一种利用氧化亚铁硫杆菌提取松茸多糖的方法与流程

108cfu/ml。
7.优选的，步骤（1）所述发酵液的ph=2-3。
8.与现有技术相比本发明的有益效果是：本发明创造性的采用氧化亚铁硫杆菌提取松茸多糖，利用生物技术提取植物成分，不会对环境造成破坏；通过实验结果可以看出，松茸多糖的浸出率明显高于对照组，说明发酵液中的硫酸化酶等酶可作为植物细胞壁的溶解酶使用，从而提高胞内物质的溶出率。本发明提取方法条件温和，提取工艺简单，松茸多糖提取率高，具有广泛的应用场景。
具体实施方式
9.以下对本发明专利的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明专利，并非用于限定本发明专利的范围。
10.实施例1一种利用氧化亚铁硫杆菌提取松茸等植物多糖的方法，包括如下步骤：（1）选用松茸子实体，经清洗、干燥、粉碎，过80目筛，取10g过筛后的松茸子实体倒入200g含菌种数量106cfu/ml氧化亚铁硫杆菌的发酵液中，在28℃下，200r/min下发酵30h；（2）将步骤（1）中的发酵液过滤，除去残渣，减压浓缩至20ml；（3）将步骤（2）得到的浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇，静置24h，4500r/min离心15min，去除上清液，收集沉淀，干燥即得发酵松茸多糖。
11.实施例2一种利用氧化亚铁硫杆菌提取松茸等植物多糖的方法，包括如下步骤：（1）选用松茸子实体，经清洗、干燥、粉碎，过80目筛，取10g筛选后的松茸子实体倒入200g含菌种数量106cfu/ml氧化亚铁硫杆菌的发酵液中，在30℃下，200r/min下发酵24h；（2）将步骤（1）中的发酵液过滤，除去残渣，减压浓缩至20ml；（3）将步骤（2）得到的浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇，静置24h，4500r/min离心15min，去除上清液，收集沉淀，干燥即得发酵松茸多糖。
12.实施例3一种利用氧化亚铁硫杆菌提取松茸多糖的方法，包括如下步骤：（1）选用松茸子实体，经清洗、干燥、粉碎，过80目筛，取10g筛选后的松茸子实体倒入200g含菌种数量108cfu/ml氧化亚铁硫杆菌的发酵液中，在32℃下，200r/min下发酵24h；（2）将步骤（1）中的发酵液过滤，除去残渣，减压浓缩至20ml；（3）将步骤（2）得到的浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇，静置24h，4500r/min离心15min，去除上清液，收集沉淀，干燥即得发酵松茸多糖。
13.对比例1一种超声波法提取松茸多糖的方法，包括如下步骤：将松茸子实体烘干、粉碎，过80目筛，称取10g，加入200g水，在80℃下，以200w超声功率超声20min，过滤，减压浓缩至20ml；向浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇，静置24h，4500r/min离心15min，去除上清液，收集沉淀，干燥即得发酵松茸多糖。
14.对比例2一种热水法提取松茸多糖的方法，包括如下步骤：
将松茸子实体烘干、粉碎，过80目筛，称取10g，加入200g水，在80℃下浸泡24h，过滤，减压浓缩至20ml；向浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇，静置24h，4500r/min离心15min，去除上清液，收集沉淀，干燥即得发酵松茸多糖。
15.对比例3一种酶法提取松茸多糖的方法，包括如下步骤：将松茸子实体烘干、粉碎，过80目筛，称取10g，加入198g水，再加入1g纤维素酶和1g果胶酶，常温提取60min，90℃灭酶10min，过滤，除去残渣，减压浓缩至20ml；向浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇，静置24h，4500r/min离心15min，去除上清液，收集沉淀，干燥即得发酵松茸多糖。
16.试验例松茸多糖含量检测1.1样品：分别取实施例2、对比例1、对比例2、对比例3制备的松茸多糖，加水复溶至20ml溶液进行测试。
17.1.2检测方法：采用苯酚-硫酸法测定松茸多糖的含量，具体测试方法如下：（1）葡萄糖标准溶液的配制：准确称取在105℃干燥至质量恒定的葡萄糖标准品0.100 0 g，置于50 ml烧杯中加蒸馏水溶解，并全部转移至100 ml容量瓶中，稀释至刻度，另取10 ml该溶液于100 ml容量瓶中，稀释至刻度，配成质量浓度0.1 mg／ml的葡萄糖标准溶液；（2）葡萄糖标准曲线的绘制：精密吸取0.1mg /ml的葡萄糖标准使用液0、0.2 ml、0.4 ml、0.6 ml、0.8 ml、1.0 ml、1.2 ml，分别置于25 ml比色管中，准确补充水至2.0 ml，加入5％苯酚溶液1.0 ml，在旋转混匀器上混匀，小心加入浓硫酸5.0 ml，在旋转均匀器上小心混匀，冷却后，用分光光度计在波长490 nm处，以空白试剂溶液为参比，1 cm比色皿测吸光度值，制得标准曲线；（3）松茸多糖得率计算：将松茸粗多糖溶液用蒸馏水定容至100ml，取1ml稀释100倍，精确吸取待测液1 ml置于25 ml比色管中，按照上述方法显色， 用分光光度计在波长490nm处测定吸光度值。从标准曲线回归方程计算葡萄糖的质量，计算样品中多糖含量。多糖含量的计算公式如下：多糖得率的计算公式如下：y=(m1
×
v1
×
0.9
×
10-4
×
100%)/(m2
×
v2)式中：y松茸多糖的得率，%；质量浓度，m1为从标准曲线上查得测定液中多糖含量，
µ
g；v1为定容体积，ml；m2为样品质量，g；v2为比色测定时所取样品体积，ml；0.9位葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。
18.1.3测试结果具体测试结果见下表：
从上述数据可以得出，采用本发明氧化亚铁硫杆菌提取松茸多糖，得到的松茸多糖明显比传统方法的得率高，且本发明提取方法条件温和，成本低，操作简单，不会对多糖造成破坏，提取率高。
19.以上为本发明较佳实施例，只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。


技术特征：
1.一种利用氧化亚铁硫杆菌提取松茸多糖的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）选用松茸子实体，经清洗、干燥、粉碎，倒入氧化亚铁硫杆菌发酵液中在25-35℃下发酵24-30h；（2）将步骤（1）中的发酵液过滤，除去残渣，减压浓缩；（3）将步骤（2）得到的浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇，静置24h，4500r/min离心15min，去除上清液，收集沉淀，干燥即得发酵松茸粗多糖。2.根据权利要求1所述的利用氧化亚铁硫杆菌提取松茸多糖的方法，其特征在于：步骤（1）所述氧化亚铁硫杆菌发酵液中氧化亚铁硫杆菌的数量为10
6-108cfu/ml。3.根据权利要求1所述的利用氧化亚铁硫杆菌提取松茸多糖的方法，其特征在于：步骤（1）所述发酵条件为30℃，在200r/min下发酵24h。4.根据权利要求1所述的利用氧化亚铁硫杆菌提取松茸多糖的方法，其特征在于：步骤（1）所述发酵液的ph=2-3。

技术总结
本发明属于植物多糖提取技术领域，公开一种利用氧化亚铁硫杆菌提取松茸多糖的方法，包括如下步骤：（1）选用松茸子实体，经清洗、干燥、粉碎，倒入氧化亚铁硫杆菌发酵液中在25-35℃下发酵24-30h；（2）向步骤（1）1中的发酵液过滤，除去残渣，减压浓缩；（3）将步骤（2）得到的浓缩液中加入3倍体积的95%乙醇，静置24h，4500r/min离心15min，去除上清液，收集沉淀，干燥即得发酵松茸粗多糖。本发明创造性的采用氧化亚铁硫杆菌提取松茸多糖，利用生物技术提取植物成分，不会对环境造成破坏，提取工艺简单，条件温和，松茸多糖提取率高，具有广泛的应用前景。具有广泛的应用前景。


技术研发人员：孙秋 丁瑞 耿菲菲 杨金凤 李丽琴 陈旭红 赵平舟
受保护的技术使用者：云南西草资源开发有限公司
技术研发日：2021.05.21
技术公布日：2022/1/10