T细胞活力激活剂及其应用的制作方法

专利检索2024-11-17  10


本发明涉及生物,尤其是涉及一种t细胞活力激活剂及其应用。


背景技术:

1、结核病(tb)是严重威胁人类健康的呼吸道传染病。结核病发生,发展及转归取决于入侵结核分枝杆菌(mtb)的数量,毒力及机体免疫抵抗力。对结核病患者免疫状况的评估和了解其临床免疫学特征是近年来研究的热点之一。

2、结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应(即γ-干扰素释放试验,igras)的主要原理:受到结核分枝杆菌抗原刺激致敏的t淋巴细胞(t细胞)再次遇到相同抗原时可产生γ-干扰素,igras通过检测全血或者分离自全血的外周血单个核细胞(pbmc)在结核分枝杆菌特异性抗原刺激下产生的γ-干扰素,判断受试者是否存在结核分枝杆菌感染。

3、现有的结核感染t细胞测定试剂盒虽然能够有效对结核病人的样本进行检测,但由于采集单位一般不具备检测条件,需要对样本进行转运。样本在运送至具有检测能力的检验实验室进行检验的流转过程中,血细胞离体时间延长,细胞活力降低,对特异性抗原的刺激活力低,响应弱,细胞因子γ-干扰素分泌量变少,或者不分泌,大大影响了检验结果的准确率。

4、为此,需要开发一种能够在样本在较长时间转运后,能够激活记忆t细胞的活力(以分泌细胞因子γ-干扰素)的,使得检测结果具有较高准确性的细胞激活剂。

5、有鉴于此,特提出本发明。


技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种t细胞活力激活剂,以缓解现有技术中长时间离体的t细胞活力降低,对刺激源的刺激活力低,响应弱的问题。本发明的另一目的还在于该t细胞活力激活剂的应用。

2、为解决上述技术问题,本发明特采用如下技术方案:

3、第一方面,提供了一种t细胞活力激活剂,该t细胞活力激活剂包含缓冲液、水解乳蛋白、海藻糖、半乳糖和胶原。

4、其中,t细胞活力激活剂含有水解乳蛋白10~30g/l,例如可以为但不限于10、15、20、25或30g/l;含有海藻糖15~80g/l,例如可以为但不限于15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或80g/l;含有半乳糖20~80g/l,例如可以为但不限于20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或80g/l;含有胶原10~40g/l,例如可以为但不限于10、15、20、25、30、35或40g/l。

5、可选的实施方式中,t细胞活力激活剂中的缓冲液包括pbs缓冲液。

6、可选的实施方式中,t细胞活力激活剂中的缓冲液包括终浓度为20mm,ph为7.2~7.6的pbs缓冲液,ph例如可以为但不限于7.2、7.4或7.6。

7、可选的实施方式中,所述t细胞活力激活剂包含终浓度为20mm,ph为7.2~7.6的pbs缓冲液;以及水解乳蛋白10~30g/l,海藻糖15~80g/l,半乳糖20~80g/l和胶原10~40g/l。

8、可选的实施方式中,所述t细胞活力激活剂包含终浓度为20mm,ph为7.4的pbs缓冲液,以及水解乳蛋白15g/l,海藻糖30g/l,半乳糖30g/l和胶原15g/l。

9、第二方面,还提供了第一方面的t细胞活力激活剂在如下任一项中的应用:

10、(ⅰ)体外激活t细胞;

11、(ⅱ)制备结核病检测的试剂或试剂盒;

12、第三方面,还提供了一种用于结核病检测的试剂,所述试剂包括第一方面的t细胞活力激活剂和用于刺激免疫细胞释放γ干扰素的刺激原。

13、可选的实施方式中,所述刺激原为结核分枝杆菌特异性抗原或凝集素。

14、凝集素和结核分枝杆菌特异性抗原都可以用于刺激t细胞产生的γ-干扰素:凝集素能够使t细胞分泌inf-γ,以测试细胞活力;结核分枝杆菌特异性抗原仅能刺激已致敏的t细胞分泌inf-γ,以检测待测样本的结核感染情况。

15、可选的实施方式中,所述刺激原和所述t细胞活力激活剂的用量比为1g:100ml。

16、第四方面,还提供了一种用于结核病检测的试剂盒,该试剂盒包括第一方面的t细胞活力激活剂和/或第三方面的用于结核病检测的试剂。

17、可以理解的是,所述试剂盒还可以包括本领域任选的,可接受的其他的用于结核病检测的试剂,包括但不限于缓冲液、洗涤液、稀释液、样本处理液、固相载体、用于提供检测信号的标记物、发光底物、阴性对照、阳性对照、标准品和质控品中的一种和多种。

18、与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:

19、本发明提供的t细胞活力激活剂含有缓冲液、水解乳蛋白、海藻糖、半乳糖和胶原,能够与刺激免疫细胞释放γ干扰素的刺激原配合使用,刺激t细胞分泌γ-干扰素。本发明的t细胞活力激活剂能够有效激活经长时间转运(收集后32h)的样本中的t细胞,有效改善现有样本长时间转运后细胞活力下降、响应弱,结核检测(γ-干扰素释放试验)假阴性增加的问题,本发明提供的t细胞活力激活剂对于保证结核病检测的准确性有重要意义。



技术特征:

1.一种t细胞活力激活剂,其特征在于,包含缓冲液、水解乳蛋白、海藻糖、半乳糖和胶原。

2.根据权利要求1所述的t细胞活力激活剂,其特征在于,所述t细胞活力激活剂含有水解乳蛋白10~30g/l,海藻糖15~80g/l,半乳糖20~80g/l和胶原10~40g/l。

3.根据权利要求1所述的t细胞活力激活剂,其特征在于,所述缓冲液包括pbs缓冲液;

4.根据权利要求1~3任一项所述的t细胞活力激活剂,其特征在于,包含终浓度为20mm,ph为7.2~7.6的pbs缓冲液;以及水解乳蛋白10~30g/l,海藻糖15~80g/l,半乳糖20~80g/l和胶原10~40g/l。

5.根据权利要求4所述的t细胞活力激活剂,其特征在于,包含终浓度为20mm,ph为7.4的pbs缓冲液,以及水解乳蛋白15g/l,海藻糖30g/l,半乳糖30g/l和胶原15g/l。

6.权利要求1~5任一项所述的t细胞活力激活剂在如下任一项中的应用:

7.用于结核病检测的试剂,其特征在于,包括权利要求1~5任一项所述的t细胞活力激活剂和用于刺激免疫细胞释放γ干扰素的刺激原;

8.根据权利要求7所述的试剂,其特征在于,所述刺激原和所述t细胞活力激活剂的用量比为1g:100ml。

9.根据权利要求7或8所述的试剂制备结核病检测试盒的用途。

10.用于结核病检测的试剂盒,其特征在于,包括权利要求1~5任一项所述的t细胞活力激活剂和/或如权利要求7或8所述的试剂。


技术总结
本发明提供了一种T细胞活力激活剂及其应用,涉及生物技术领域。该T细胞活力激活剂包含缓冲液、水解乳蛋白、海藻糖、半乳糖和胶原。该T细胞活力激活剂缓解了现有技术中长时间离体的T细胞活力降低,对刺激原的刺激活力低,响应弱的问题。

技术研发人员:马玲,曾敏霞,管亚楚
受保护的技术使用者:珠海丽珠试剂股份有限公司
技术研发日:
技术公布日:2024/5/29
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