本发明涉及生物医药，尤其涉及重组慢病毒lenti-shrrp15的制备和特异性应用杀伤神经胶质瘤细胞。
背景技术：
1、核糖体rna加工蛋白rrp15是一种参与核糖体rna加工的蛋白质，核糖体rna加工是指在核糖体合成过程中，对核糖体rna进行修饰和加工的过程，rrp15在这一过程中起到了重要的作用，它参与了核糖体rna的修饰和加工，确保核糖体的正常合成和功能，核仁蛋白rrp15对核糖体大亚基的成熟至关重要，抑制细胞内rrp15的表达，导致肿瘤细胞死亡，而正常细胞仅发生周期阻滞，间歇性抑制细胞内rrp15基因表达，最终导致所有肿瘤细胞死亡，相反不影响正常细胞的生长，因此，核仁蛋白rrp15可以作为特异性抗肿瘤治疗的靶标；
2、目前尚不清楚核糖体rna加工蛋白rrp15与神经胶质瘤之间是否存在直接的关联，然而，生物信息学研究显示rrp15在神经胶质瘤发生和发展中可能起到重要的作用，rrp15蛋白的异常表达与神经胶质瘤的发生和预后密切相关，因此，进一步研究核糖体rna加工蛋白rrp15与神经胶质瘤之间的关系可能有助于我们更好地理解神经胶质瘤的发生机制，并为其治疗提供新的靶点；
3、慢病毒治疗是一种基因治疗方法，可以用于治疗神经胶质瘤，神经胶质瘤是一种恶性肿瘤，通常难以完全切除，并且对传统的放疗和化疗方法反应有限，慢病毒治疗利用慢病毒作为载体，将特定的基因导入肿瘤细胞中，以达到治疗的目的，这些基因可以通过不同的机制来抑制肿瘤细胞的生长和扩散，或者增强免疫系统对肿瘤的攻击能力，慢病毒治疗的优势在于它可以通过基因导入来实现针对性治疗，避免了传统治疗方法对正常细胞的损伤，此外，慢病毒治疗还可以通过改变肿瘤细胞的基因表达，使其对传统治疗方法更敏感，然而，慢病毒治疗也存在一些挑战和风险，首先，慢病毒治疗需要有效地将基因导入肿瘤细胞中，这可能受到肿瘤组织的限制和免疫系统的排斥，其次，慢病毒治疗可能引起免疫反应，导致治疗效果不佳或不可预测的副作用，总的来说，慢病毒治疗是一种有潜力的治疗神经胶质瘤的方法，但仍需要进一步的实验室基础研究和临床实践来验证其安全性和有效性。
技术实现思路
1、为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
2、重组慢病毒lenti-shrrp15的制备，其特征在于一种靶向rrp15基因的sirna序列为5’-ccagaatctgcaagtgactctgata-3’(844—869碱基)；重组慢病毒lenti-shrrp15的制备步骤为：
3、1)设计以上述sirna序列为靶点的shrrp15引物，并进行化学合成：
4、引物1:5’
5、-gatagagacaccggtgtgccagaatctgcaagtgactctctcgagagagtcacttgcagattctggtttttgtagaattctc-3’；
6、引物2:5’
7、-gagaattctacaaaaatctcagtgaacgtctaagaccctcgagggtcttagacgttcactgagacacaccggtgtctctatc-3’；
8、2)将上述2个引物等比例混和退火后，得到shrrp15序列；
9、3)使用下述引物对慢病毒质粒plko.1进行pcr扩增，并进行琼脂糖凝胶回收；
10、引物1：5’-tttttgtagaattctc-3’；
11、引物2：5’-cacaccggtgtctctatc-3’；
12、4)使用无缝克隆试剂盒连接shrrp15和质粒plko.1，得到慢病毒载体质粒plko-shrrp15；
13、5)应用细胞转染试剂盒superfect转染慢病毒质粒plko-shrrp15和辅助载体质粒(pmd2.g和pspax2)共转染293t细胞(各质粒质量比3：2：2)；细胞转染12小时后，更换细胞培养液；
14、6)细胞培养24小时后，收集细胞培养上清；
15、7)细胞继续培养24小时，再次收集细胞培养上清，离心收集病毒浓缩液，得到重组慢病毒lenti-shrrp15。
16、2.所述重组慢病毒lenti-shrrp15在杀伤神经胶质瘤细胞的特异性应用。本发明的有益效果：
17、本发明利用慢病毒(lentivirus)作为载体感染神经胶质瘤细胞，以核仁蛋白分子rrp15作为特异性抗肿瘤治疗的靶标，制备慢病毒lenti-shrrp15制剂进行神经胶质瘤治疗，具有高效、高特异、低副作用等巨大优势。
1.重组慢病毒lenti-shrrp15的制备，其特征在于一种靶向rrp15基因的sirna序列为5’-ccagaatctgcaagtgactctgata-3’(844—869碱基)；重组慢病毒lenti-shrrp15的制备步骤为：
2.根据权利要求1中所述的重组慢病毒lenti-shrrp15在杀伤神经胶质瘤细胞的特异性应用。
