本发明属于生物,具体涉及一种人工长链非编码rna及其在靶向蛋白降解中的应用。
背景技术:
1、靶向蛋白降解是一种利用天然蛋白质降解系统选择性降解致病蛋白质的方法。其中,蛋白水解靶向嵌合分子(proteolysis-targeting chimeras,protacs)是目前最具代表性的技术之一。protac是由两个部分组成的分子,一个部分能够与目标蛋白质结合,另一个部分能够与泛素连接酶(e3 ligase)结合。通过将目标蛋白质与泛素连接酶相连,protac可以促使目标蛋白质被泛素化,并最终降解。protac技术的出现极大地拓展了靶向蛋白质降解的范围,使得研究人员能够更精确地调控特定蛋白质的表达。除了protac之外,还出现了其他新兴的靶向蛋白质降解策略。其中,分子胶是一种利用小分子化合物使靶蛋白质与泛素连接酶结合的方法,从而促使其被降解。溶酶体靶向嵌合体(lytac)是一种利用抗体将蛋白靶标与溶酶体结合的方法,从而实现靶蛋白的降解。基于抗体的protac(abtac)是一种利用抗体将目标蛋白与e3泛素化连接酶结合的方法,实现对目标蛋白的降解。这些新兴的策略极大地拓展了靶向蛋白降解的应用范围,使得研究人员能够更全面高效地调控特定蛋白的表达。
2、尽管靶向蛋白降解技术在药物研发领域显示出巨大的潜力,但仍面临一些挑战。首先,设计合适的降解分子具有一定的复杂性,需要充分考虑靶蛋白质的结构和功能,以及与泛素化连接酶的相互作用。其次,预测有效的靶蛋白也是一个挑战,因为不同蛋白质的结构和功能差异巨大。此外,靶向蛋白降解技术可能存在非特异性作用。目前靶向蛋白质降解技术还缺乏一种分子遗传学操作工具,例如可转录为rna分子以结合和降解靶标蛋白的核酸小分子工具,这限制了目前靶向蛋白质降解技术的应用范围和可行性。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供弥补现有技术的不足,提供一种人工长链非编码rna及其应用,利用lncrna作为基础,通过与蛋白质的相互作用和调节来实现对蛋白的特异性降解,为蛋白降解提供一种新策略。
2、本发明提供了一种人工长链非编码rna,所述长链非编码rna包括顺次连接的靶向目标蛋白的序列和长链非编码rnahotair的特征片段;
3、所述靶向目标蛋白的序列和长链非编码rna hotair的特征片段通过linker连接;
4、所述长链非编码rnahotair的特征片段能够招募泛素连接酶。
5、优选的,所述泛素连接酶包括泛素连接酶dzip3和/或泛素连接酶mex3b;
6、所述目标蛋白包括gfp蛋白和/或促癌蛋白。
7、优选的,所述linker的核苷酸序列为ttatt;
8、所述靶向目标蛋白的序列包括rna适配体;所述rna适配体的核苷酸序列如seq idno.1所示;
9、所述长链非编码rnahotair的特征片段的核苷酸序列如seq id no.2或seq idno.3所示。
10、本发明还提供了一种重组载体,所述重组载体包括基础载体和插入所述基础载体的人工长链非编码rna;
11、所述人工长链非编码rna为上述技术方案所述的人工长链非编码rna。
12、本发明还提供了一种重组细胞,所述重组细胞包括受体细胞和插入所述受体细胞的人工长链非编码rna;
13、所述人工长链非编码rna为上述技术方案所述的人工长链非编码rna。
14、本发明还提供了上述技术方案所述的人工长链非编码rna或重组载体或重组细胞在制备降解蛋白的产品中的应用。
15、优选的,所述蛋白包括gfp蛋白和/或促癌蛋白。
16、本发明还提供了一种降解蛋白的方法,包括:将含有上述技术方案所述人工长链非编码rna的重组载体和待降解蛋白共转染至受体细胞后培养。
17、优选的,所述共转染的方法包括:将人工长链非编码rna的重组载体和待降解蛋白的编码基因重组后转染。
18、优选的,所述受体细胞包括hek293t细胞。
19、有益效果:
20、本发明利用lncrna作为基础,通过linker将靶向目标蛋白的序列和特异性结合泛素连接酶的lncrna hotair特征片段连接,得到一种人工长链非编码rna(alncrna),毒性小,能够捕获包括转录因子在内的蛋白质,与泛素连接酶形成复合物,促进目标蛋白质的泛素化,特异性降解目标蛋白质。
1.一种人工长链非编码rna,其特征在于,所述人工长链非编码rna包括顺次连接的靶向目标蛋白的序列和长链非编码rnahotair的特征片段;
2.根据权利要求1所述的人工长链非编码rna,其特征在于,所述泛素连接酶包括泛素连接酶dzip3和/或泛素连接酶mex3b;
3.根据权利要求1或2所述的人工长链非编码rna,其特征在于,所述linker的核苷酸序列为ttatt;
4.一种重组载体,其特征在于,所述重组载体包括基础载体和插入所述基础载体的人工长链非编码rna;
5.一种重组细胞,其特征在于,所述重组细胞包括受体细胞和插入所述受体细胞的人工长链非编码rna;
6.权利要求1~3任一项所述的人工长链非编码rna或权利要求4所述的重组载体或权利要求5所述的重组细胞在制备降解蛋白的产品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用,其特征在于,所述蛋白包括gfp蛋白和/或促癌蛋白。
8.一种降解蛋白的方法,其特征在于,包括:将含有权利要求1~3任一项所述人工长链非编码rna的重组载体和待降解蛋白共转染至受体细胞后培养。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述共转染的方法包括:将人工长链非编码rna的重组载体和待降解蛋白的编码基因重组后转染。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述受体细胞包括hek293t细胞。