本公开涉及细胞疗法领域，并且更具体地涉及嵌合抗原受体(car)细胞疗法。
背景技术：
1、人癌本质上由正常细胞构成，这些正常细胞发生了遗传转化或表观遗传转化而变成异常癌细胞。这样一来，癌细胞开始表达与正常细胞所表达的那些不同的蛋白质和其他抗原。身体的先天免疫系统可使用这些异常肿瘤抗原来特异性地靶向和杀死癌细胞。然而，癌细胞采用各种机制来防止免疫细胞(诸如t和b淋巴细胞)成功靶向癌细胞。
2、目前的t细胞疗法依赖于经富集或修饰的人t细胞来靶向和杀死患者体内的癌细胞。为了增加t细胞靶向和杀死特定癌细胞的能力，已开发了工程化t细胞以表达将t细胞引导至特定靶癌细胞的构建体的方法。包含能够与特定肿瘤抗原相互作用的结合结构域的嵌合抗原受体(car)允许t细胞靶向并杀灭表达特定肿瘤抗原的癌细胞。
3、需要产生抗原受体修饰的t细胞的改善方法，用于在自体或同种异体环境中特异性靶向和杀死癌细胞。
技术实现思路
1、本发明公开了嵌合抗原受体(car)，其包含至少一个抗原结合结构域，跨膜结构域，共刺激结构域；以及包含cd3ε信号传导结构域、cd3γ信号传导结构域、cd3δ信号传导结构域或dap-12信号传导结构域中的一者的信号传导结构域。
2、在某些实施方案中，car包含具有hcdr1、hcdr2和hcdr3和lcdr1、lcdr2和lcdr3的抗cd19结合结构域，其中hcdr1包含根据seq id no:2-4中任一项的氨基酸序列；hcdr2包含根据seq id no:5-7中任一项的氨基酸序列；hcdr3包含根据seq id no:8-10中任一项的氨基酸序列；lcdr1包含根据seq id no:12-14中任一项的氨基酸序列；lcdr2包含根据seq idno:15-17中任一项的氨基酸序列；并且lcdr3包含根据seq id no:18-20中任一项的氨基酸序列。
3、在某些实施方案中，car包含具有hcdr1、hcdr2和hcdr3和lcdr1、lcdr2和lcdr3的抗cd19结合结构域，其中hcdr1包含根据seq id no:24-26中任一项的氨基酸序列；hcdr2包含根据seq id no:27-29中任一项的氨基酸序列；hcdr3包含根据seq id no:30-32中任一项的氨基酸序列；lcdr1包含根据seq id no:34-36中任一项的氨基酸序列；lcdr2包含根据seq id no:37-39中任一项的氨基酸序列；并且lcdr3包含根据seq id no:40-42中任一项的氨基酸序列。
4、在实施方案中，car包括包含hcdr1、hcdr2和hcdr3的重链可变结构域；以及包含lcdr1、lcdr2和lcdr3的第一轻链可变结构域，其中：重链可变结构域与seq id no:1至少80％相同；并且轻链可变结构域与seq id no:11至少80％相同；或者重链可变结构域与seqid no:24至少80％相同；并且轻链可变结构域与seq id no:33至少80％相同。
5、在实施方案中，hcdr1、hcdr2、hcdr3，lcdr1、lcdr2和lcdr3由单个多肽组成。
6、在实施方案中，抗cd19结合结构域包含scfv。在实施方案中，scfv包含根据seq idno:21或43中的一项的氨基酸序列。
7、在实施方案中，信号传导结构域包含具有根据seq id no:52、seq id no:87、seqid no:88和seq id no:89中任一项的氨基酸序列的cd3ε信号传导结构域。在实施方案中，信号传导结构域包含具有根据seq id no:57的氨基酸序列的cd3γ信号传导结构域。在实施方案中，信号传导结构域包含具有根据seq id no:55的氨基酸序列的cd3δ信号传导结构域。在实施方案中，信号传导结构域包含具有根据seq id no:59的氨基酸序列的dap-12信号传导结构域。
8、在实施方案中，跨膜结构域是cd28跨膜结构域。在实施方案中，共刺激结构域包含cd28共刺激结构域。
9、在实施方案中，抗cd19 car包含根据seq id no:62、65、67和69中任一项的氨基酸序列。
10、公开了编码本文公开的car的核酸。本发明公开了包含此类核酸的重组载体。本发明公开了用此类核酸和重组载体转导的宿主细胞。在实施方案中，宿主细胞包括t细胞、inkt细胞或nk细胞。
11、本发明公开了包含此类t细胞、inkt细胞和/或nk细胞的药物组合物。本发明公开了治疗有需要的患者的疾病的方法，该方法包括向患者施用t细胞、inkt细胞和/或nk细胞或药物组合物。本发明公开了在受试者中诱导免疫应答或者使受试者对癌症免疫的方法，该方法包括向受试者施用t细胞、inkt细胞和/或nk细胞或者向患者施用药物组合物。在实施方案中，癌症是急性淋巴细胞性白血病(all)(包括非t细胞all)、急性髓系白血病、b细胞幼淋巴细胞白血病、b细胞急性淋巴性白血病(“ball”)、母细胞性浆细胞样树突细胞瘤、伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性髓细胞白血病(cml)、慢性髓系白血病、慢性或急性白血病、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、滤泡性淋巴瘤(fl)、毛细胞白血病、霍奇金病、恶性淋巴组织增生性病症、malt淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、意义未明的单克隆丙种球蛋白血症(mgus)、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、浆细胞增生性疾病(包括无症状性骨髓瘤(郁积型多发性骨髓瘤或惰性骨髓瘤)、浆母细胞性淋巴瘤、浆细胞样树突细胞瘤、浆细胞瘤(包括浆细胞恶液质；孤立性骨髓瘤；孤立性浆细胞瘤；髓外浆细胞瘤和多发性浆细胞瘤)、poems综合征(也称为crow-fukase综合征；takatsuki病；以及pep综合征)、原发纵隔大b细胞淋巴瘤(pmbc)、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(smzl)、系统性淀粉样蛋白轻链型淀粉样变性、t细胞急性淋巴性白血病(“tall”)、t细胞淋巴瘤、转化滤泡性淋巴瘤、或waldenstrom巨球蛋白血症、套细胞淋巴瘤(mcl)、转化滤泡性淋巴瘤(tfl)、原发性纵隔b细胞淋巴瘤(pmbcl)、多发性骨髓瘤、毛细胞淋巴瘤/白血病或它们的组合。
1.一种抗cd19嵌合抗原受体(car)，所述抗cd19 car包含：
2.根据权利要求1所述的抗cd19 car，所述抗cd19 car包括包含所述hcdr1、所述hcdr2和所述hcdr3的重链可变结构域；以及包含所述lcdr1、所述lcdr2和所述lcdr3的第一轻链可变结构域，其中：
3.根据权利要求1或2中任一项所述的抗cd19 car，其中所述hcdr1、所述hcdr2、所述hcdr3，所述lcdr1、所述lcdr2和所述lcdr3由单个多肽组成。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗cd19 car，其中所述抗cd19结合结构域包含scfv。
5.根据权利要求4所述的抗cd19 car，其中所述scfv包含根据seqid no:21或43中的一项的氨基酸序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗cd19 car，其中所述信号传导结构域包含具有根据seq id no:52的氨基酸序列的cd3ε信号传导结构域。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的抗cd19 car，其中所述信号传导结构域包含具有根据seq id no:57的氨基酸序列的cd3γ信号传导结构域。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的抗cd19 car，其中所述信号传导结构域包含具有根据seq id no:55的氨基酸序列的cd3δ信号传导结构域。
9.根据权利要求1至5中任一项所述的抗cd19 car，其中所述信号传导结构域包含具有根据seq id no:59的氨基酸序列的dap12信号传导结构域。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的抗cd19 car，其中所述跨膜结构域包含cd28跨膜结构域。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗cd19 car，其中所述共刺激结构域包含cd28共刺激结构域。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗cd19 car，所述抗cd19car包含根据seq idno:62、65、67和69中任一项的氨基酸序列。
13.一种核酸，所述核酸编码根据权利要求1至12中任一项所述的抗cd19 car。
14.一种重组载体，所述重组载体包含根据权利要求13所述的核酸。
15.一种宿主细胞，所述宿主细胞用根据权利要求13所述的核酸或者根据权利要求14所述的重组载体转导。
16.根据权利要求15所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞包括t细胞、inkt细胞或nk细胞。
17.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求16所述的t细胞、inkt细胞和/或nk细胞。
18.一种治疗有需要的患者的疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用根据权利要求16所述的t细胞、inkt细胞和/或nk细胞，或者根据权利要求17所述的药物组合物。
19.一种在受试者中诱导免疫应答或者使受试者对癌症免疫的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求16所述的t细胞、inkt细胞和/或nk细胞，或者向所述患者施用根据权利要求17所述的药物组合物。
20.根据权利要求18或19所述的方法，其中所述癌症是急性淋巴细胞性白血病(all)(包括非t细胞all)、急性髓系白血病、b细胞幼淋巴细胞白血病、b细胞急性淋巴性白血病(“ball”)、母细胞性浆细胞样树突细胞瘤、伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性髓细胞白血病(cml)、慢性髓系白血病、慢性或急性白血病、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、滤泡性淋巴瘤(fl)、毛细胞白血病、霍奇金病、恶性淋巴组织增生性病症、malt淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、边缘区淋巴瘤、意义未明的单克隆丙种球蛋白血症(mgus)、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常和骨髓增生异常综合征、非霍奇金淋巴瘤(nhl)、浆细胞增生性疾病(包括无症状性骨髓瘤(郁积型多发性骨髓瘤或惰性骨髓瘤)、浆母细胞性淋巴瘤、浆细胞样树突细胞瘤、浆细胞瘤(包括浆细胞恶液质；孤立性骨髓瘤；孤立性浆细胞瘤；髓外浆细胞瘤和多发性浆细胞瘤)、poems综合征(也称为crow-fukase综合征；takatsuki病；以及pep综合征)、原发纵隔大b细胞淋巴瘤(pmbc)、小细胞或大细胞滤泡性淋巴瘤、脾边缘区淋巴瘤(smzl)、系统性淀粉样蛋白轻链型淀粉样变性、t细胞急性淋巴性白血病(“tall”)、t细胞淋巴瘤、转化滤泡性淋巴瘤、或waldenstrom巨球蛋白血症、套细胞淋巴瘤(mcl)、转化滤泡性淋巴瘤(tfl)、原发性纵隔b细胞淋巴瘤(pmbcl)、多发性骨髓瘤、毛细胞淋巴瘤/白血病或它们的组合。
21.一种嵌合抗原受体(car)，所述car包含具有选自由seq id no:87、seq id no:88和seq id no:89组成的组的氨基酸序列的cd3ε信号传导结构域。
22.根据权利要求21所述的car，其中所述car包含对选自由以下组成的组的抗原具有特异性的结合结构域：707-ap(707丙氨酸脯氨酸)、afp(阿尔法(a)-甲胎蛋白)、art-4(由t4细胞识别的腺癌抗原)、bage(b抗原；b-连环蛋白/m、b-连环蛋白/突变的)、bcma(b细胞成熟抗原)、bcr-abl(裂点簇区-abelson)、caix(碳酸酐酶ix)、cd19(分化簇19)、cd20(分化簇20)、cd22(分化簇22)、cd30(分化簇30)、cd33(分化簇33)、cd44v7/8(分化簇44，外显子7/8)、camel(黑色素瘤上的ctl识别的抗原)、cap-1(癌胚抗原肽1)、casp-8(半胱天冬酶8)、cdc27m(突变的细胞分裂周期蛋白27)、cdk4/m(突变的环化素依赖性激酶4)、cea(癌胚抗原)、c型凝集素样-1(cll-1)、ct(癌/睾丸(抗原))、cyp-b(亲环蛋白b)、dam(黑色素瘤上的分化抗原)、egfr(表皮生长因子受体)、egfrviii(表皮生长因子受体变体iii)、egp-2(表皮糖蛋白2)、egp-40(表皮糖蛋白40)、erbb2、3、4(成红细胞白血病病毒癌基因同源物-2、-3、
23.根据权利要求21所述的car，其中所述car由双顺反子核酸构建体编码。
24.根据权利要求21至23中任一项所述的car，其中所述car包含对cd19具有特异性的结合结构域。
25.根据权利要求21所述的car，其中所述cd3ε信号传导结构域由与选自由seq id no:79、seq id no:80和seq id no:81组成的组的序列具有至少90％序列同一性的核酸编码。
26.根据权利要求21所述的car，其中当所述car在细胞中表达时，与具有野生型cd3ε信号传导结构域而不是具有选自由seq id no:87、seq id no:88和seq id no:89组成的组的氨基酸序列的cd3ε信号传导结构域的对应car相比，所述car表现出更高程度的向细胞膜的运输。
27.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码根据权利要求21所述的car。
28.一种载体，所述载体包含根据权利要求27所述的多核苷酸。
29.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求28所述的载体。
30.根据权利要求29所述的宿主细胞，其中所述细胞选自由t细胞、inkt细胞或nk细胞组成的组。
31.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求29所述的宿主细胞。
32.一种治疗有需要的患者的疾病或病症的方法，所述方法包括施用根据权利要求29所述的宿主细胞。
33.一种制备car t细胞的方法，所述方法包括提供根据权利要求21所述的car的表达。
34.一种cd3ε信号传导结构域，所述cd3ε信号传导结构域具有选自由seq id no:87、seq id no:88和seq id no:89组成的组的氨基酸序列。
35.根据权利要求34所述的cd3ε信号传导结构域，其中所述cd3ε信号传导结构域由与选自由seq id no:79、seq id no:80和seq id no:81组成的组的序列具有至少90％序列同一性的核酸编码。
36.根据权利要求34所述的cd3ε信号传导结构域，其中所述cd3ε信号传导结构域由嵌合抗原受体(car)组成。
37.根据权利要求36所述的cd3ε信号传导结构域，其中所述car包含对选自由以下组成的组的抗原具有特异性的结合结构域：707-ap(707丙氨酸脯氨酸)、afp(阿尔法(a)-甲胎蛋白)、art-4(由t4细胞识别的腺癌抗原)、bage(b抗原；b-连环蛋白/m、b-连环蛋白/突变的)、bcma(b细胞成熟抗原)、bcr-abl(裂点簇区-abelson)、caix(碳酸酐酶ix)、cd19(分化簇19)、cd20(分化簇20)、cd22(分化簇22)、cd30(分化簇30)、cd33(分化簇33)、cd44v7/8(分化簇44，外显子7/8)、camel(黑色素瘤上的ctl识别的抗原)、cap-1(癌胚抗原肽1)、casp-8(半胱天冬酶8)、cdc27m(突变的细胞分裂周期蛋白27)、cdk4/m(突变的环化素依赖性激酶4)、cea(癌胚抗原)、c型凝集素样-1(cll-1)、ct(癌/睾丸(抗原))、cyp-b(亲环蛋白b)、dam(黑色素瘤上的分化抗原)、egfr(表皮生长因子受体)、egfrviii(表皮生长因子受体变体iii)、egp-2(表皮糖蛋白2)、egp-40(表皮糖蛋白40)、erbb2、3、4(成红细胞白血病病毒癌基因同源物-2、-3、4)、elf2m(突变的延伸因子2)、etv6-aml1(ets变体基因6/急性髓样白血病1基因ets)、fbp(叶酸盐结合蛋白)、fachr(胎儿乙酰胆碱受体)、g250(糖蛋白250)、gage(g抗原)、gd2(二唾液酸神经节苷2)、gd3(二唾液酸神经节苷3)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(gpc3)、gnt-v(n-乙酰葡糖胺转移酶v)、gp100(糖蛋白100kd)、hage(解旋酶抗原)、her-2/neu(人表皮受体2/神经；也称为egfr2)、hla-a(人白细胞抗原a)、hpv(人乳头瘤病毒)、hsp70-2m(突变的热休克蛋白70-2)、hst-2(人环状体肿瘤因子2)、htert或htrt(人端粒酶逆转录酶)、ice(肠道羧基酯酶)、il-13r-a2(白介素13受体亚基α-2)、kiaa0205、kdr(激酶插入区受体)、κ轻链、lage(l抗原)、ldlr/fut(低密度脂质受体/gdp-l-岩藻糖：b-d-半乳糖苷酶2-a-l岩藻糖基转移酶)、ley(lewis-y抗体)、l1 cam(l1细胞粘附分子)、mage(黑色素瘤抗原)、mage-a1(黑色素瘤相关抗原1)、间皮素、鼠cmv感染细胞、mart-1/melan-a(由t细胞识别的黑色素瘤抗原1/黑色素瘤抗原a)、mc1 r(黑皮质素1受体)、肌球蛋白/m(突变的肌球蛋白)、muc1(粘蛋白1)、mum-1、-2、-3(黑色素瘤遍在突变蛋白1、2、3)、na88-a(患者m88的na cdna克隆)、nkg2d(自然杀伤组2、成员d)配体、ny-br-1(纽约乳腺分化抗原1)、ny-eso-1(纽约食管鳞状细胞癌-1)、癌胚胎抗原(h5t4)、p15(蛋白质15)、p190较小bcr-abl(190kd蛋白质bcr-abl)、pml/rara(前髓细胞性白血病/视黄酸受体a)、prame(黑色素瘤的优先表达抗原)、psa(前列腺特异性抗原)、psca(前列腺干细胞抗原)、psma(前列腺特异性膜抗原)、rage(肾抗原)、ru1或ru2(肾遍在蛋白1或2)、sage(肉瘤抗原)、sart-1或sart-3(排斥肿瘤的鳞状抗原1或3)、ssx1、-2、-3、4(滑膜肉瘤x1、-2、-3、-4)、taa(肿瘤相关抗原)、tag-72(肿瘤相关糖蛋白72)、tel/aml1(易位ets家族白血病/急性髓样白血病1)、tpi/m(突变的磷酸丙糖异构酶)、trp-1(酪氨酸酶相关蛋白1或gp75)、trp-2(酪氨酸酶相关蛋白2)、trp-2/int2(trp-2/内含子2)、vegf-r2(血管内皮生长因子受体2)和wt1(wilms肿瘤基因)。
38.根据权利要求36所述的cd3ε信号传导结构域，其中所述car由双顺反子核酸构建体编码。
39.根据权利要求36至38中任一项所述的cd3ε信号传导结构域，其中所述car包含对cd19具有特异性的结合结构域。
40.根据权利要求36所述的cd3ε信号传导结构域，其中当所述car在细胞中表达时，与具有野生型cd3ε信号传导结构域而不是具有选自由seq id no:87、seq id no:88和seq idno:89组成的组的氨基酸序列的cd3ε信号传导结构域的对应car相比，所述car表现出更高程度的向细胞膜的运输。
41.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码根据权利要求34所述的cd3ε信号传导结构域。
42.一种载体，所述载体包含根据权利要求41所述的多核苷酸。
43.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含根据权利要求42所述的载体。
44.根据权利要求43所述的宿主细胞，其中所述细胞选自由t细胞、inkt细胞或nk细胞组成的组。
45.一种治疗有需要的患者的疾病或病症的方法，所述方法包括施用根据权利要求43所述的宿主细胞。
46.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求43所述的宿主细胞。
47.一种制备car t细胞的方法，所述方法包括提供根据权利要求36所述的car的表达。
48.一种改善car向细胞膜运输的方法，其中所述car被设计成表达具有选自由seq idno:87、seq id no:88和seq id no:89组成的组的氨基酸序列的cd3ε信号传导结构域。
49.根据权利要求48所述的方法，其中所述cd3ε信号传导结构域由与选自由seq idno:79、seq id no:80和seq id no:81组成的组的序列具有至少90％序列同一性的核酸编码。
50.一种改善car向细胞膜运输的方法，其中所述car被设计成包含具有对野生型cd3ε信号传导结构域的一个或多个突变、缺失或插入的cd3ε信号传导结构域。
