本发明属于lncrna,具体涉及一种与山羊早期妊娠相关的lncrna及其应用。
背景技术:
1、目前已证明as lncrna通过染色质-rna、dna-rna、rna-rna或蛋白质-rna相互作用调控基因表达,包括转录前、转录中和转录后。大多数as lncrna的表达较低,并且发现它们通常在不同组织和细胞类型中的表达更具特异性。此外,as lncrna表达与其正义rna或邻近基因的活性密切相关。as lncrna在细胞中广泛存在,因此,鉴定并研究as lncrna的作用为基因调控提供新的证据,同时也为母羊妊娠过程中的胚胎附植研究提供新思路。aslncrna是如何调控山羊妊娠早期胚胎附植过程以及应用仍处于研发阶段,还需不断地探索与研究。
2、目前山羊早期妊娠的检测方法多样,传统的阴道检查法最早可在妊娠50天后进行,存在诊断时间较晚、可能造成机械性流产等缺点;免疫测定法如乳胶凝集抑制试验法、放射免疫测定法、酶联免疫测定法、早孕因子诊断法等,虽然妊娠诊断准确率可达到90%以上,但均存在价格昂贵、无法大量应用于生产等限制。除此之外,放射免疫测定法在检测过程中存在耗时长和放射性物质污染等危害;早孕因子诊断法直至目前属于研究热点,但尚未转化为成熟的产品能够应用于生产;其他免疫诊断法如胶体金免疫层析法和血清酸滴定法操作更加简单、价格低廉等具有重要的经济意义和推广价值,但其敏度和特异性等方面存在一定的局限性。超声波检查法除了对于仪器和人员配置要求较高之外,研究表明母羊通过b超妊娠诊断需要发情配种后35天以上才能准确率接近于100%,诊断时间也相对较晚。本发明具有良好特异性、敏感性和重复性、易操作、诊断时间早以及可直接检测早期妊娠标志物等特点,可为母羊早期妊娠诊断提供重要手段。
技术实现思路
1、本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足,提供一种与山羊早期妊娠相关的lncrna及其应用,该lncrna isg15-as可作为山羊早期妊娠标志物并存在用于临床诊断的可能性,本发明对于母羊妊娠结局的预测准确率高,有广阔的应用前景,具备实施的可行性。
2、为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:一种与山羊早期妊娠相关的lncrna,所述lncrna为lncrna isg15-as,核苷酸序列为seq.id.no.1。
3、本发明还提供了上述的与山羊早期妊娠相关的lncrna的应用,所述lncrnaisg15-as作为山羊早期妊娠标志物,用于制备检测山羊早期妊娠的药物。
4、优选地,所述检测山羊早期妊娠的方法为:
5、s1、提取山羊外周血液rna,得到待测rna;
6、s2、将s1中得到的待测rna反转录,得到cdna;
7、s3、用lncrna isg15-as引物对对s2中得到的cdna进行qpcr,检测妊娠不同时期山羊血液lncrna isg15-as表达量;
8、所述qpcr的反应条件为:2×sybr green pro taq hs premix 10μl、cdna 20ng、10μm lncrna isg15-as正向引物0.4μl、10μm lncrnaisg15-as反向引物0.4μl、rnase freewater补足至20μl;
9、所述qpcr的反应程序为:95℃30s;95℃5s,60℃30s,循环40次;
10、所述lncrna isg15-as正向引物的核苷酸序列如seq.id.no.2所示,所述lncrnaisg15-as反向引物的核苷酸序列如seq.id.no.3所示。
11、本发明与现有技术相比具有以下优点:
12、1、本发明提供了首次发现的lncrna isg15-as序列,并基于序列合成了用于检测lncrna isg15-as的引物序列和母羊血液检测方法,提供了母羊早期妊娠诊断的血液分子学检测的参考方案,证明了lncrnaisg15-as作为山羊早期妊娠标志物的潜力。
13、2、本发明的lncrna isg15-as可作为山羊早期妊娠标志物并存在用于临床诊断的可能性,本发明对于母羊妊娠结局的预测能够达到94%以上的准确率,该发明在技术领域中具有广阔的应用前景,具备实施的可行性。
14、下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明。
1.一种与山羊早期妊娠相关的lncrna,其特征在于,所述lncrna为lncrna isg15-as,核苷酸序列为seq.id.no.1。
2.一种如权利要求1所述的与山羊早期妊娠相关的lncrna的应用,其特征在于,所述lncrna isg15-as作为山羊早期妊娠标志物,用于制备检测山羊早期妊娠的药物。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述检测山羊早期妊娠的方法为: