人体肝脏微粒体工作液(corning，452117)，微粒体蛋白浓度为1mg/ml)。在blank60板中只添加微粒体工作液，然后将除t0和ncf60外的孵育板blank60、t5、t15、t30、t45和t60放置于37℃水浴锅中预孵育大约10分钟。
586、t0板样品先加入600μl的终止液(含100ng/ml甲苯磺丁脲(sigma，t0891)的乙腈：甲醇(95:5，v/v)溶液)后，再添加nadph再生体系工作液。
587、在ncf60板上每孔添加98μl磷酸钾盐缓冲液，孵育60分钟。
588、孵育板blank60、t5、t15、t30、t45和t60预孵育结束后，每个样品孔内添加98μlnadph再生体系工作液以启动反应。
589、孵育适当时间(如5、15、30、45和60分钟)后，分别在blank60、t5、t15、t30、t45、t60和ncf60板的每个样品孔和对照品样品孔中加入600μl的终止液以终止反应。
590、所有样品板摇匀并在3220×g离心20分钟，分别取200μl试验品上清液稀释到200μl含0.3％甲酸的水溶液中用于lc-ms/ms分析，取100μl对照品上清液稀释到300μl纯水中用于lc-ms/ms分析，并按照如下公式计算：
591、
592、
593、
594、
595、
596、测试例4所获得的各化合物体外人肝微粒体稳定性实验数据，示于表2中。其中所用的对照样品hpk-in-7购买自medchemexpress，目录号为：hy-138742。
597、表2：体外微粒体稳定性实验数据
598、
599、
1.一种具有式(i)所示的结构的化合物或其盐以及立体异构体：
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐以及立体异构体，其中，
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其盐以及立体异构体，其中，rx选自h、卤素、c1-3烷基，优选地，rx为h。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐以及立体异构体，其中，r1选自-c(o)o(c1-3烷基)和同时含有n和o杂原子的5至6元杂芳基，其各自被0至3个r1c取代；优选地，r1c独立地选自c1-4烷基(例如甲基)、c1-4卤代烷基(例如三氟甲基)、c3-6环烷基(例如环丙基)、-(ch2)nrc。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物或其盐以及立体异构体，其中，r2选自：-chr2ar2b，其中r2a优选为苯基；被0至5个选自卤素、-cn、-ch3、-sch3、-oh、烷氧基、嘧啶基和苯基的取代基取代的苯基；c3-6环烷基或4至8元1-4个选自n、o、s的杂原子的杂环烷基，其任选取代有1-5个r2d。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物或其盐以及立体异构体，其中，r1选自-f、-cl、-cf3、-chf2、-cn、-c(o)nh2、-c(o)oh、-c(o)och2ch3、-c(o)nh(ch2)3n(ch3)2、-c(o)nh(ch2)2och3、-c(o)nh(ch2)2n(ch3)2、-c(o)nhc(ch3)4、-c(o)nhch2ch(ch3)2、-c(o)nhch(ch3)2、-c(o)nhch2ch2ch3、-c(o)nhch2ch3、-c(o)nhnh2、
7.根据权利要求1所述的化合物或其盐以及立体异构体，其中，所述化合物具有式(v)所示的结构：
8.根据权利要求1所述的化合物或其盐以及立体异构体，其中，所述化合物具有式(vi)所示的结构：
9.根据权利要求1所述的化合物或其盐以及立体异构体，其中，所述化合物具有以下任一项所示的结构：
10.权利要求1-8中任一项所述的化合物或其盐以及立体异构体的制备方法。
11.权利要求1-8中任一项所述的化合物或其盐以及立体异构体在制备药物中的用途；优选地，所述药物是用于治疗突变引起的疾病的药物；优选地，所述药物是用于治疗癌症的药物；优选地，所述药物是用于抑制造血祖细胞激酶1(hpk1)的药物。
